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tesis Acceso Abierto

Biotecnologías en práctica

Romina de los Ángeles Núñez Favre ; Ana Lorena Migliorisi

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El presente trabajo de innovación propone incorporar la resolución de situaciones problemáticas en las clases del curso Biotecnologías de la Reproducción, perteneciente al ciclo superior de la carrera de Medicina Veterinaria, UNLP. Este curso brinda la posibilidad de realizar actividades prácticas que desarrollen la inventiva, la capacidad de razonamiento crítico y el sentido práctico, integrando distintos conocimientos y experiencias previas. Entendiendo por actividad práctica aquella capaz de generar la intervención y acción en un contexto real, ante situaciones que incluyen la toma de decisiones y el tratamiento de dilemas éticos. El objetivo es promover un aprendizaje significativo a través de la resolución de situaciones concretas relacionadas con el ejercicio de la profesión. El presente proyecto se estructura en 3 bloques, el primero propone generar un espacio de reflexión entre los docentes vinculados a la asignatura sobre las prácticas de enseñanza actuales y de debate en relación con el método de resolución de situaciones problemáticas. Asimismo, pretende fomentar un espacio de trabajo grupal para el diseño, resolución y evaluación de las situaciones problemáticas a desarrollar con los estudiantes. El segundo bloque se encuentra orientado al desarrollo de las actividades con los estudiantes y su evaluación, y el tercero nuevamente trabaja con el grupo docente valorando del desarrollo de la actividad con los estudiantes. La evaluación de cada bloque tiene en consideración las características particulares de cada uno habiéndose propuesto la recopilación de material producido, la utilización de una rúbrica holística y el grupo de discusión en cada uno respectivamente. El desarrollo de este tipo de actividades genera en los estudiantes habilidades y destrezas que favorecen la autonomía en el aprendizaje. Asimismo, propician la formación de profesionales, con un alto nivel de adaptación al medio, con habilidades para comunicar sus ideas, para trabajar en grupo, para liderar y con confianza en sí mismos. Habilidades que facilitan la inserción laboral de los recién graduados, y son consideradas factores indicadores de calidad institucional.
revistas Acceso Abierto

Boletim de Indústria Animal

Identificadores:  ISSN 0067-9615 (impreso) 1981-4100 (en línea)

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Cobertura temática

revistas Acceso Abierto

Brazilian Journal of Genetics

Identificadores:  ISSN 0100-8455 (impreso) 1678-4502 (en línea)

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libros Acceso Abierto

Brésil: Un système agro-alimentaire en transition

Identificadores:  ISBN 9782907163361 (impreso) 9782371540088 (en línea)

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Cobertura temática

Sont rassemblés dans ce livre une série de travaux réalisés dans le cadre d’un programme de recherche du CREDAL, qui réunit des chercheurs et des enseignants français et brésiliens. Les textes ont été effectués dans le cadre d’un accord CAPES-COFE-CUB qui réunit ces équipes. Ceci est la suite d’autres travaux déjà réalisés, qui ont donné lieu à la publication d’articles et de livres en France et au Brésil. L’accumulation des travaux et des discussions réalisée, tout au long des trois dernières années, nous permet d’avancer dans une réflexion plus homogène, qui trouve ici une concrétisation explicative essentielle.
revistas Acceso Abierto

British Biotechnology Journal

Identificadores:  ISSN 2231-2927 (impreso)

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Cobertura temática

British Biotechnology Journal (ISSN: 2231–2927) publishes original research papers, review articles and short communications on all areas of Biotechnology including cell biology, genetics, microbiology, immunology, molecular biology, biochemistry, embryology, immunogenetics, cell and tissue culture, molecular ecology, genetic engineering and biological engineering, bioremediation and biodegradation, bioinformatics, biotechnology regulations, pharmacogenomics, gene therapy, plant, animal, microbial and environmental biotechnology. The journal also encourages the submission of useful reports of negative results. This is a quality controlled, OPEN peer reviewed, open access INTERNATIONAL journal.
revistas Acceso Abierto

Bulletin of University of Agricultural Sciences and Veterinary Medicine Cluj-Napoca. Animal Science and Biotechnologies

Identificadores:  ISSN 1843-5262 (impreso) 1843-536X (en línea)

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Cobertura temática

It is dedicated at disseminating significant research and original papers (Research Articles), critical reviews (Review Articles) and Short Communications after a rigorous review process in the broad areas of Animal Science and Biotechnologies that can serve the interest of a wide audience of scientists and professionals.
tesis Acceso Abierto

Caracterización de un modelo de ratones transgénicos hipersecretores de hCG que desarrolla tumores gonadales

Betina Gonzalez ; Susana B. Rulli

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En esta Tesis Doctoral se estudiaron distintos aspectos de la regulación del eje hipotálamo-hipófiso-gonadal (HHG) en un modelo de ratones transgénicos que produce niveles elevados de la hormona gonadotrofina coriónica humana (hCG) y desarrolla tumores gonadales (ratones hCGDE+). Se partió de la hipótesis que los elevados niveles de esteroides sexuales inducidos por la hipersecreción de hCG desde edades tempranas del desarrollo, actuarían sobre el eje HHG alterando la síntesis y secreción de hormonas y factores claves en la función reproductiva, participando directa o indirectamente en el inicio y progresión de los tumores gonadales que presentan estos ratones. En una primera etapa se caracterizó en profundidad el fenotipo de machos y hembras hCGDE+, estudiando parámetros morfológicos, bioquímicos y moleculares de la función gonadal e hipotálamo- hipofisaria. Se observaron marcadas diferencias sexuales en el modelo, donde los machos transgénicos resultaron severamente comprometidos a nivel de la regulación de la unidad hipotálamo-hipofisaria desde edades tempranas del desarrollo, mientras que las hembras mostraron alteraciones gonadales que condujeron al desarrollo de teratomas ováricos al inicio de la edad reproductiva. En una segunda etapa se aplicaron tratamientos antihormonales y gonadectomía, siendo nuestro particular interés estudiar el rol de los esteroides sexuales en el fenotipo de los machos y hembras hCGDE+. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto que la hipersecreción de hCG, a través de la estimulación de la esteroidogénesis gonadal, altera la funcionalidad del eje reproductivo y participa en el desarrollo de patologías gonadales.
tesis Acceso Abierto

Caracterización funcional de la vía del microRNA390/TAS3 en el desarrollo de órganos laterales en las raíces de la leguminosa Medicago truncatula

Karen Vanesa Hobecker ; María Eugenia Zanetti ; Flavio Antonio Blanco

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Las plantas adaptan su arquitectura de raíz como parte de la respuesta a los cambios en las condiciones ambientales, tales como disponibilidad de agua, nutrientes y estreses de tipo biótico y abiótico. En particular, las plantas leguminosas desarrollan dos tipos de órganos laterales post-embrionarios en sus raíces, las raíces laterales (RLs) y los nódulos fijadores de nitrógeno. Las RLs participan en el anclaje de la planta al suelo y en la incorporación de agua y nutrientes. Los nódulos, los cuales se desarrollan a partir de la interacción simbiótica entre las leguminosas y las bacterias del suelo conocidas como rizobios, proveen compuestos nitrogenados asimilables a la planta. Ambos órganos poseen un fuerte impacto en el crecimiento de la planta, por lo tanto la comprensión de los mecanismos moleculares involucrados en el desarrollo de las RLs y los nódulos contribuiría a mejorar y aumentar el rendimiento de cultivos de importancia agronómica, así como también a recuperar tierras pobres en nitrógeno y reducir el impacto negativo de los fertilizantes químicos sobre la biodiversidad. Los microRNAs (miRNAs) son pequeños RNAs de 21-22 nucleótidos que actúan como reguladores post-transcripcionales de la expresión génica en organismos eucariotas durante el desarrollo de nuevos órganos o en respuesta a estímulos ambientales. En los últimos años, se han descripto miRNAs cuyos niveles se acumulan diferencialmente en diferentes etapas del desarrollo de las RLs o nódulos, sin embargo sólo un número reducido de ellos han sido caracterizados en detalle y asociados con una función en la infección rizobiana y/o la organogénesis y desarrollo del nódulo. En el presente trabajo de tesis doctoral se propuso como objetivo general caracterizar la vía de miR390/TAS3 durante el desarrollo de los órganos laterales en las raíces de la leguminosa modelo M. truncatula. El miR390 se asocia a la proteína ARGONAUTA7 y posee como target al transcripto no codificante TAS3, a partir del cual se generan los trans-acting interference small RNA (tasiRNAs). Estos tasiRNAs regulan mediante un mecanismo de clivaje los niveles de los transcriptos que codifican los Factores de Transcripción Regulados por Auxinas (ARF)2, ARF3 y ARF4, por lo que han sido denominados tasiARFs. Estudios previos en nuestro laboratorio, sugirieron que la vía miR390/TAS3 estaría involucrada en la infección rizobiana y/o en la organogénesis del nódulo. Con el fin de evaluar la acumulación y la expresión espacio-temporal de los transcriptos y los pequeños RNAs que componen esta vía en diferentes estadios de desarrollo de los órganos laterales de la raíz, se llevaron a cabo reacciones de RT-qPCR y fusiones transcripcionales de los promotores a los genes reporteros gfp y uidA (también conocido como gen gus dado que codifica la proteína β-glucuronidasa (GUS)). Estos resultados mostraron que la vía miR390/TAS3 se reprime en etapas tempranas de la interacción entre M. truncatula y S. meliloti, liberando la represión post-transcripcional de ARF2, ARF3 y ARF4. A su vez, hemos identificado y validado una nueva variante del transcripto TAS3 que probablemente actúa como un target mimicry endógeno de miR390 y contribuiría a disminuir los niveles de miR390 en esta etapa. En estadios más avanzados de la interacción, la vía es re-activada quedando restringida a la zona apical del nódulo. Para indagar sobre la función de la vía se generaron raíces transgénicas que sobreexpresaban el precursor de miR390b (OX390) o un target mimicry de miR390 (MIM390) capaz de secuestrar al miR390 y bloquear su acción. Además de la estrategia de expresión target mimicry, se utilizaron líneas mutantes en el gen AGO7, en las cuales la vía miR390/TAS3 se encuentra inactiva. La evaluación del fenotipo asociado a la arquitectura de raíz y a la nodulación en las plantas OX390, MIM390 y ago7 reveló que la vía miR390/TAS3 actúa como un regulador positivo sobre la elongación de las RLs, posiblemente como consecuencia del incremento de la señalización y/o respuesta a auxinas, y como un módulo represor de la infección rizobiana y el desarrollo de nódulos. A su vez, la inactivación de la vía miR390/TAS3, ya sea en las raíces MIM390 o ago7, resultó en el desarrollo de nódulos que presentan una distribución espacial y morfología alterada. El análisis de la acumulación de transcriptos, previamente descriptos como marcadores de la nodulación, en las raíces OX390, MIM390 y ago7 permitió establecer una correlación entre los niveles de ARF2, ARF3 y ARF4 y dos factores de transcripción de la familia GRAS designados NSP (Nodulation Signaling Pathway)1 y NSP2, sugiriendo que ambos factores de transcripción serían los candidatos por medio de los cuales la vía de miR390/TAS3 y la vía de señalización de la nodulación se intersectan. Con el objetivo de identificar genes cuyos niveles de acumulación se encuentran afectados directa o indirectamente por la sobreexpresión de miR390, se caracterizó el transcriptoma de las raíces OX390 en presencia y ausencia del rizobio mediante RNA-seq. El análisis in silico de los datos generados permitió identificar genes con expresión diferencial regulados negativamente o positivamente en respuesta a la sobreexpresión de miR390. Entre estos, se destacan genes marcadores de nodulación, factores de transcripción miembros de la familia LOB, genes involucrados en la respuesta y señalización de hormonas y genes relacionados con la traducción. Los resultados obtenidos en el presente trabajo de tesis doctoral han permitido avanzar en el conocimiento sobre la regulación post-transcripcional de genes durante dos procesos de desarrollo con relevancia ecológica y agronómica. Este conocimiento podría ser aplicado en etapas futuras a la optimización de incorporación de nutrientes y nitrógeno en las plantas, contribuyendo a mejorar y aumentar el rendimiento de los cultivos de leguminosas.
tesis Acceso Abierto

Clonado, organización genómica y expresión de la glutamato dehidrogenasa NADP dependiente (GluDH-NADP) de Trypanosoma Cruzi

Patricia Alejandra Barderi ; Juan José Cazzulo

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Epimastigotes de Trypanosoma cruzi, el protozoo parásito que causa la enfermedad de Chagas, contienen dos glutamato dehidrogenasas diferentes (GluDHs), NAD y NADP dependientes. En este sentido los parásitos se asemejan a las bacterias, hongos y plantas y se diferencian de animales superiores que poseen sólo una enzima inespecífica para coenzima. La GluDH-NADP dependiente (EC 1.4.1.4) es un hexámero formado por subunidades idénticas de 47kDa, mostrando ser muy semejante a la correspondiente enzima de E. coli en cuanto a la secuencia de aminoácidos del extremo N-terminal. La forma NADP dependiente podría ser biosintética mientras la forma NAD dependiente podría tener un rol catabólico. La GluDH-NADP dependiente fue purificada a homogeneidad proteica a partir de epimastigotes de Trypanosoma cruzi mediante un protocolo mejorado que incluye cromatografía de afinidad en Blue Sepharose. Se determinó la secuencia de aminoácidos de 11 péptidos internos, obtenidos por digestión con BrCN, tripsina, endopeptidasa Arg-C o endopeptidasa Lys-C. Dichas secuencias, correspondientes aproximadamente al 30% de la molécula, mostraron una identidad del 74% con la enzima similar de E. coli. Utilizando un suero policlonal monoespecífico producido contra la proteína purificada se realizó el rastreo de una biblioteca de expresión genómica de T. cruzi en el vector λgt11. De esta forma pudo seleccionarse un único clon conteniendo 270 pb correspondientes al extremo 3' del gen que fue secuenciado completamente. Reacciones de PCR usando iniciadores construídos de acuerdo a la secuencia de aminoácidos del extremo N-terminal de la enzima madura y con la secuencia del clon correspondiente al extremo C-terminal pudieron clonarse y secuenciarse dos ORFs completos (TcGluDH1 y TcGluDH2). Las secuencias obtenidas muestran mayor homología con la enzima de Escherichia coli (70-72% de identidad), y menor homologia (52-57%)con la correspondiente enzima de eucariontes inferiores. A partir de la secuencia de ADN se predijo una proteína que contiene 446 aminoácidos. Usando el gen TcGluDH1 como sonda se realizaron experimentos de Southern blot, usando fragmentos de restricción o cromosomas enteros separados por electroforesis en campo pulsado, indicando variaciones entre los diferentes clones y cepas de parásitos, sugiriendo la presencia de varios genes codificando para la GluDH-NADP. La expresión de la enzima resultó ser diferente en los distintos estadíos del desarrollo. La forma epimastigote presenta mayor cantidad de ARNm y proteína (a juzgar por la actividad enzimática y ensayos de Western blot), en comparación con otras formas del parásito. El gen clonado TcGluDH1 fue expresado en E. coli, produciendo una enzima recombinante activa con constantes cinéticas similares a la enzima natural. A pesar de que las evidencias bioquímicas sugieren que la enzima se localiza tanto en el citoplasma como en la mitocondria, nuestros resultados indican una localización exclusivamente citosólica para la GluDH-NADP.
revistas

Compost Science and Utilization

Identificadores:  ISSN 1065-657X (impreso)

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