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La producción de proteasas extracelulares por microorganismos es conocida desde hace tiempo; y en un principio, esa capacidad fue utilizada como un método de identificación de especies microbianas. Para la aplicación industrial de proteasas se recurrió inicialmente a preparados enzimáticos, en su mayoría provenientes de tejidos animales y vegetales . El gran incremento en la demanda de estas enzimas se produjo a partir del año 1960 como consecuencia de su aplicación como aditivo en los detergentes utilizados a nivel industrial y doméstico. El éxito logrado por la incorporación de enzimas a detergentes se alcanzó cuando se encontraron enzimas microbianas, fundamentalmente las producidas por bacterias del genero Bacillus, que reunían ciertas propiedades como gran estabilidad en el rango de pH y temperatura de aplicación de dichos preparados y elevada actividad en presencia de los componentes de los detergentes, algunos de los cuales presentan una marcada inhibición sobre ciertas proteasas. Es importante también considerar la efectividad y capacidad para eliminar manchas a bajas concentraciones, y la posibilidad de tener bajos costos de producción con respecto a los métodos clásicos de obtención a partir de células animales y vegetales. La gran demanda comercial de estas enzimas condujo a un rápido desarrollo sobre todo de la producción en gran escala, este incentivo tuvo una rápida respuesta en los estudios realizados sobre los diferentes aspectos biotecnológicos que hacen a la producción de estas enzimas como lo demuestran los numerosos trabajos aparecidos después de 1960. Si bien la bibliografía es muy abundante en lo que se refiere a métodos de aislamiento, selección de cepas productoras, y estudios de las propiedades de las diferentes enzimas producidas por microorganismos, no se encuentra mucha información sobre la composición de medios de cultivo y las condiciones tecnológicas de proceso de obtención de dichas enzimas. En base a las consideraciones anteriores se programaron estudios sobre la influencia de los nutrientes del medio de cultivo y variables de operación sobre la producción enzimática, con el fin de establecer las condiciones de optimización de proceso. El trabajo tiene por fin ademas, colaborar al desarrollo de la industria en nuestro país para la producción de proteasas que presentan un amplio espectro de aplicación y de utilización. Antes de considerar los estudios realizados donde se consignan los resultados obtenidos, se hará referencia a las principales propiedades de estas enzimas y sus principales aplicaciones, considerando especialmente los tipos de enzima y los microorganismos que la producen.

Fil:Marconi, Mario Carlos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

El aporte central de esta tesis es la definición de un nuevo método capaz de generar un conjunto de reglas de clasificación difusas de fácil interpretación, baja cardinalidad y una buena precisión. Estas características ayudan a identificar y comprender las relaciones presentes en los datos facilitando de esta forma la toma de decisiones. El nuevo método propuesto se denomina FRvarPSO (Fuzzy Rules variable Particle Swarm Oprmization) y combina una red neuronal competitiva con una técnica de optimización basada en cúmulo de partículas de población variable para la obtención de reglas de clasificación difusas, capaces de operar sobre atributos nominales y numéricos. Los antecedentes de las reglas están formados por atributos nominales y/o condiciones difusas. La conformación de estas últimas requiere conocer el grado de pertenencia a los conjuntos difusos que definen a cada variable lingüística. Esta tesis propone tres alternativas distintas para resolver este punto. Uno de los aportes de esta tesis radica en la definición de la función de aptitud o fitness de cada partícula basada en un ”Criterio de Votación” que pondera de manera difusa la participación de las condiciones difusas en la conformación del antecedente. Su valor se obtiene a partir de los grados de pertenencia de los ejemplos que cumplen con la regla y se utiliza para reforzar el movimiento de la partícula en la dirección donde se encuentra el valor más alto. Con la utilización de PSO las partículas compiten entre ellas para encontrar a la mejor regla de la clase seleccionada. La medición se realizó sobre doce bases de datos del repositorio UCI (Machine Learning Repository) y tres casos reales en el área de crédito del Sistema Financiero del Ecuador asociadas al riesgo crediticio considerando un conjunto de variables micro y macroeconómicas. Otro de los aportes de esta tesis fue haber realizado una consideración especial en la morosidad del cliente teniendo en cuenta los días de vencimiento de la cartera otorgada; esto fue posible debido a que se tenía información del cliente en un horizonte de tiempo, una vez que el crédito se había concedido Se verificó que con este análisis las reglas difusas obtenidas a través de FRvarPSO permiten que el oficial de crédito de respuesta al cliente en menor tiempo, y principalmente disminuya el riesgo que representa el otorgamiento de crédito para las instituciones financieras. Lo anterior fue posible, debido a que al aplicar una regla difusa se toma el menor grado de pertenencia promedio de las condiciones difusas que forman el antecedente de la regla, con lo que se tiene una métrica proporcional al riesgo de su aplicación.

Introducción. Riboflavina. 1. Consideraciones generales. 2. Métodos generales de preparación. 3. Métodos biológicos de preparación. 4. Métodos de valoración:químicos,físico-químicos y biológicos. 5. Parte experimental. I. Fermentación a) Selección de la cepa de producción. b) Selección de un medio básico. c) Variables para aumentar el rendimiento en Riboflavina. 1) Físicas: pH; temperatura; agitación. 2) Fuente de Carbono. 3) Fuente de Nitrógeno. 4) Factores minerales. 5) Factores accesorios: P.A.B.A.; ácido naftllacótico; ácido nicotínico. II. Titulación microbiológica Puesta a punto del método de titulación con Lactobacillus casei. III. Purificación y concentración de Riboflavina a) Ensayos de adsorción. 1) con Carbón 2) con Bentonita. 3) con solución saturada de ácido benzoico en etanol. b) Elución de los adsorbatos por diferentes disolventes. Alcohol-agua; acetona agua; pirldina agua; ácido cítrico a distintos pH y otros. 6. Conclusiones. 7. Bibliografía.

La enfermedad de Chagas es reconocida como la principal endemia de América Latina, afectando a aproximadamente a 2 millones de personas sólo en Argentina. El diagnóstico serológico, tiene su origen en Argentina en 1913, desde entonces el avance ha sido enorme. En la actualidad, los látex poliméricos son aplicados en “tests de aglutinación”, que permiten detectar pequeñas concentraciones de antígenos o anticuerpos en diferentes fluidos biológicos. Esta Tesis trata la producción de partículas de látex sensibilizadas con proteínas antigénicas del T. cruzi, de manera que puedan actuar como reactivo de inmunodiagnóstico para detectar la Enfermedad de Chagas. Se sintetizaron y caracterizaron partículas “core-shell” mediante copolimerización en emulsión de estireno y ácido metacrílico; y de estireno y acroleína dietil acetal sobre una siembra monodispersa de poliestireno. Se sintetizaron además, proteínas antigénicas del T. cruzi a partir de la tecnología del ADN recombinante, y se las utilizó para la sensibilización de las partículas de látex. Se estudió la adsorción física de las distintas proteínas a diferentes pH sobre partículas de poliestireno y posteriormente la unión covalente de las mismas sobre la superficie de las partículas funcionalizadas. Finalmente, se aplicaron los distintos complejos látex-proteína en ensayos de inmunoaglutinación. Se utilizaron sueros controles para determinar las condiciones que permitan la mayor diferenciación entre un suero positivo y un suero negativo. Posteriormente, los complejos se enfrentaron a un panel de sueros con el objeto de analizar la sensibilidad y especificidad del ensayo. La reacción de inmunoaglutinación se siguió por turbidimetria.

Un análisis general acerca de las tendencias del mercado de bebidas en los últimos años, marca un cambio en las preferencias del consumidor hacia productos no alcohólicos, naturales y saludables, con aromas y sabores innovadores. La yerba mate (YM) y el cassis (Cs) son considerados fuentes de compuestos bioactivos como los polifenoles, antocianinas, ácido ascórbico, entre otros; los potenciales beneficios para la salud de tales compuestos han impulsado nuevos desarrollos en la industria alimentaria, aumentando la demanda de productos con alta palatabilidad, requisito crítico para cualquier alimento con alto contenido de polifenoles. La obtención de productos en polvo por liofilización permite aumentar la vida útil de los alimentos y conservar mejor las propiedades como el color, sabor, aroma, textura, actividad biológica, y una mayor capacidad de rehidratación. El uso de esta técnica para obtener bebidas en polvo a partir de Cassis e infusiones de yerba mate, permitiría llevar sus ventajas nutricionales a un mayor número de consumidores. El alto contenido de azúcar presenta dificultades técnicas debido a la baja temperatura de transición vítrea de algunos componentes (azúcares de bajo peso molecular y ácidos orgánicos); y la alta higroscopicidad genera pegajosidad, colapso y problemas de fluidez durante el procesamiento y almacenamiento. La adición de agentes coadyuvantes como la maltodextrina antes del secado puede ayudar a reducir esos problemas. Para obtener productos en polvo de óptima calidad y estables durante el almacenamiento, se deben considerar sus propiedades de sorción. Se desarrollaron diferentes formulaciones a partir de polvos liofilizados de YM/Cs/maltodextrina/ con adición de azúcar/edulcorante y aromas; evaluadas en diferentes etapas, la primera de estas incluyó la evaluación de la aceptabilidad, atributos de diagnóstico e intensión de compra de diferentes formulaciones de una nueva bebida en polvo. Se analizó el efecto de la exposición repetida, basado en la hipótesis de que el consumo repetido puede contribuir a una calificación más positiva de la bebida y a un aumento en la intención de compra. En una etapa posterior, se aplicaron diferentes metodologías sensoriales para lograr los ajustes en la formulación para satisfacer los requerimientos del consumidor, mejorando la aceptabilidad y optimizando los atributos sensoriales. Finalizando con la caracterización sensorial de la bebida en polvo, por medio de técnicas de cuantificación estáticas, perfiles dinámicos y el análisis del efecto de la ingesta múltiple sobre su aceptabilidad simulando condiciones de un consumo habitual. Se realizaron estudios de almacenamiento a diferentes temperaturas y humedades relativas, determinando las propiedades de sorción por medio del modelado de diferentes ecuaciones(GAB, Oswin, Halsey y Caurie); evaluando los cambios debidos a la humedad relativa de almacenamiento sobre las propiedades físicas y químicas de las formulaciones en polvo; se determinó el diagrama de estado para la fase amorfa y los valores críticos de almacenamiento (awC y WcC) y se estudió el efecto de la digestión gastrointestinal sobre los compuestos bioactivos y la actividad antioxidante mediante una simulación (in vitro) de 2 etapas, una etapa gástrica y una etapa intestinal. Fue posible obtener una bebida instantánea saludable de alta palatabilidad a partir de infusiones de Yerba mate y Cassis, permitiendo que las ventajas nutricionales de estos ingredientes lleguen a un mayor número de consumidores. Se logró determinar la concentración óptima de la infusión YMI, ajustando el atributo astringencia; además de establecer el contenido de azúcar, edulcorante y aroma “Fruto rojos” comercial necesarios para potenciar los atributos de dulzor y aroma, de gran importancia para la aceptabilidad del producto final. Se caracterizó el perfil sensorial del producto final, el cual se destacó por una apariencia atractiva, de color y brillo intensos, pronunciado aroma a frutos rojos y buen balance entre el dulzor y la acidez. El uso de las metodologías dinámicas permitió conocer el perfil sensorial dinámico de la bebida final, caracterizada por dos atributos dominantes en el tiempo “Frutos rojos y Dulzor” y una alta aceptabilidad global sostenida durante las diferentes ingestas. Estos resultados indican una adopción exitosa por parte de los consumidores. Las propiedades de sorción por medio del modelado de diferentes ecuaciones, indicaron que en los casos estudiados GAB fue el modelo que mejor representa el comportamiento de sorción de agua de las diferentes bebidas en polvo. El producto de estudio presentó una alta estabilidad en sus características físicas (color, solubilidad; morfología) y químicas (contenido de polifenoles, antocianinas, ácido ascórbico y actividad antioxidante) cuando se expuso a humedades relativas entre 11 y 33%; superando el 43.2% HR fueron apreciados cambios de la microestructura y la disminución en la concentración de los compuestos bioactivos y la actividad antioxidante, provocando una pérdida de la calidad nutricional. Un almacenamiento a 76%HR produjo la completa degradación de la estructura del polvo formando una goma. Las condición de almacenamiento para garantizar el estado vítreo y minimizar el deterioro físico del producto por apelmazamiento y la pérdida de la calidad nutricional debido al deterioro en los compuestos bioactivos y la baja en la actividad antioxidante fueron: T≤20ºC; %HR<43.2% y Wc< 0.051 kg agua/ kg m.s. Se sugiere el uso de un envasado con materiales de baja permeabilidad al vapor de agua para extender la vida útil del polvo. La simulación de digestión in vitro evidenció un fuerte efecto sobre los compuestos bioactivos, los cuales alcanzaron niveles muy bajos durante las fases gástrica e intestinal; sin embargo la actividad antioxidante permaneció alta, sugiriendo que durante el proceso de digestión pueden tener lugar transformaciones de los bioactivos a otras formas con alta actividad antioxidante. En el análisis realizado durante este estudio solo se expone las posibles concentraciones bioaccesibles para ser absorbidas.

1°) En el presente trabajo se ha puesto a punto un método de obtención de vanillina a partir de aserrín de madera (Araucaria araucana) previamente desresimificado con alcohol-benzol (2:1) siguiendo en lineas generales el trabajo descrípto por Freudenberg que consiste en la oxidación de aserrín de pino en medio alcalino en autoclave, a una presión que va de 6 a 8 at., utilizando como oxidante el nitrobenceno, con posterior extracción del producto con benceno a baja presión. En el presente trabajo se reemplazó el oxidante insoluble (nitrobenceno por un oxidante soluble (nitrobencen sulfonato se sodio) con lo que se evita el uso de un agitador. La extración de la vanillina se efectuo con eter sulfúrico, y del extracto eterno con eter de petroleo a 80°C, obteniéndose los cristales por enfriamiento del solvente. 2°) Los resultados obtenidos con el aserrín concuerdan en general con los del autor citado, obteniéndose con el bagazo tambien valores positivos. 3°) Se prepararon los derivados más conocidos de la vanillina oxima y 2-4-dinitrofenilhidrazona, encontrándose que el más conveniente para su dosaje es la hidrazona, además se comprobó que el punto de fusión de este derivado coincide con los datos expuestos por el Dr Montes (Anales de la A.Q.A.,273,1952), difiriendo en ambos casos del punto de fusión del mismo derivado hallado en tablas. 4°) Los mejores rendimientos obtenidos para el aserrín de pino varian entre 15,83% y 15,73% respecto de la lignina del mismo determinada por el método de la U.S.Forest Products Laboratory; mientras que en condiciones similares el bagazo de caña de azucar solo dió entre 8,87% y 3,58% respecto de la lignina (en ambos casos la lignina está referida a madera en polvo seca y desrecinificada). 5°) En todos los casos las cantidades de oxidante usadas para el aserrín de pino fueron suficientes para dar rendimientos de vanillina superiores a los que se obtuvieron sin la presencia de dicho compuesto, siendo el peso usado para las condiciones óptimas menor que el calculado por equivalencia al valor de nitrobenceno indicado por Freudenberg. 6°) No fué posible aplicar la titulación potenciométrica con un oxidante como el NO2Na para calcular el rendimiento en vanillina de la operación, por intermedio del compuesto reducido que debería encontrarse en los líquidos residuales (ácido metanílico o su sal sódica). 7°) En base a los dates suministrados por la literatura, se supone que no existirá inconveniente en la aplicación del método ensayado en la obtención de la vanillina a partir de licores sulfíticos provenientes de la fabricación de celulosa.

En este trabajo se ha estudiado la obtención de zinc en polvo por via electrolítica a partir de soluciones fuertemente alcalinas de sulfato de zinc, tratando de determinar las condiciones experimentales más adecuadas para lograr una alta superficie es pacifica, con buen rendimiento catódico. Las variables de operación ensayadas fueron las siguientes, en los intervalos señalados: concentración de hidróxido de sodio en el electrólito, entre 150 y 350 g/l; concentración del sulfato de zinc, entre 20 y 80 g/l; densidad de corriente, entre l y 35 A/dm2; temperatura, entre 5 y 70°C. Se estudió además la influencia de la naturaleza del metal del cátodo, de la agitación y del agregado de aditivos especiales. La superficie especifica aumenta con la temperatura, la densidad de corriente y la viscosidad del baño, y disminuye con las concentraciones de sulfato de zinc y de hidróxido de sodio. El rendimiento catódico aumenta con la temperatura y la concentración de sulfato de zinc, y disminuye con la densidad de corriente, la viscosidad y 1a concentración de hidróxido de sodio. Pequeños agregados de carboximetilcelulosa permite aumentar considerablemente la superficie especifica del polvo obtenido. Eligiendo convenientemente las condiciones experimentales el posible preparar polvo de superficie especifica entre 4 y 5 m2/g con un rendimiento catódico de aproxima damente 80%.

Fil:González, Jorge Ernesto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Fil:Berdicever, Mauricio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.