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Tesis (Doctor en Astronomía)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Matemática, Astronomía y Física, 2010.

Se describe un método rápido, simple y específico para determinar colorimetricamente el glucógeno en concentraciones que varían entre 0,15 y 1 mg/ml con un reactivo de I2 en Ik en presencia de sales. Este procedimiento colorimétrico puede ser utilizado para la determinación del glucógeno contenido en los tejidos. Se puede diferenciar un polisacárido del tipo del glucógeno de uno del tipo de amilopectina, determinando el λ máx. del complejo polisacárido - iodo. Se utilizó este método para medir la actividad de la enzina ramificante. La α-1,4-glucano, α-1,4-glucano 6-glucosiltransferasa ha sido purificada 35 veces respecto de los extractos de hígado de rata. Se logra separar la α-amilasa, por centrifugación de los extractos de hígado co elevado contenido en glucógeno, a alta veocidad. La acción enzimática sobre amilopectina es óptima en buffer climato 0,3 M a pH 6,4. Requiere sales y es inhibida por Mn++, Mg++ y p-ele[…] de sodio. La enzima ramificante de hígado puede utilizar tamibién como substratos anilosa y dextrina β-límite de amilopectina. Se describe un método para ensayar la enzima en presencia de α-anilosa.

Fil:Alconada Magliano, Teresa María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

En la actualidad los procesos enzimáticos han ido reemplazando algunos de los procesos químicos tradicionales, por cuestiones económicas, ecológicas o por especificidad. Sin embargo, muchas de las enzimas disponibles no soportan las condiciones de reacción industriales. Como resultado de esto, los microorganismos extremófilos son una valiosa fuente de nuevas enzimas. En base a lo expuesto, se plantearon los siguientes objetivos: • Realizar un screening de actividades enzimáticas de ocho cepas de hongos alcalino-tolerantes o alcalofílicos aislados localmente, focalizando el mismo en las enzimas que degradan pared celular vegetal. • Estudiar la producción y purificación de las Rhasas producidas por A. luteo-albus y por A. murorum a los efectos de optimizar la cantidad de enzima producida y de esta forma poder contar con suficiente cantidad de proteína para caracterizarlas bioquímicamente. • Determinar la capacidad de las Rhasas en estudio para hidrolizar sustratos naturales en condiciones de alcalinidad. • Desarrollar diferentes estrategias de clonado del gen que codifica para la poligalacturonasa ácida (PG1) de A. kawachii. • Analizar la expresión de PG1 activa en cada caso, y caracterizar la proteína obtenida a los efectos de evaluar su posible aplicación en procesos biotecnológicos. • Estudiar el crecimiento de Saccharomyces cerevisiae recombinante en un medio de cultivo sintético y su capacidad de producir PG1 recombinante. • Determinar las mejores condiciones de producción de la enzima recombinante en sistemas batch y batch alimentado. • Purificar y caracterizar la proteína obtenida respecto de las características de la enzima silvestre.

Los objetivos del presente trabajo de tesis son: - Explorar la posibilidad de inmovilizar la enzima Fosfolipasa A2 sobre un soporte inerte. - Estudiar la hidrólisis de Lecitina de Soja mediante el uso de enzima Fosfolipasa A2. - Evaluar los efectos de la difusión sobre los parámetros cinéticos de la reacción de hidrólisis. - Efectuar estudios para diseñar un sistema de reacción continuo en el cual la enzima esté bajo la forma insoluble y el sustrato en forma soluble. - Investigar la hidrodinámica de operación, que incluye estudios de empacado, de velocidades de fluidos y evaluación de los efectos sobre la conversión de sustrato y la productividad del reactor. - Comparar diferentes modelos de flujo con los datos obtenidos experimentalmente.

White rot fungi are the only organisms capable to mineralize the lignin to CO2. These fungi posses at least three enzymes impicated in the process: lignin peroxidase, manganese dependent peroxidase and laccase. The screening of 13 strains of white-rot fungi showed that F. sclerodermeus was the more efficient ligninase producer fungus and the decolorization of the polymeric dye poly R was fast. Lip activity was not detected in any of the media tested. Optimal media conditions for laccase and MnP production in synthetic liquid media were found. The Doehlert uniform factorial experimental design was applied to study the effect of MnSO4, CuSO4 and asparagine. Among the aromatic compounds evaluated in GA medium, vanillin and fenilic acid were the more efficient laccase and MnP inducers. On the other hand, in semidefined medium (YPG) aromatic compounds had not effect on any activity. Under this conditions only copper and Mn increased laccase and MnP activities, respectively. Solid state fermentation on wheat or soy bran, high laccase and MnP were produced. Neither aromatic compounds, MnSO4 nor CuSO4 increased none of the activities. The effect on known ligninolytic inducers was studied on a crystalline cellulose (CC) based medium. Cellulolytic activities decreased 3-fold when CuSO4 or MnSO4 were added to the medium. MnP activity was only detected in the media containing MnSO4 as inducer, while the laccase activity was constitutiver expressed under all the conditions tested, and it was increased to a major extent when copper was added to the medium. Wood blocks of poplar incubated during six months with F. sclerodermeus registered dry weight losses of 51%. Differential hydrolysis of the wood blocks revealed that the remaining content of cellulose and lignin were 58 y 56%, respectively. On the other hand, the hydrosolubles increased 3-fold, due to the degradation products. Observation of the wood showed the degradation of parenchyma rays and thinning of the cell walls. Growing on sawdust medium, enzyme activities were produced only with poplar, whereas on cedar laccase and MnP were inhibited. Laccase and MnP produced in YPG medium by F. sclerodcrmeus were purified to electrophoretic homogeneity and characterized biochemically. Two isoenzymes of laccase (Lac I y Lac II) and two MnP (MnP I y MnP II) were found. Isoforms of both systems showed slight differences in their isoelectric points. Laccase activity produced on wheat bran based medium revealed three bands in PAGE with differential patterns of inactivation. Among the compounds tested, the CuSO4 1,25 mM was the best stabilizer. The combination of both CuSO4 and glycerol 0,2% further increased the stability of the enzyme. Laccase activity produced in the optimized conditions was used in assays of decoloration and detoxification of the fungicide malachite green. P. chrysosporium was used as biotest, this Fungus showed a high sensitivity to the fungicide, while degradation by F. sclerodermeus laccase rendered a not toxic compound. The presence of I-HBT accelerated the detoxification. The detoxification response of other white-rot fungi was similar to that observed for P. chrysosporium.