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En esta Tesis se estudian distintas clases de lentes gravitacionales, trabajando con fuentes y/o lentes relativistas. Se hace una revisión de distintos objetos relativistas como ser agujeros negros, núcleos galácticos activos y agujeros de gusano, y se resumen los aspectos básicos de la teoría de lentes gravitacionales. Se muestra que algunas fuentes de rayos gama no identificadas ubicadas a altas latitudes pueden ser el resultado de la amplificación gravitacional, debido a una estrella dentro de una galaxia interpuesta, de las regiones interiores de núcleos galácticos activos débiles y distantes. Las regiones de rayos gama más interiores pueden sufrir gran amplificación, mientras que no hay amplificación para las frecuencias de radio, resultando en la ausencia de contrapartes fuertes. Se analizan los efectos de cromaticidad introducidos por el tamaño finito de la fuente cuando la lente gravitacional es un agujero de gusano. Estos efectos permiten distinguir entre los agujeros de gusano y otros objetos de materia ordinaria por medio del análisis de las curvas de luz y de los espectros. Se discute también la posibilidad de detección astronómica de dichos efectos. Se estudia el escenario donde la lente gravitacional es un agujero negro de Reissner-Nordström, obteniéndose, en el límite de campo fuerte las posiciones y las amplificaciones de las imágenes relativistas. El formalismo desarrollado se aplica al caso de un agujero negro cargado poco masivo ubicado en el halo galáctico y se compararan los resultados con los obtenidos para el caso de un agujero negro de Schwarzchild de igual masa.

El virus del dengue es un importante y creciente problema de salud pública en todo el mundo, dejando a aproximadamente la mitad de la población mundial en riesgo de infección. En la actualidad no se encuentran disponibles antivirales ni vacunas efectivas. En esta tesis se estudiaron los procesos de encapsidación y desnudamiento del virus del dengue, con el foco puesto en la proteína de cápside. Se identificaron requerimientos de residuos básicos en la zona de la α4 de cápside, detallando la necesidad de una densidad de carga positiva en la zona, así como también residuos básicos en posiciones puntuales. Esto permitió proponer un modelo en el cual tanto la región N-terminal desestructurada como la zona C-terminal contribuirían al compactado del genoma viral. Por otro lado, se identificaron por primera vez PTMs en la proteína de cápside de dengue. La presencia de distinto tipo de modificaciones en cápside aislada de células o partículas virales podría indicar una selección de la proteína que se encapsida. Por último, se estudió el mecanismo de desnudamiento de dengue y se demostró que la liberación al citoplasma del genoma que entra dentro de la partícula viral depende de la maquinaria de ubiquitinación, pero no de la actividad del proteasoma, poniendo en evidencia un paso vulnerable para el desarrollo de estrategias antivirales.

Fil:Pereyra Gonzales, Adriana S.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Fil:Hansen, Diana Silvia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

La tropomiosina A (TM A) o paramiosina es una molécula extremadamente asimétrica, de forma de bastón cuya estructura predominante es de α-hélice y cuyas propiedades han sido asociadas con la tonicidad del músculo aductor de los lamelibanquios. La TM A aislada de Aulacoaya magellanica (cholgas recogidas en Puerto Deseado, R. Argentina) cristaliza en forma de agujas muy similares a las de TM A de Pinna nobilis. Constituye casi un 1% en peso seco del músculo aductor del molusco, valor algo mayor al que se obtiene para Peeten maximus, pero bastante inferior al de Pinna. Su solubilidad en sulfato de amonio (precipita entre 21 y 34 % de saturación) así como su constante de sedimentación (3.13 a concentración de proteína igual a cero) coinciden con las de TM A de Pinna y Pecten. Su espectro de absorción presenta un máximo a 276 mμ con un coeficiente de extinción E1cm ^1%= 3.4 (280 mμ) indicativo de un muy bajo contenido en aminoácidos aromáticos. El peso molecular para el método de Archibald dió un valor de 258,000 +- 16,000 similar al obtenido por el mismo método para la paramiosina de Venus. Se asigna sin embargo, un peso molecular máximo de 130,000; los valores anotados se atribuyen a la formación de agregados. Posee grupos básicos como C-terminales. Determinaciones de aminoácidos N-terminales por el método de fluorodinitrobenceno dieron 0.6 moles de dinitrofenil-alanina por cada 130,000 g. de proteína.Por todo ello y por dejar un fragmento al ser digerida por tripsina, la proteína aislada de Aulacomya debe ser clasificada como TM A con propiedades similares a las de Pinna y Pecten. Sin embargo el valor de su viscosidad intrínseca (0.80) está muy por debajo del valor observado para las TM A de Pinna y Pecten; aproximándose mucho al de la TM B de Pecten. La variación de la velocidad de sedimentación con la concentración de proteína (0.051) es también menor que la de la TM A de Pinna (0.095). Ambos resultados sugieren una menor asimetría o hidratación molecular. La velocidad y extensión de la acción de la tripsina sobre la TM A de Pinna nobilis, Peeten maximus y Aulacomya mageilanica fué seguida por diferentes métodos a saber, nitrógeno total, contenido de α-amino nitrógeno y arginina en la fracción soluble en ácido tricloroacético, consumo de álcali y residuos N-terminales en la mezcla de digestión. Los resultados obtenidos permiten decir que el número de uniones rotas por la tripsina es aproximadamente la mitad del número de uniones susceptibles presentes en la molécula. Colaboran a sostener esta conclusión los estudios físicos y químicos realizados sobre el fragmento que queda después del tratamiento trípsico de la proteína nativa. La mayor parte de la arginina liberada durante la proteólisis está en la forma de arginina N-terminal o arginina libre desde que cerca de un 80% de la arginina total liberada por la enzima está presente como dinitrofenil-arginina en la fracción soluble del digerido tratado por fluorodinitrobenceno. La cinética de la proteólisis se estudió por dos métodos diferentes y se observó claramente la existencia de por lo menos dos o posiblemente tres reacciones simultáneas que ocurrían a diferentes velocidades. Las constantes de velocidad sugieren que una clase de uniones peptídicas es mucho más susceptible al ataque que otras. La extensión de la digestión de TM A de Pecten y Aulacomya con tripsina es muy similar a la de TM A de Pinna. Una digestiión prolongada (24 horas) de TM A de Pinna, Pecten y Aulacomya deja un fragmento de caracter proteico. El fragmento de Pinna fué estudiado en detalle. Parece ser un producto bien definido de peso molecular de alrededor de 85,000 cuya composición de aminoácidos es muy similar a la de la proteína nativa. La técnica del fluorodinitrobenceno reveló ácido glutámico como residuo N-terminal predominante, acompañado de vestigios de dinitrofenil-serina, dinitrofenil-glicina, dinitrofenil-alanina y dinitrofenil-fenilalanina. La carboxipeptidasa B reveló que contiene 8.6 residuos de lisina e igual número de residuos de residuos de arginina en la posición C-terminal. Determinaciones físico- químicas de viscosidad intrinseca y la dependencia de la velocidad de sedimentación con la concentración sugieren que la molécula se ha hecho menos asimétrica. Las propiedades de solubilidad y la carga neta del fragmento trípsico son similares a las de la tropomiosina soluble (TM B). Sin embargo, las dos proteínas difieren en su variación de viscosidad con la fuerza iónica y en su comportamiento frente a la tripsina. La acción de la tripsina sobre el fragmento tratado bajo diversas condiciones ("desnaturalización" por calor, urea, ácido tricloroacético, eliminación de metales, alta fuerza iónica, solventes orgánicos) no producen una digestión apreciable. Lo mismo ocurrió cuando se trató el fragmento con enzimas tales como quimotripsina y elastasa. La pepsina en cambio, parece destruir el fragmento en péptidos con una gran tendencia a la agregación. El material difusible al cabo de la digestión prolongada de TM A consiste en una mezcla de péptidos pequeños y arginina y lisina libres. Estos dos aminoácidos tambien forman parte de los péptidos neutros, básicos y acídicos. Se discuten los resultados sobre la base de la estructura secundaria conocida de la TM A. La acción de la tripsina no sigue un modelo simple. Aparentemente se opera un profundo cambio en la configuración de la molécula durante los primeros 15 minutos de la digestión y la estructura terciaria y la alta concentración de cargas negativas pueden ser causas de la resistencia del nuevo fragmento a la proteólisis. Cuando se digirió TM A de Pinna con quimotripsina durante 24 horasm se obtuvo una considerable cantidad de material difusible y quedó un fragmento no dializable. Este fragmento tiene una composición de aminoácidos muy similar a la de la TM A, conteniendo aún fenilalanina y tirosina. La digestión, si prosigue, es extremadamente lenta. Se realizó un estudio comparado de la digestiones prolongadas de TM A, TM V y miosina: 1) La digestión con tripsina parece ser un método simple para diferenciar TM A de TM B porque la primera deja un fragmento proteico mientras que la segunda se digiere completamente. 2) La miesina no parece incluir la molécula de TM A como parte integrante de su estructura, como fuera sugerido por algunos autores.