Catálogo de publicaciones

Fil:Fernández Murray, Jorge Pedro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Los LePRKs son receptores quinasa que se localizan en la membrana plasmática de polen, posiblemente mediando interacciones polen-pistilo. Previamente, hemos demostrado que LePRK2 se encuentra fosforilada en polen maduro y germinado, y se desfosforila cuando microsomas de polen son incubados con extractos de estigma-estilo. Esto sugiere que por lo menos LePRK2 podría estar transduciendo una señal del pistilo a través de la actividad de LePRK2. En esta tesis, mostramos que la desfosforilación de LePRK2 está mediada por una molécula proveniente del pistilo resistente al tratamiento térmico, alcalino y proteasas. Basándonos en la desfosforilación de LePRK2, desarrollamos un protocolo de purificación con el cual obtuvimos un pico aislado de ~3550 Da (determinado por UV-MALDI-TOF MS) correspondiente a esta molécula peptídica que nombramos MrX. Con el fin de evaluar los efectos de MrX en tubos polínicos en crecimiento, realizamos ensayos de germinación in vitro en presencia de MrX parcialmente purificado y determinamos la longitud del tubo polínico como marcador del estado fisiológico. La adición de MrX al medio de germinación resultó en un aumento del largo del largo del tubo polínico en una forma dependiente de la dosis, mientras que las fracciones control no tuvieron efecto alguno. Nuestra hipótesis plantea que las interacciones polen-pistilo a través del complejo de LePRKs involucran la percepción de MrX por LePRK2, seguido de una desfosforilación de ésta y un incremento de la tasa de crecimiento del tubo polínico.

Objetivos de la tesis: - Aislamiento de fagos de Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC). - Caracterización de los fagos aislados. - Desarrollo de matrices de encapsulamiento de fagos y estudio in vitro de la capacidad protectora frente a la acidez para el suministro de bacteriófagos a bovinos por vía oral. - Determinación de las condiciones óptimas de conservación de los fagos.

La epilepsia es un grupo heterogéneo de desordenes neurológicos que afecta al 3% de la población mundial. El 30% de los pacientes epilépticos no consigue controlar sus convulsiones con las drogas antiepilépticas (AEDs) disponibles. Existe por lo tanto la necesidad de buscar nuevas AEDs que sean más eficaces y posean menor toxicidad, siendo los productos naturales una alternativa válida como fuente de nuevas estructuras. Eugenia uniflora L (Mirtaceae) es un arbusto ramificado y globoso, utilizado en la medicina tradicional en Brasil, Paraguay y NO de Argentina, sus nombres más comunes son “pitanga” y “ñangapirí” Las hojas desecadas de Eugenia uniflora fueron secadas y molidas. 250 g del polvo fue extraído sucesivamente con hexano y metanol por maceración en frío y se preparó una infusión y un cocimiento (según FNA VI Ed.) del polvo del material vegetal al 5 % y 10% P/V, respectivamente. Los extractos hexánico, metanólico, la infusión y el cocimiento fueron evaluados de acuerdo al Anticonvulsant Drug Development (ADD). Los extractos fueron evaluados en su actividad anticonvulsiva, frente al MES test y PTZ test. El extracto metanólico fue fraccionado por distintas técnicas cromatográficas y las fracciones fueron analizadas por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC-DAD) y cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masas (CG- MS). El extracto metanólico demostró una actividad anticonvulsiva importante, como así también la fracción obtenida por precipitación que presentó una actividad anticonvulsiva 50% efectiva, dando hasta los 30 minutos 75 % efectividad, aumentando el umbral de las convulsiones clónicas inducidas por la administración de PTZsc. Se lograron identificar cuatro compuestos en la fracción activa de Eugenia uniflora.

Eugenia uniflora L., es una especie nativa, arbustiva que pertenece a la familia Myrtaceae; es ampliamente usada en la medicina tradicional, con reconocimiento de vastos compuestos químicos y propiedades biológicas. Los objetivos de la investigación fueron extraer y aislar principios activos a partir de las hojas y realizar una búsqueda de posible actividad antimicrobiana en los extractos no polares obtenidos. El material vegetal, secado y pulverizado, fue extraído con hexano mediante maceración, concentrado y obteniendo un Extracto Hexánico Concentrado (EHC) que fue fraccionado por cromatografía en columna. Se colectaron 150 fracciones reuniéndose veintidós que presentaron un comportamiento cromatográfico semejante, a las cuales se les realizaron un seguimiento bioguiado: Fr1-9, Fr1-14, Fr1-15, Fr1-16, Fr1-20 y Fr1-22. En la FrD3, procedente de Fr1-22, fue identificado el ácido ursólico a través de una CCD contra testigo. Del fraccionamiento de Fr1-20 por cromatografía preparativa en columna se obtuvo la Fr2-10, en donde fue caracterizado el acetato de bornilo. FrD3 y Fr2-10 fueron analizadas a través de HPLC – HRMS, por ionización a presión atmosférica (API) y el detector usado fue Masa de Impacto Electrónico (IE), encontrando en FrD3 el pico del ión molecular m/z 456 [M+] correspondiente con el ácido ursólico y en Fr2-10, m/z 196 [M+] compatible con el acetato de bornilo. Los estudios fueron complementados con tablas de las fracciones analizadas, especificando los distintos picos, a diferentes señales, con su m/z resaltando aquellas coincidentes con m/z del espectro de masas de cada uno de los compuestos, provenientes de una base de datos. Fr1-9 y Fr1-15 fueron analizadas en HPLC-MS en LC/ MSD VL Agilent Technologies 1100 Series Liquid Chromatography en un rango de m/z 50 a 1500, con detector Masa APCI. En Fr1-9 se identifica la Pulegona al comparar con su espectro homónimo aportado por la base de datos. En Fr1-15, el Germacrone, correspondiente a m/z 218 [M+] y los otros fragmentos característicos aportados por la base de datos permitió realizar posibles vías de fragmentación con la obtención de diferentes compuestos con una m/z coincidente a algunas señales de la fracción. Se determinó la actividad antimicrobiana en Fr1-9, Fr1-14, Fr1-15, Fr1-16, Fr1-20, Fr1-22, EDCMT y Fr2-10 a través del método de difusión: “cilindro placa” (USP 29) y el “Contact bioautography” como método bioautográfico. Se emplearon los microorganismos: Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 8739, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 y Staphylococcus aureus ATCC 29737 y el antibiótico estándar fue Ceftazidina. Los resultados mostraron inhibición de crecimiento frente a Staphylococcus aureus en todas las fracciones analizadas. La Bioautografía resultó ser un método útil para encontrar componentes naturales activos. De acuerdo al Rf del ácido ursólico, en los sistemas cromatográficos empleados, y la ubicación de los componentes químicos en la placa cromatográfica con actividad antimicrobiana, podría presumirse que uno de los compuestos presentes en el extracto hexánico con acción biológica sería el ácido ursólico.

En esta tesis se describe el aislamiento, bioguiado a través de ensayos de actividad antifúngica y/o antibacteriana, y la elucidación estructural de los metabolitos presentes en los cultivos de hongos provenientes de diversas fuentes naturales. Las especies analizadas Alternaria brassicicola, A. raphani, Aspergillus restrictus, Trichoderma koniigii y Ascosphaera apis fueron aisladas de polen de colmenas ubicadas en el apiario del INTA (Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria) de la ciudad de Balcarce, Buenos Aires, Argentina. De Alternaria brassicicola y A. raphani se aislaron los compuestos 1-4, siendo el ácido tenuazónico, compuesto 2, el responsable de la actividad antibacteriana frente a la bacteria P. larvae, patógena de las larvas de las abejas melíferas. El compuesto 1, ácido D-allo-tenuazónico, es aislado por primera vez como producto natural. De Aspergillus restrictus se aisló el compuesto 3, conocido como pseurotina A3. Del hongo entomopatógeno de las larvas de las abejas melíferas, Ascosphaera apis, se aislaron los compuestos 6-8, siendo 6 y 8 monoterpenos de estructura química no informada previamente. Los compuestos 6 y 8 mostraron actividades antibióticas, antifúngicas y antioxidantes moderadas, mientras que el compuesto 7 posee buena actividad frente al hongo fitopatógeno F. virguliforme. Del cultivo de Trichoderma koningii se aislaron los compuestos 9, ácido hidroxiaspergílico, y 10, ácido terréstrico, ambos con actividad antifúngica importante frente a F. virguliforme. El estudio del cultivo de una cepa endófita septada oscura (DSE1) aislada de raíces de plantas de soja, brindó los compuestos 11-13. Dichos metabolitos son activos frente a los hongos F. virguliforme y F. lateritium. Se sintetizaron nuevos agentes antimicrobianos previamente aislados del cultivo del hongo intermareal Acremonium furcatum, compuestos 14 y 15. Los intermediarios sintéticos 21 y 22 resultaron poseer muy buena actividad antifúngica frente a F. virguliforme, Aspergillus fumigatus, Botrytis cynerea, Colletotrichum trucatum y Macrophomina phaseolina. Todos los extractos de las especies estudiadas fueron fraccionados mediante distintas técnicas cromatográficas hasta la obtención de los metabolitos de interés puros. La elucidación estructural se llevó a cabo utilizando principalmente experimentos de RMN-1D y 2D, junto con espectrometría de masa.

Fil:Veleiro, Adriana Silvia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

La Mandevilla pentlandiana es un sufrútice trepador perteneciente a la familia Apocynaceae, que se encuentra distribuida en el norte y centro de nuestro país, principalmente en zonas serranas. El objetivo de este Trabajo de Tesis fue el aislamiento y elucidación estructural de los cardenólidos presentes en el extracto etanólico de raiz de Mandevilla pentlandiana. Se aislaron y caracterizaron también otros metabolitos presentes en el mismo extracto, tales como hidrocarburos, triterpenoides (libres y esterificados), esteroles (libres, glucosidados y esterificados con ácidos grasos), peróxidos de esteroles, lignanos, un sesquiterpeno y un pregnano glicosidado. El esquema de fraccionamiento del extracto se indica en Ia página 204. El aislamiento de los compuestos fue efectuado mediante diversas técnicas cromatográficas tales como cromatografía en columna, cromatografía en columna seca, cromatografía en capa preparativa y cromatografía líquida de alta resolución. La elucidación de la estructura de los mismos se realizó por métodos espectroscópicos tales como RMN-1H,RMN-13C y EM. En RMN se utilizaron secuencias especiales de pulsos y métodos de correlación H-C (COSY, HMQC. HMBC). En el caso de espectrometría de masa se utilizaron técnicas de ionización por impacto electrónico (IE)y por bombardeo por átomos rápidos (FAB). La utilización de instrumental multisector permitió efectuar espectrometría de masa de alta resolución y la disociación por activación colisional permitió estudiar secuencias genéticas de iones seleccionados de muestras tal cual, cationizadas y desprotonadas. En el caso de glicósidos, la determinación de la estructura de la aglicona y de los hidratos de carbono se realizó por métodos espectroscópicos sobre los productos de la hidrólisis y sobre el glicósido sin hidrolizar. Para determinar la estructura de los monosacáridos componentes se hidrolizaron los glicósidos y se derivatizaron convenientemente los productos de la hidrólisis. Dichos derivados se analizaron por CGL. Finalmente se determinó la secuencia en que los monosacáridos se hallaban unidos entre sí por medio de espectrometría de masa tandem empleando disociación por activación colisional. Se realizaron bioensayos para determinar la citotoxicidad de los cardenólidos aislados. Los compuestos aislados en este Trabajo de Tesis son los siguientes: Hidrocarburos lineales de 14, 16 a 31 y 34 átomos de carbono. Etil cetonas lineales de 13 y 15 a 19 átomos de carbono. Acidos grasos: C 16:0, C 17:0, C 15:3, C 18:0, C 18:1 y C 18:2.

En el presente trabajo se describe el aislamiento y la elucidación estructural de metabolitos polares presentes en cuatro holotureos provenientes del Mar Argentino y uno del Mar Chileno. La primer especie estudiada fue Psolus patagonicus. A partir del extracto etanólico del organismo se aislaron los glicósidos triterpenoidales sulfatados Patagonicósidos A (1), B (2) y C (3). El compuesto mayoritario 1 fue aislado por primera vez en nuestro laboratorio a partir de ejemplares de P. patagonicus recolectados en Bahía Ensenada (Tierra del Fuego). Los glicósidos minoritarios 2 y 3 son compuestos novedosos. Los compuestos disulfatados 1 y 3 se diferencian únicamente en la posición de uno de los grupos sulfato unido a los monosacáridos de la cadena glicosídica, mientras que el compuesto 2 es monosulfatado y presenta una cadena glicosídica diferente a la de 1 y 3. Los compuestos 1-3 presentaron actividad citotóxica y antiproliferativa frente a las líneas celulares tumorales A549, Hep3B, MDA-MB231 y actividad antifúngica frente a Cladosporium cladosporoides, Cladosporium fulvus, Fusarium oxysporum y Monilla sp. Los glicósidos triterpenoidales bioactivos Patagonicósidos A (1), B (2) y C (3) también fueron aislados del holotureo Psolus squamatus, especie estudiada por primera vez desde el punto de vista químico en este trabajo de tesis doctoral. Del extracto etanólico de Pseudocnus dubiosus leoninus se aislaron dos glicósidos triterpenoidales (4 y 5). El compuesto novedoso 4 presenta la aglicona 16-cetoholost- 7-en-3β-ol y su cadena glicosídica corresponde a [3-O-metil-β-Dglucopiranosil-( 1-3)-6’’’-O-SO3Na-β-D-glucopiranosil-(1-4)-β-D-quinovopiranosil-(1- 2)-4΄-O-SO3Na-β-D-xilosa] identificada previamente en los glicósidos Cucumechinósidos A y C, aislados del holotureo Cucumaria echinata y en Hemoiedemósido A, aislado del holotureo Hemioedema spectabilis. Hemioedema spectabilis fue la cuarta especie estudiada. Se aislaron dos compuestos, Hemoiedemósidos A (6) y B (7), previamente caracterizados en nuestro laboratorio. Ambos compuestos presentan la misma aglicona y se diferencian en el grado de sulfatación de sus cadenas glicosídicas. Los glicósidos presentaron actividad citotóxica y antiproliferativa frente a las líneas celulares A549 y HeLa. El compuesto trisulfatado B (7) resultó más activo en ambas líneas celulares. De H. spectabilis se aisló además una mezcla compleja de glucosilceramidas compuesta por gluco- y galactocerebrósidos no informados anteriormente para este holotureo. Los compuestos aislados presentaron actividad citotóxica y antiproliferativa frente a la línea celular A549. El holotureo Athyonidium chilensis es una especie comestible explotada comercialmente por Chile. A partir de los extractos polares de su parte interna, epidermis y túbulos se aislaron fosfolípidos como componentes mayoritarios en las tres partes del organismo, además de glicósidos triterpenoidales minoritarios. Los ácidos grasos componentes de los fosfolípidos presentaron mezclas complejas de ácidos grasos saturados, monoinsaturados y poliinsaturados, incluyendo los ácidos araquidónico y eicosapentanoico. La gran concentración de fosfolípidos en A. chilensis, su composición en ácidos grasos esenciales y la baja concentración de saponinas tóxicas demuestran por primera vez el valor nutritivo de esta especie. Todos los extractos de las especies estudiadas fueron purificados mediante distintas técnicas cromatográficas. La elucidación estructural de los compuestos se realizó mediante una combinación de experimentos de RMN (1D y 2D), espectrometría de masa de alta resolución y reacciones químicas para la obtención de derivados.

En este trabajo se detalla el aislamiento y elucidación estructural de los metabolitos secundarios presentes en los extractos orgánicos de las esponjas Siphonochalina fortis y Tedania sp.; de los octocorales Anthomastus bathyproctus, Primnoella divaricata, Primnoella scotiae y Paramuricea sp.; de los tunicados Aplidium conicum y Aplidium sp. y del briozoo Aspidostoma giganteum. Todos los extractos de las especies estudiadas fueron fraccionados mediante distintas técnicas de cromatografía hasta la obtención de los metabolitos secundarios de interés puros. La elucidación estructural se realizó utilizando los experimentos de RMN 1D y 2D, espectrometría de masa y reacciones de derivatización. De la esponja Siphonochalina fortis, colectada en Bahía Bustamante, Chubut, se aislaron tres ácidos biliares acetilados (70-72). Este trabajo es el primer aislamiento de ácidos biliares acetilados a partir de esponjas. El compuesto 71 fue detectado por primera vez como producto natural. De la especie Tedania sp., recolectada en el Golfo de San José, Península Valdés, Chubut, se aislaron tres nucleósidos: 2´-desoxiuridina (85), 2´-desoxiadenosina (86) y timidina (87) y un Anor esteroide (88). Del octocoral Anthomastus bathyproctus, recolectado en las islas Shetland del Sur, se aislaron 5 nuevos esteroides (103-107). De los octocorales Primnoella divaricata y Primnoella scotiae, colectados en el Golfo de San Jorge, Chubut, se obtuvieron dos ácidos biliares oxidados (108-109) y por último, del octocoral Paramuricea sp., recolectado cerca de las Islas Shetland del Sur, se aislaron 3 guayanólidos (110, 112 y 113). El compuesto 113 es nuevo. Del tunicado Aplidium conicum, recolectado en la Península Valdés, Chubut, se aisló el meroterpenoide, (+)-conicol (144). Del tunicado Aplidium sp., colectado en la Península Valdés, Chubut, se aislaron los rubrólidos L (146) y O (145). Del briozoo Aspidostoma giganteum, recolectado en el Golfo de San Jorge, Chubut, se aislaron 10 nuevos alcaloides bromados, las aspidostomidas A-H (198, 207, 210-212, 220-222, 225, 227). Este es el primer reporte de este tipo de alcaloides en briozoos. Cinco de estas aspidostomidas, presentan una estructura derivada de tirosina unida a un anillo pirrólico altamente halogenado, a través de un enlace amida, mientras que otros 3 compuestos presentan una estructura derivada de triptofano unido a un anillo de pirrolocetopiperazina, altamente halogenado. Por ultimo, la diaspidostomida, es un ejemplo único de una estructura dimérica que exhibe una estructura N,N-diacil hidrazida en su esqueleto.