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La relación entre hombres y mujeres en cuanto al padecimiento de la tuberculosis pulmonar es 7/3 a favor de los primeros. Las hormonas sexuales pueden ser un factor a tener en cuenta en esta diferencia, dado los efectos inhibitorios de la testosterona sobre la activación de macrófagos y la producción de citocinas pro-inflamatorias, mientras que los estrógenos son más proclives a inducir la producción de estos mediadores. En función de estas cuestiones, en una primera etapa el presente trabajo de tesis estuvo orientado a comparar la evolución de la tuberculosis en ratones machos y hembras en base a la utilización de un modelo de enfermedad progresiva. Ratones BALB/c, machos y hembras se asignaron al azar en dos grupos: castrados o con operación simulada y se infectaron por vía intratraqueal con una alta dosis de la cepa de Mycobacterium tuberculosis H37Rv. Los ratones fueron sacrificados a diferentes momentos y en sus pulmones se determinaron la carga bacilar, la reacción inflamatoria, expresión de ARN mensajeros para diferentes citocinas, la supervivencia y niveles de testosterona en suero. Los ratones machos no castrados mostraron mayor mortalidad y carga bacilar durante la enfermedad avanzada respecto de las hembras y machos castrados. En comparación con los machos sin manipular, las hembras y machos castrados mostraron una mayor inflamación en todos los compartimentos de pulmón, como así también una reacción granulomatosa y desarrollo de neumonía más precoz, mientras que entre los orquitectomizados y las hembras no hubo diferencias significativas. Las hembras y machos castrados mostraron una mayor expresión de mARN para TNFα, IFNγ, IL-12, iNOS e IL-17 respecto de los machos no castrados, durante el primer mes de la infección. Los niveles de testosterona de los machos se hallaron aumentados durante la infección tardía. La orquitectomía al día 60 post-infección produjo una disminución significativa de la carga bacilar en coexistencia con una mayor expresión de TNFα, IL-12 e IFNγ. Resulta claro que en el modelo analizado, los ratones machos resultaron más susceptibles a la tuberculosis y este fenómeno fue revertido por la castración lo cual habla del rol de la testosterona en este déficit de la respuesta defensiva. La lógica para el estudio en pacientes tuberculosos se contextualizó en torno a la naturaleza crónica de la tuberculosis y la reacción inflamatoria acompañante la cual está implicada en una serie de cambios metabólicos e inmuno-endócrinos típicos de la enfermedad. Para profundizar en torno a esta problemática nos propusimos explorar en primer término las variaciones en cuanto a los componentes del eje hipotálamo-hipofisario- gonadal y su relación con las citocinas claramente inmunopatológicas en tuberculosis, en pacientes varones con enfermedad activa. Se utilizaron muestras de plasma de 36 casos no tratados con TB pulmonar, HIV negativos en quienes se determinaron los niveles de TNFα, IFNγ, TGF-β, IL-6, cortisol, dehidroepiandrosterona, testosterona, progesterona, estradiol, hormona luteinizante (LH) y la hormona folículo-estimulante (por ELISA), en simultáneo con 21 voluntarios sanos sin contacto con pacientes tuberculosos y edad similar (media general 40 ± 16.8 años, desvío estándar). Los pacientes mostraron disminución de los niveles de testosterona en presencia de altas cantidades de LH, junto con concentraciones aumentadas de IFNγ, IL-6 y TGF-β. Dado que esta disociación entre LH elevada y testosterona descendida sugería la existencia de algún fenómeno inhibitorio a nivel gonadal, se procesaron muestras histológicas testiculares de necropsias de pacientes que mueren de tuberculosis para la inmunomarcación de IL-1β, TNFα, IL-6 e IFNγ, habida cuenta que estas citocinas podría interferir con la síntesis de esteroides. Secciones histológicas testiculares mostraron abundante presencia de IL-1β, TNFα, IL-6 e IFNγ en macrófagos intersticiales, células de Sertoli y algunas espermatogonias. A partir de esta evidencia se decidió trabajar con células de Leydig murinas (línea celular TM3) la cual fue expuesta a diferentes concentraciones de citocinas de ratón relevantes en la inmunopatología de la tuberculosis como TNFα, IFNγ TGF-β. En el tratamiento in vitro de células de Leydig con estas citocinas condujo a una notable reducción de la producción de testosterona. Ello pone de relieve las implicancias de la respuesta inflamatoria sobre la síntesis de esteroides gonadales con todas las eventuales repercusiones que esto podría tener en torno a las acciones de este andrógeno sea como hormona anti-inflamatoria, inmunomoduladora, anabólica y obviamente de la reproducción.

La enfermedad de Chagas es causada por el parásito intracelular Trypanosoma cruzi, afecta entre 6 y 8 millones de personas a nivel global y es la principal causa de miocarditis infecciosa en el mundo. Las zonas afectadas incluyen todo America y actualmente tambien se encuentran casos en Europa debido a la migración. Durante la etapa crónica de la enfermedad es muy bajo el porcentaje de pacientes adultos que reciben tratamiento etiológico para la infeccion, a pesar de haberse encontrado una tasa de negativización serológica de alrededor del 20%, una caída significativa de títulos serológicos cercana al 50% y una menor tasa de progresión luego del tratamiento con benznidazol. Una de las principales limitaciones del tratamiento es la aparición de efectos adversos, con una tasa de suspensión aproximada de entre el 17 y 31 % en pacientes tratados con benznidazol, y la lenta movilización de los niveles de anticuerpos. Contrariamente a la idea general de que la suspensión del tratamiento ante la aparición de efectos adversos constituye una expresión de falla terapeútica, en un estudio realizado por el grupo de médicos colaboradores se observó que una proporción de los pacientes con esquema incompleto de tratamiento con benznidazol, alcanzaron la seroconversión. En un modelo experimental de infección en ratones se ha demostrado que esquemas más cortos de tratamiento con benznidazol lograban curar la infección. El objetivo de este trabajo fue comparar la evolución de la respuesta celular y humoral en pacientes con enfermedad de Chagas crónica que recibieron el tratamiento completo o incompleto con benznidazol. También se planteó determinar si el grado de inmunocompetencia previo al tratamiento se asociaba con el éxito terapéutico en los pacientes con esquemas más cortos de tratamiento. Como estudio anexo, se planteó explorar los procesos inmunológicos que median la aparición de efectos adversos. Se incorporaron 93 pacientes adultos, treinta y tres de ellos recibieron tratamiento incompleto con benznidazol debido a la aparición de efectos adversos a los 10 días tratamiento en promedio. El efecto adverso más común fue la aparición de exantema maculopapular. La mediana de seguimiento fue de 84 meses (rango = 24-141). A distintos tiempos postratamiento se evaluó la presencia de anticuerpos específicos para T. cruzi por técnicas serológicas convencionales y por un ensayo de multiplex utilizando proteínas recombinantes derivadas de T. cruzi. Los niveles de anticuerpos específicos para T. cruzi disminuyeron significativamente tanto en los pacientes con tratamiento incompleto como con tratamiento completo, encontrándose que la disminución en el primer grupo fue más lenta pero alcanzó la misma proporción de seronegativizaciones por serología convencional. A través del ensayo de multiplex también se evidenció una caída en los niveles de anticuerpos específicos para proteínas recombinantes del parásito en ambos grupos de pacientes tratados. Para analizar la respuesta celular, se cuantificó el número de células productoras de IFN-γ en respuesta a antígenos derivados de T. cruzi utilizando el ensayo de ELISPOT. Se observó que la cantidad de células productoras de IFN-γ disminuyeron significativamente tanto en pacientes con tratamiento incompleto como con tratamiento completo. Posteriormente, se analizó la expresión de un grupo de marcadores fenotípicos en linfocitos T CD4+ y CD8+ cuya expresión se altera en presencia del antígeno. Se encontró una disminución en el porcentaje de linfocitos T activados, un incremento en el número de linfocitos T vírgenes y de memoria central y un aumento en la modulación del receptor de IL-7 en ambos grupos. La funcionalidad de los linfocitos T CD4+ específicos para T.cruzi cambió luego del tratamiento, encontrándose un mayor impacto luego del esquema completo de tratamiento. Los resultados de PCR no brindaron suficiente información respecto a falla terapéutica, dado que la mayoría de los pacientes mostraron PCR no detectable al inicio del tratamiento y estos resultados no se modificaron luego del tratamiento parasiticida. El seguimiento minucioso de pacientes que recibieron esquemas más cortos de tratamiento con benznidazol confirma que tanto el grupo de pacientes con tratamiento completo así como aquellos que recibieron esquemas más cortos muestran cambios en la respuesta humoral y celular compatibles con una reducción de la carga parasitaria. A partir del estudio de los procesos inmunológicos que median las reacciones adversas al benznidazol, se pudo comprobar la presencia de linfocitos T CD4+ y CD8+ en biopsias de piel de los pacientes con dermatitis originadas durante el tratamiento con esta droga. En los pacientes que presentaron dermatitis severa también se observó un aumento en los niveles séricos de FAS-L soluble que en algunos casos se acompañaba por un aumento en los niveles de IL-5 e IL-13 en el momento de la reacción adversa. Utilizando la técnica de ELISPOT para IFN-γ, IL-2, e IL5 y de proliferación por tinción con CFSE, sólo en tres, de un total de veinte pacientes con esquema incompleto evaluados, se pudo detectar células productoras de IFN-γ reactivas al benznidazol. Por lo tanto, estos resultados junto con la presencia de linfocitos T hallados en las lesiones de piel durante la dermatitis inducida por benznidazol, son indicios de un proceso de hipersensibilidad retardada. Los resultados de este trabajo de tesis confirman la utilidad de marcadores de la respuesta celular y humoral específicas para T. cruzi para evidenciar el éxito terapéutico en pacientes que han recibido tratamiento incompleto. Estos resultados también enfatizan la necesidad de realizar el seguimiento clínico y serológico de pacientes con tratamiento incompleto y abren la posibilidad del uso de dosis más bajas de benznidazol.