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En Argentina, el 10% de la población crónicamente infectada con Trypanosoma cruzi presenta patología en sistema nervioso periférico (SNP). En la presente Tesis se estudió la participación de mecanismos inmunes en la inducción de patología a nivel de lo que denominamos genéricamente SNP, representado por el arco médula espinal-nervio ciático-músculo isquiotibial. Empleamos como modelo, ratones C3H/HeN infectados con las cepas RA o CA-I de T. cruzi que evidencian signos de daño principalmente en nervio ciático y médula espinal o en músculo esquelético, respectivamente. Además, linfocitos T (LT) de estos animales son capaces de injuriar de manera selectiva los órganos antes mencionados por transferencia pasiva en ausencia de parásitos. Hemos definido esos tejidos como blanco de daño para cada una de las cepas de T. cruzi. La respuesta inmune humoral, evaluada por IFI sobre cortes de tejido normal, no mostró diferencias cepa-dependientes; los patrones de marcación evidenciaron depósitos de IgG en intersticio de músculo y en vainas de mielina en nervio. Los sueros con reactividad positiva hacia antígenos conformacionales de nervio fueron definidos como Ne+. La inyección epineural de sueros Ne+ altera la conducción del nervio ciático de manera cepadependiente. Así, sueros de ratones infectados con la cepa RA/Ne+ inducen aumento del tiempo de latencia y disminución en la amplitud del potencial de acción nervioso (PAN) en los animales receptores, 4 días post- inyección (dpy). Por el contrario, sueros de animales infectados con la cepa CA-I no afectan ningún parámetro del PAN. La inyección de IgG purificada de sueros RA/Ne+ también disminuye la amplitud del PAN, indicando la presencia de un menor número de axones funcionantes. En coincidencia se observan depósitos de IgG marcando fibras axonales y/o vainas de mielina e infiltrados inflamatorios leves en los nervios inyectados con suero RA/Ne+ pero no en los inyectados con suero CA-I/ Ne+, a los 4 dpy. No se detecta presencia de parásitos en los nervios de animales receptores de sueros (PCR). Las alteraciones del PAN luego de la inyección de suero RA/Ne+ son similares a las detectadas en animales crónicamente infectados y en ratones inyectados con tripomastigotes en el epineuro l7 dpy. En conjunto, estos resultados indican la participación directa de autoanticuerpos en las alteraciones electrofisiológicas observadas en sistema nervioso periférico en la enfermedad de Chagas. En relación con la participación de LT en esta patología, se estudió el repertorio de las cadenas variables β del receptor de células T (TCRVβ) en distintos tejidos de animales crónicamente infectados con ambas cepas de T. cruzi. En bazo, se observa la sobreexpresión del segmento TCRVβ l3 y sub-expresión del segmento TCRVβ l4, lo cual podría ser marcador de infección. En SNP, se detecta un alto número de cadenas expresadas en los tejidos blanco de daño, que refleja la presencia de un importante infiltrado inflamatorio. Significativamente, se observa el uso relativo aumentado del segmento TCRVβ9 en los tejidos blanco de daño para cada cepa: nervio y médula en los animales infectados con RA y músculo en los infectados con CA-I. Esto demuestra la existencia de un patrón de expresión diferencial de segmentos en el sitio de lesión con respecto a la expresión periférica. El clonado, secuenciación y análisis del polimorfismo de secuencia de la región CDR3 de los segmentos TCRVβ9 sobre-expresados demostró una alta proporción de clones idénticos en animales infectados con RA (médula y nervio), que podría estar indicando la presencia de LT autorreactivos en el sitio de lesión. Además, la elevada producción de citoquinas pro-inflamatorias en los tejidos blanco de daño sugiere que la respuesta inmune local tiene un papel relevante en el proceso inflamatorio. Por otro lado, en los órganos que no son blanco principal de daño para cada una de las cepas de T. cruzi, donde no se encontraba sobre-expresión del segmento TCRVβ9, se observó dominancia clonal en la secuencias de la región CDR3. Este hecho, conjuntamente con la imposibilidad de reproducir daño por transferencia pasiva de células, el hallazgo de material parasitario y la baja producción de IL-6 y TNFα, sugiere que los clones mayoritarios detectados en los tejidos que no son blanco principal de daño están dirigidos hacia antígenos parasitarios contribuyendo al control local de la infección.

Fil:Levitus, Gabriela Laura. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.