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The Kaposi's Sarcoma-associated herpesvirus (KSHV-HHV-8)is a γ-2 herpesvirus that is implicated in the pathogenesis of Kaposi's sarcoma and of primary effusion B-cell lymphomas (PELs), it encode putative oncogenes, and genes that may cause Kaposi's sarcoma lesions by stimulating angiogenesis. The G-protein-coupled receptor encoded by an open reading frame (ORF 74) of KSHV is expressed in Kaposi's Sarcoma lesions and in PELs, and stimulates signaling pathways linked to cell proliferation in a constitutive (agonist-independent) way. Here we show that signaling by this G-Protein Coupled Receptor leads to cell transformation an tumorigenicity, and induces a switch to an angiogenic phenotype mediated by vascular endothelial growth factor (VEGF), an angiogenesis and Kaposi's-spindle cell growth factor. We find that this receptor can activate ( in HEK293T) two protein kinases, JNK/SAPK and p38MAPK, by triggering signaling cascades like the ones induced by inflammatory cytokines that are angiogenic activators and mitogens for Kaposi's sarcoma-cells and B cells. Although this is a suggestive result, when we express KSHV-GPCR in different cell types it activate different signaling cascades, and induces different phenotypes. Using pathway specific dominant negatives and pharmacological inhibitors we show that, in the cell line NIH3T3, the activation of JNK and p38 play a major rol in the molecular mechanism of KSHV-GPCR induced cell transformation. Endothelial cells play a central rol in kaposi's sarcoma pathogenesis. KSHV infects endothelial cells and spindle-like cells, of suspected endothelial origin, wich are present in the kaposi's sarcoma lesions. Therefore, in the context of viral infection, KSHV-GPCR is expressed in endothelial cells. As the expression of KSHV-GPCR has different biological and biochemical effects in different cell types we decide to study the consecuences of KSHV-GPCR expression in human primary endothelial cells. KSHV-GPCR expression in endothelial cells induce strong morphologic changes, modifications in the citoskeleton structure, secretion of metaloproteases and resistence to serum starvation mediated by activation of the PI3K/AKT pathway's. All those changes are reminiscent of the transformed phenotype. Usually, the expression of transforming oncogenes in primary cells induces shortage of telomeres, premature senescence, and cell death. In sharp contrast the expression of KSHV-GPCR in primary endothelial human cells stabilize telomere length, by an alternative mechanism independent of telomerase activity (Alternative Lengthening of Telomeres or ALT ), and inmortalize endothelial cells. To our knowledge this is the first demostration that a protein encoded by KSHV is able to inmortailize primary human cells. Thus using a KSHV oncogenic protein we created a new inmortilized endothelial cell line that we call Ecs-KSGPCR. As predicted by the multistep carcinogenesis hypotesis, our preliminary experiments suggest that the mechanisms of Terminal Proliferation Arrest (TPA) are not completelly supressed by KSHV-GPCR and that additional oncogenic events are necessary in order to fully transform human primary endothelial cells. Further research will determine wether other KSHV's oncogenes can cooperate oncogenicaly with KSHV-GPCR. KDR/VEGFR-2 and Tie-2 are endothelial specific tyrosine kinase receptors that play key roles in vascular biology. These two receptors regulate cell survival and proliferation of endothelial cells during angiogenesis, as a consequence of this they appear to be minimally expressed in quiescent endothelium in vivo, and they are down regulated after a few passages, in vitro, of primary endothelial cells. Surprisingly KDR and Tie-2 are overexpressed in long term cultures of Ecs-KSGPCR. Altough in this work we show that the sustained expression of those receptors is functional, further experiments are required to determine if they play any rol in the inmortalization process. We conclude that KSHV-GPCR is a viral oncogene that can exploit cell signaling pathways to induce oncogenesis and angiogenesis in KSHV-mediated oncogenesis.

El objetivo del presente trabajo fue estudiar el receptor nicotínico del órgano eléctrico de Discopyqe tschudii y sus propiedades funcionales en membranas reconstituídas. En tal sentido se comprobó la existencia de sitios que fijan α-bungarotoxina y de influjo de Rb+ estimulado por carbamilcolina en preparaciones de membranas del órgano eléctrico de D. tschudii. La respuesta fue bloqueada por curare y se inactivó por incubación previa de las membranas con el agonista (desensibilización). El material fue extraido con colato de sodio y se purificó por cromatografía de afinidad utilizando bromoacetilcolina comoligando. La actividad específica del material purificado fue, en promedio, de 4,7 nmoles de α-bungarotoxina/mg proteína. El análisis de dicho material por electroforesis en geles de poliacrilamida en presencia de SDS de dicho material reveló la presencia de cuatro bandas de PM 41.200, 49.500, 60.000 y 66.300. El receptor purificado fue incorporado a liposomas de lecitina de soja (asolectina). Las propiedades funcionales del receptor se preservaron en las muestras reconstituldas. Esto es: capacidad de fijación de ligandos, influjo de cationes estimulado por carbamilcolina, la desensibilización de la respuesta y las transiciones de afinidad para agonistas que se correlacionan con este último fenómeno. Se demostró además, como habia sido observado por métodos electrofisiológicos en preparaciones neuromusculares y por métodos bioquímicos en fragmentos de membranas de órgano electrico, que el Ca2+ acelera la velocidad de inactivación (desensibilización) del receptor reconstituido en liposomas. Estas observaciones sugieren la presencia de un receptor colinergico de tipo nicotínico en el órgano electrico de D. tschudii, con características bioquímicas y funcionales similares al receptor de las especies del género Torpedo. Esto permite considerar al órgano electrico de D. tschudii como una fuente para el estudio de este receptor. El receptor nicotínico purificado y reconstituído en líposomas fue el sistema elegido para estudiar el mecanismo de acción de la droga amantadina. Esta droga, utilizada para el tratamiento de la enfermedad de Parkinson y para prevenir ciertas infecciones virales, produce, ademas, un bloqueo de la transmisión neuromuscular uniéndose al receptor nicotínico en un sitio distinto del sitio de unión de la acetilcolina. En el presente trabajo se confirmó que la amantadina es un bloqueante no competitivo del receptor nicotínico ya que no afecto la fijación de α-bungarotoxina en equilibrio pero si produjo un bloqueo del influjo de cationes estimulado por carbamilcolina. A través de la determinación del influjo de Rb+ a membranas expuestas a carbamilcolina por distintos tiempos se observo que la amantadina aceleró la velocidad de inactivación de la respuesta (desensibilización) inducida por el agonista. La amantadina no indujo dicho fenómeno por si misma. La aceleración de la velocidad del proceso de desensibilización seria entónces uno de los mecanismos por los cuales la amantadina ejerce el bloqueo de la transmisión colinérgica. Otro de los objetivos del presente trabajo fue estudiar la aplicación de una nueva tecnica para la reconstitución del receptor nicotinico y comparar el funcionamiento del receptor en liposomas preparados bajo distintas condiciones experimentales. La técnica empleada fue la de precipitación con polietilenglicol, que ha sido utilizada en la reconstitución del receptor muscarinico del corazón y el receptor α2-adrenérgico del cerebro de mamíferos. Se observó que el receptor nicotínico se incorporó a los liposomas y que un 80 % de las moleculas se orientaron correctamente en la membrana. La fijación en equilibrio de α-bungarotoxina reveló que se produjo una perdida de 50-55% de los sitios durante el procedimiento de reconstitución. Los valores de la constante de velocidad de fijación de α-bungarotoxina de segundo orden (kt) y de la constante de baja afinidad para carbamilcolina (K1) fueron comparables a los observados para el receptor reconstituido por el método de diálisis. Sin embargo, el receptor reconstituldo por el método de precipitación con PEG exhibió un minimo inílujo de Rb+ estimulado por carbamilcolina y no manifestó transiciones de afinidad. Cuando la preparación de PEG se purificó, mediante el empleo de éter etílico, para eliminar las impurezas presentes en las muestras comerciales de PEG, el receptor reconstituido exhibió transiciones de afinidad e influjo de cationes estimulado por carbamilcolina. El análisis de los lípidos presentes en las muestras reconstituldas reveló que los proteoliposomas preparados por precipitación con PEG presentaron un contenido mayor de ácidos grasos libres que los preparados por el método de diálisis. Los resultados sugieren que los efectos observados pueden deberse a alguna de las impurezas presentes en las preparaciones de PES y/o a la presencia de ácidos grasos libres provenientes, probablemente, de la hidrólisis de la asolectina. Con el objeto de profundizar en el estudio del fenómeno de la desensibilización del receptor nicotínico, se estudió el efecto de un pentapeptido, denominado timopentina, sobre las propiedades funcionales del receptor nicotínico reconstituído en liposomas. Se piensa que dicho pentapeptido corresponde al sitio activo de la hormonatimica timopoyetina. La timopoyetina y la tímopentinas ademas de sus efectos inmunológicos, producen un bloqueo de la transmisión neuromuscular. En el presente trabajo se muestra que la timopentina no modificó la fijación en equilibrio de α-bungarotoxina pero produjo un bloqueo de la respuesta del receptor en un rango de 10-10M a 10-4M. Más aún se observó que la timopentina aumento la velocidad de desensibilización del receptor y que dicho fenómeno se incrementó en presencia de Ca2+. Estas observaciones corroboran el efecto que sobre la transmisión neuromuscular tiene la timopoyetina y sugieren que la timopentina o péptidos relacionados podrian modular dicha transmision.

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La irradiación con particulas energéticas es una de las técnicas mas utilizadas para introducir. en forma controlada, defectos, en las redes cristalinas metalicas. La presencia de defectos altera sensiblemente las propiedades fisicas de los materiales. Si se eligen obserables físicos lo suficientemente sensibles a estas estructuras de defectos, se puede obtener información acerca del tipo, de la configuración espacial, de la concentración, y de las cineticas de reacción entre los mismos. La aplicación de tratamientos térmicos postirradiación permite proprocionar, en forma gradual, las energias de activacion necesarias para lograr la recombinación de los defectos y la consecuente recuperación de la propiedad fisica elegida. De este modo se obtienen las llamadas “Etapas de Recuperación" del observable fisico en cuestión, cuyos rasgos generales, si bien son comunes a todos los metales, identifican en forma univoca a cada uno de ellos. El tema del presente Trabajo de Tesis es: “El Recuperado Térmico (T > 450 K) de los Aglomerados de Defectos producidos por Irradiación Neutrónica a Bajas Dosis y a 77 K en Cu de alta pureza, a través de la Tensión Critica Resuelta de Corte, medida a 77 K". El recuperado térmico mencionado corresponde a la ultima etapa de recuperación del Cu, la Etapa V, la cual ha sido muy poco estudiada. La misma se asocia generalmente a la disociación de los aglomerados de vacancias con la aniquilación sistemática de los aglomerados de intersticiales por vacancias térmicas. Pero los detalles de este proceso no estan bien establecidos y su esclarecimiento, desde un punto de vista basico, es de fundamental importancia para la comprensión y predicción de los fenómenos asociados a las inestabilidades estructurales que ocurren en los materiales expuestos a severos entornos de radiación. En este trabajo, los aglomerados de defectos se introducen en las probetas de tracción monocristalinas de cobre, mediante la irradiación neutronica en el criostato instalado dentro del reactor RA-1 de la CNEA, a 77 K y dosis inferiores a la de saturación (4.5 x 10^6 n/cm^2). Esta elección de las condiciones experimentales asegura la no superposición de las cascadas de desplazamientos atómicos y la estabilidad de los defectos creados a la deformación plastica (ausencia de canalización de dislocaciones). La Tensión Critica Resuelta de Corte medida a 77 K. TCRC-k, es un observable físico ideal para el estudio de la Etapa V Los aglomerados de defectos actuan como obstáculos al movimiento de las dislocaciones dando lugar a un enorme incremento de esta propiedad, conocido como fenomeno de endurecimiento El 75 % del daño introducido durante la irradiaicón es recuperado en la Etapa V. medida por esta propiedad, mientras que sólo el 15% es retenido en esta Etapa cuando la recuperación se mide a traves del incremento de la resistividad electrica A partir de los recuperados isócronos e isotérmicos de la TCRC-k en el presente trabajo, se pudo establecer, por primera vez y con esta técnica, la existencia de, al menos, tres subetapas de recuperacion ubicadas en los intervalos de temperatura: ~ 220-250 °C (Va), ~ 250-290 °C (Vb) y ~ 290-325 °C, demostrando en forma concluyente que el proceso de disolución de los aglomerados que tiene lugar en esta etapa es multiactivado.

La hipótesis que se ha planteado y que entendemos factible de corroborar, resulta ser aseverar -con el mayor grado de cientificidad posible- si la doctrina germánica del recurso indiferente tiene o no existencia en el ámbito de la Provincia de Buenos Aires. Para ello resultará esencial dilucidar el significado, contenido y alcance de tal doctrina foránea en su seno jurídico, evaluando los pilares neurálgicos de dicho sistema procesal. Superado tal valladar, haremos lo propio desde un enfoque referido al sistema recursivo local, con la constante inconsistencia que supone la coexistencia del sistema dispositivo por un lado, y el principio iuria novit curiae por el otro, agudizando el campo de actuaciones de ambos concretamente en el estadio recursivo extraordinario. A su turno, inmiscuiremos nuestro objeto de estudio en el sistema recursivo de la ley de enjuiciamiento civil alemán, para desde allí, desembarcar directamente en el abordaje de la doctrina del recurso indiferente. Considerando la similitud de institutos, haremos lo propio con el instituto de la fungibilidad recursiva brasileña, con sus aristas procedimentales, sin dejar de referirnos al tratamiento del sistema uruguayo. Desde luego, analizaremos cuáles han sido los antecedentes doctrinarios y jurisprudenciales nacionales más relevantes de lo que ha sido su intento de recepción vernácula; pasando revista de las legislaciones procesales locales. Arribaremos al meollo de la investigación, centrándonos en el análisis que ha hecho del instituto la Suprema Corte de Justicia de la Provincia de Buenos Aires, haciendo hincapié en su doctrina más saliente en el tema. Culminando el presente trabajo, tomando la investigación desarrollada y partiendo de datos objetivos de la realidad procesal local, dedicaremos un capitulo a la búsqueda de una respuesta a la incógnita de si se encuentra vigente o no, en el ámbito del Tribunal Cimero de la Provincia de Buenos Aires, la doctrina del recurso indiferente. Por último, una conclusión en la cual se pretenderá resumir de la manera más aséptica posible, el resultado de nuestra investigación y nuestra opinión sobre la pregunta de investigación planteada.

En los humedales del Bajo del Paraná, el drenaje de los suelos, endicamiento y forestación constituyen el cambio de uso más característico. A partir del muestreo de suelos y vegetación en parcelas pareadas de pastizales anegadizos y plantaciones forestales que los reemplazaron tras el drenaje de los suelos, se exploraron los cambios en el volumen y contenido de materia orgánica del suelo y el balance del ecosistema de carbono, nitrógeno (N), fósforo (P), potasio, calcio y magnesio. El estrato de suelo orgánico original se redujo y el suelo mineral perdió volumen (-82 por ciento de porosidad en 0-10 cm de profundidad). Contrarrestó parcialmente estos efectos el aumento del contenido de materia orgánica (1,3 Mg C ha(-1)año(-1)favorecidos por el ingreso de raíces de álamos al suelo drenado (hídrico y libre de raíces en los pastizales). Comparadas con los pastizales, las forestaciones acumularon más carbono y nutrientes en la biomasa aérea y menos en broza y raíces. El balance final fue neutro para carbono y nitrógeno y negativo para fósforo (-0,7 Mg ha (-1)principalmente en los estratos profundos de suelo. Para el calcio, potasio y magnesio las ganancias en el suelo profundo, posiblemente asociadas a los cambios en el balance hídrico (mayor consumo freático, menor aporte superficial), determinaron balances positivos. La relación N/P en hojas de pastos y álamos (7 vs. 18)indicó el cambio de condiciones de limitación por nitrógeno a fósforo. En poco más de una década el drenaje, endicamiento y forestación de pastizales anegadizos redistribuyó el almacenamiento de carbono y nitrógeno sin afectar su magnitud, cambió las limitaciones nutricionales, y generó cambios físicos y químicos en los suelos. Estas modificaciones pueden acentuarse en plazos más largos influenciando la productividad y los servicios ecosistémicos de estos humedales.