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Objetivos de este trabajo de tesis Objetivo general: Generar nuevo conocimiento acerca de la movilidad de B. japonicum. A partir de ello procurar una mejora en la competición para la nodulación de las cepas de B. japonicum empleadas como inoculantes. Objetivos específicos: - Analizar el comportamiento de una cepa de mayor movilidad en la competición para la nodulación, seleccionada de forma natural (sin manipulación genética) y mediante una técnica reproducible. - Analizar la estructura de los flagelos de B. japonicum, su expresión y su contribución a la simbiosis con soja en medios porosos a capacidad de campo.

Objetivo general Analizar los factores que influyen sobre la aceptabilidad global y sensorial de alimentos elaborados en base a amaranto destinados a Programas Sociales Nutricionales (PSN). Objetivos particulares Capitulo I Investigar hábitos y preferencias alimentarias en poblaciones a las cuales son destinados los PSN. Desarrollar metodología para medir la aceptabilidad sensorial de alimentos en poblaciones que reciben PSN. Capitulo II Optimizar sensorialmente galletitas dulces elaboradas con diferentes concentraciones de harina integral de amaranto (HIA). Capitulo III Estudiar el comportamiento de una galletita elaborada con HIA, en distintas condiciones de almacenamiento. Capitulo IV Analizar los efectos de envase, marca y promesa nutricional sobre la aceptabilidad de alimentos destinados a PSN.

Tesis para obtener el grado de Doctora en Ciencia y Tecnología Mención Química, de la Universidad Nacional de San Martín, en 2019

Creixent, Nicolás

Entre las cadenas de comidas rápidas existe la creciente dificultad de generar fidelidad en su clientela, perdiendo puntos desde los que diferenciarse al servicio de retener clientes. Todas cuentan con aplicaciones móviles, descuentos, productos con insumos más sofisticados, etc. Es momento de darle al servicio la atención que merece como creador de buenas impresiones que se destaquen de la competencia, logrando la reincidencia del cliente. El objetivo de este trabajo es el dar cuenta de lo acontecido en un único local de una famosa cadena de comidas rápidas, sobre días y horarios específicos que ayuden a un primer acercamiento sobre las necesidades que tiene el cliente cuando visita el restaurante y el nivel de servicio prestado. A través de observaciones pasivas, encuestas y entrevistas, se intenta dar respuesta a las necesidades que tienen los clientes y si estas son oportunidades de mejora y/o de negocios para el local estudiado, sin que el resultado sea extrapolable al total de locales de la marca, ni mucho menos, de la industria de comidas rápidas. Los resultados indican que el restaurante elegido en este trabajo está bien considerado por sus clientes dentro del rango horario estudiado, no siendo esto razón suficiente para descansar sobre lo alcanzado. Es menester examinar los puntos de mejora y de qué manera lograr un paso más hacia un servicio de excelencia. Intentando lo antedicho, se tendrá un servicio tal que incite al cliente a volver a elegir esta marca por sobre otra en sus próximas visitas. Convirtiéndose en una herramienta de valor para el negocio que permita fidelizar al cliente.

Con el objetivo de optimizar la producción de proteínas heterólogas en plantas se desarrolló un sistema de expresión basado en un amplicón derivado del genoma del PVX. Se diseñaron distintos amplicones virales que permiten la expresión, tanto constitutiva como inducible, de proteínas recombinantes. La utilización del amplicón constitutivo permitió obtener, por primera vez, plantas transgénicas que sobrexpresan altos niveles de proteínas virales. Además, se logró expresar exitosamente GFP a partir de un amplicón inducible, tanto en ensayos de expresión transitoria como en plantas transgénicas. Uno de los problemas que dificultan la producción de proteínas de interés en plantas utilizando vectores virales es el establecimiento de respuestas de silenciamiento génico postraduccional (PTGS) en respuesta a la replicación viral. Para intentar superar esta dificultad, se propuso co-expresar un amplicón viral junto con una proteína supresora del PTGS. Se caracterizó la actividad de una nueva proteína supresora del PTGS, la proteína 15K codificada en el genoma del Garlic mite-borne filamentous virus (GmbFV). Si bien esta proteína muestra una actividad supresora débil en plantas silenciadas por agroinfiltración con transgenes u horquillas de silenciamiento, presenta la ventaja de no producir fenotipos aberrantes en plantas transgénicas. Mediante la co-agroinfiltración con construcciones que expresan la proteína 15K y el amplicón PVX-2aA (amplicón que expresa el epítope 2aA del virus de aftosa) se lograron obtener altos niveles de una fusión del epítope de interés a la cápside viral en plantas de Nicotiana benthamiana en un corto período de tiempo. Este resultado sugiere que es posible generar sistemas estables que permitan obtener altos niveles de expresión mediante el cruzamiento entre plantas transgénicas que expresen la proteína supresora 15K y amplicones de interés.

El objetivo de este trabajo es el estudio y la optimización de mecanismos de producción de átomos de selenio en diferentes celdas de atomización: hornos de grafito y tubos de cuarzo. Los resultados obtenidos han sido aplicados en el desarrollo de sistemas de inyección en flujo acoplados a detectores atómicos que permitieran la determinación de selenio total en matrices biológicas y ambientales y la especiación de Se(IV) y Se(VI) en aguas de hemodiálisis y de consumo. En el capítulo l se presenta la optimización de la determinación optimizada de selenio total por espectrometría de absorción atómica con horno de grafito. Se evalúa la aptitud de diferentes modificadores de matriz (sales de níquel, cobre y paladio) para aumentar la estabilidad térmica de formas inorgánicas (Se(IV)) y orgánicas (selenometionina) de selenio. Tras la selección del modificador más apto, se presenta el estudio de las interacciones selenio/modificador con el fin de interpretar los mecanismos de estabilización térmica y optimizar los programas de calentamiento del horno. En el Capítulo de 2 se presenta un sistema automático de pre-concentración para la cuantificación de ultravestigios de Se(IV) y Se(VI) basado en el acoplamiento de un sistema en flujo al horno de grafito. Se utilizan resinas aniónicas fuertes para la retención de las dos formas inorgánicas, las que son eluidas selectivamente con soluciones de ácido clorhídrico de distinta concentración. Se utiliza un modificador “permanente” que consiste en depositar iridio en la superficie del horno previo a las secuencias de calentamiento, con el objetivo de favorecer la automatización del método y prevenir el efecto de interferencias que modifiquen la señal. En el capítulo 3 se presenta un método alternativo para la especiación de selenio basado en el acoplamiento de un sistema de flujo a un generador de hidruros. Dado que el Se(IV) es la única especie formadora de hidruros y que el Se(VI) necesita entonces ser prerreducido, se muestra un estudio de la cinética de reducción de Se(VI) a Se(IV) y de los factores que la afectan, con el objetivo de encontrar las condiciones de trabajo que permitan realizar la conversión Se(VI)/Se(IV) en tiempos compatibles con la operación “en línea”. Teniendo en cuenta que la sensibilidad de la técnica se afecta por un gran número de variables y que algunas de ellas son interdependientes, se ha optimizado el método a través del empleo de diseño factorial y construcción de las superficies de respuesta. Dado que las interferencias inorgánicas (particularmente el cobre y el hierro) reducen la eficiencia de generación de hidruros se desarrolló una estrategia para eliminarlas en linea utilizando resinas de intercambio aniónico para retener las especies cloruradas de los metales. En el capitulo 4 se aborda la discusión del concepto de trazabilidad en quimica analítica, presentándose las distintas estrategias para la validación de los métodos expuestos en los capítulos anteriores. El capitulo 5 presenta los métodos y materiales utilizados y el capítulo 6 señala las más relevantes conclusiones del trabajo.

En este trabajo se presentan los resultados obtenidos durante la optimización de la producción de eritropoyetina humana recombinante (rhEPO) en cultivo de células CHO (Chinese Hamster Ovary cells), partiendo de la selección de un nuevo clon productor, el estudio del efecto de aditivos y variables fisicoquímicas sobre el crecimiento, productividad y patrón de isoformas producidas, y finalmente, el diseño racional de medios de cultivos que permiten obtener una molécula de alta calidad glicosídica. Inicialmente se clonaron líneas celulares recombinantes productoras de rhEPO. Los clones seleccionados fueron adaptados a crecer en suspensión, en medios de cultivo de bajo contenido de suero y libre de proteínas, estudiándose el efecto que ejercen sobre el metabolismo diferentes metodologías de adaptación a suspensión, concentraciones de suero y sistemas de cultivo. Utilizando un diseño factorial se evaluó la influencia de la adición de aminoazúcares, la acumulación del ion amonio en sobrenadante y el efecto de la osmolalidad, sobre el crecimiento, la productividad y el patrón de glicosilación. Posteriormente, y mediante un diseño experimental de mezclas cruzadas con limitaciones, acoplado a un análisis multivariado de las respuestas (a través de las metodologías de superficies de respuesta o de redes neuronales artificiales), seguido de un proceso de optimización, se diseñaron dos medios de cultivo con el objetivo de optimizar la producción de rhEPO. Estos medios fueron utilizados durante el cultivo del clon productor en un biorreactor tipo tanque agitado, en modo continuo con perfusión, obteniéndose una molécula de rhEPO de alta calidad glicosídica.

La Ciclodextrina Glucosiltransferasa (CGTasa) es la única enzima capaz de convertir almidón y sustratos relacionados en ciclodextrinas (CD). Las CGTasas son liberadas al medio extracelular principalmente por cepas del género Bacillus, aunque también por bacterias del género Klebsiella, Micrococcus, Thermoanaerobacteríum, Thermococcus entre otras. Las CD son oligosacáridos cíclicos no reductores formadas por moléculas de glucosa unidas por enlaces a (1-4). Se las denomina a, p y y-CD dependiendo del número de glucosas que poseen (seis, siete u ocho). Las CD tienen una cavidad hidrofóbica y una superficie hidrofílica, por esta causa tienen la habilidad de formar complejos de inclusión con una amplia cantidad de moléculas, cambiando sus propiedades físicas y químicas. Por esta razón tiene aplicación en las industrias alimenticia, farmacéutica, cosmética y agroquímica. En este trabajo se estudió la cinética de crecimiento de Bacillus circulans DF 9R y la producción de CGTasa en relación con los componentes del medio de cultivo y las condiciones operativas del proceso. La formulación y optimización del medio se realizó en frascos agitados utilizando técnicas secuenciales convencionales y diseños estadísticos experimentales. Con este propósito se evaluaron los efectos de los siguientes nutrientes: fuente de carbono, fuente de nitrógeno y sales. Se seleccionó un medio mínimo que contenía como nutrientes almidón de mandioca, sulfato de amonio, Fe2+ y Mg2+ en buffer fosfato de potasio. Las concentraciones óptimas de las fuentes de carbono y nitrógeno se determinaron empleando un diseño centra! compuesto. Las concentraciones fueron 1,5% y 0,4%, respectivamente. Este medio no requirió de una fuente de nitrógeno orgánica ni de composición compleja. Las condiciones óptimas de cultivo para la producción de la enzima fueron: pH inicial 8,1; temperatura de incubación 37°C; agitación 100 rpm y aireación abundante (compatible con una relación medio/ recipiente 1/5 a 1/10). La CGTasa no presentó un perfil de secreción asociado al crecimiento del Bacillus, su producción ocurre en la etapa tardía de la fase de crecimiento celular. Esta enzima es capaz de transformar el 43% del almidón en CD produciendo 14% de a-CD, 25% de |3-CD y 4% de y-CD a los 90 minutos de reacción. Se evaluaron diferentes técnicas de purificación que permitan un fácil escalado. La precipitación fraccionada con sulfato de amonio logró una recuperación de 88,6% y un factor de purificación de 3,9 en la fracción 35-50% de saturación. La adsorción a almidón no solubilizado permitió un 80% de adsorción de la enzima formando el complejo CGTasa-almidón cuando se empleó una concentración de almidón 11,0% y sulfato de amonio 1,6%. La presencia de sulfato de amonio favoreció la adsorción. La enzima fue eluída con una solución 10 mM de a-CD. El factor de purificación fue 17,1 y la recuperación 64,5%. La partición en sistemas de dos fases acuosas se realizó con un esquema en dos pasos. En el primero se empleó un sistema PEG 4000/'fosfato. En el siguiente, la enzima fue extraída de la fase superior del sistema PEG 4000/fosfato con la adición de una solución de sulfato de magnesio y Reppal20o (almidón modificado). Este esquema permitió alcanzar una recuperación final de 72% con un factor de purificación de 36,7. La evaluación financiera determinó que es recomendable invertir (valor actual neio= 25840,46) y que el mismo es rentable (tasa interna de rendimiento= 62%). La inversión inicial se recupera a los 31 meses con un porcentaje de recuperación por año de 37,53%. El análisis económico de! proyecto indicó que el mismo es viable en el entorno local.

Tesis para obtener el grado de Magíster Scientiae en Fruticultura de Clima Templado-Frío,, de la Universidad Nacional del Comahue y la Universitá di Bologna, en 2011