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Tesis de Maestría

Teniendo en cuenta la calidad de los vegetales listos para usar, no es conveniente realizar un único tratamiento de conservación en condiciones extremas. La tecnología de factores combinados propone usar una combinación sinérgica o aditiva de diversos tratamientos individualmente subinhibitorios. Por ello, el objetivo fue desarrollar modelos matemáticos que permitan analizar y predecir el efecto combinado de ácido cítrico y ascórbico, tipo de envase y tiempo de almacenamiento sobre el desarrollo de flora aerobia mesófila (FAM), pH espinaca, concentración CO2 y O2 en atmósfera desarrollada en envase y atributos sensoriales. Las atmósferas en envases de polipropileno monoorientado (OPP) y polietileno de baja densidad (LDPE), no afectaron FAM, que disminuyó con aumento de ácido cítrico y ascórbico. La FAM de muestras tratadas químicamente fue inferior al de las lavadas solamente, presentando recuentos inferiores al límite establecido. El pH disminuyó con aumento de concentración de ácido cítrico y ascórbico. El pH espinaca envasada en OPP fue mayor al de LDPE. Para ambos envases, %CO2 aumentó y %O2 disminuyó durante el almacenamiento. En los envases de OPP, se alcanzaron %CO2 superiores y %O2 inferiores a los obtenidos en los envases de LDPE. La calidad sensorial disminuyó con el tiempo de conservación refrigerada. El tipo de film afectó significativamente el desarrollo de off-odors, pero no afectó los atributos sensoriales visuales. El desarrollo de FAM, off-odors ó la apariencia general, serían los factores que limitan la vida útil de espinaca mínimamente procesada, dependiendo del tipo de envase y tratamiento químico.

La tasa actual de extinción de especies ha aumentado al menos dos órdenes de magnitud respecto a los valores históricos del registro fósil por lo que la conservación de la biodiversidad se ha vuelto prioritaria en Biología. El Macá Tobiano se encuentra entre las c. 220 especies de aves enpeligro crítico de desaparecer y es la única que se distribuye casi exclusivamente en Argentina. Fue descubierto por la ciencia occidental en 1974 en las mesetas de altura del oeste de la provincia de Santa Cruz, donde se reproduce. Durante el invierno migra hacia las rías y estuarios de los grandes ríos de la misma provincia. Hasta mediados de la década de 1990’s se estimaba que la población incluía entre 3000 y 5000 individuos, pero a mediados del 2000’s se detectó una importante reducción poblacional. El objetivo de esta Tesis fue evaluar la viabilidad de las poblaciones y generar información que permita realizar acciones de conservación y manejo con base científica. Se estudió la historia natural, tendencias poblacionales recientes, éxito reproductivo, comportamiento migratorio y su consecuencias en la estructuración genética (ADNmt), y el impacto de las especies invasoras sobre la especie. Se realizaron un total 1041 días/hombre de trabajo de campo, en c. 450 lagunas de nueve mesetas de altura del oeste de Santa Cruz. Se realizaron censos poblacionales, seguimiento regular de las colonias de nidificación, se marcaron y se tomaron muestras de sangre de individuos y se evaluó la presencia de tres especies invasoras que constituyen una amenaza para el Macá Tobiano (el Visón Americano Neovison vison, la Trucha Arcoíris Oncorhynchus mykiss y la Gaviota Cocinera Larus dominicanus). Se encontró que la población global del Macá Tobiano se redujo mas de un 80% en 25 años, que la reducción no fue homogénea en toda su distribución y que los factores causales de esta heterogeneidad varían de meseta a meseta. El éxito de reclutamiento (juveniles que llegan a la edad de la migración por intento de nidificación) fue variable entre temporadas y estuvo muy influenciado por las características de las lagunas en las que ocurrió la nidificación. Las causas principales que afectaron el éxito reproductivo fueron de origen climático, principalmente las tormentas de viento, aunque todos los factores de amenaza detectados tienen un efecto negativo sobre el reclutamiento. El marcado de individuos y los censos poblacionales mostraron que existe un comportamiento migratorio de tipo filopátrico. Esta filopatría se vio además reflejada en una estructuración genética de las poblaciones de distintas mesetas. Las especies invasoras afectaron al macá en distintas etapas del ciclo de vida y en diferentes zonas de la distribución. Los resultados indican que la población se habría reducido como resultado de una multiplicidad de factores, por lo que deben desarrollarse una variedad de acciones de manejo para proteger las poblaciones remanentes. Estas acciones deben realizarse diferencialmente en las distintas etapas del ciclo de vida y en las distintas mesetas. En función de las primeras experiencias de medidas de manejo aplicadas, se concluye que la conservación del Macá Tobiano depende hoy de la aplicación de acciones de conservación directa. Asimismo, resulta muy importante continuar con los estudios sobre las principales amenazas que enfrentan las poblaciones del Macá Tobiano y de los aspectos aún desconocidos de su biología.

El objetivo de este trabajo fue establecer protocolos que permitan la regeneración in vitro de té, a partir de diferentes explantes y que permitan la conservación de germoplasma a corto/mediano y largo plazo. Debido a los problemas de contaminación, comunes en especies leñosas, fue necesario realizar previamente numerosos ensayos de desinfección, para lograr el éxito del establecimiento in vitro. Los resultados obtenidos mostraron que un factor muy importante fue la calidad de las plantas madre, las cuales deben ser manejadas mediante un estricto control nutricional y químico preventivo, evitando el mojado de la parte aérea de las plantas para disminuir la contaminación bacteriana. La regeneración de plantas fue factible mediante el cultivo in vitro en medios muy simples de: meristemas, yemas axilares y segmentos uninodales. Para la obtención de los máximos valores de regeneración, fue necesaria la adición de por lo menos BAP, y/o CIN y/o AG3, dependiendo del clon y del explante que se cultiva. La mayoría de los clones evaluados fueron capaces de generar embriones somáticos, los cuales germinaron y permitieron obtener plantas. El único explante evaluado que demostró capacidad embriogénica fue la lámina de cotiledón. Para que se produzca la germinación de los embriones somáticos, fue necesaria la presencia en el medio de cultivo de hemisulfato de adenina y ácido L-glutámico, como fuente de nitrógeno orgánico. La conservación de germoplasma a corto/mediano plazo, mediante la reducción de temperatura, fue posible hasta los 150 días con porcentajes de supervivencia relativamente altos. Los segmentos uninodales y yemas axilares resultaron ser los explantes con mejores respuestas. En medios sub-óptimos, se podría conservar germoplasma de té hasta 120 días, sin que la capacidad de regeneración se vea afectada. Para la conservación de germoplasma a largo plazo se desarrolló un procedimiento que permitió la conservación de ejes embrionales a través de la técnica de deshidratación. La técnica de vitrificación logró la regeneración de germoplasma crioconservado cuando se utilizaron ápices como explante.

La familia HD-Zip de factores de transcripción (FTs) de plantas está compuesta por proteínas que unen ADN a mediante un homodominio y dimerizan a través de un cierre de leucinas. Los miembros de la subfamilia I están principalmente involucrados en respuestas relacionadas al ABA y reconocen con máxima afinidad la misma secuencia. Sin embargo, generan una variedad de fenotipos cuando son expresados utilizando el promotor 35SCaMV. Para estudiar esta divergencia funcional, se realizó un análisis filogenético y se identificaron 6 clados con regiones C terminales (RCTs) características. Éstas presentaron motivos de activación AHA y sitios putativos de fosforilación y sumoilación. Mediante ensayos de símple híbrido en levaduras se observó la capacidad de transactivar de la RCT de AtHB13. La expresión en Arabidopsis de proteínas quiméricas mostró que estas regiones son funcionalmente divergentes in planta. Por otra parte, se reconstruyó una red de regulación transcripcional involucrando FTs HD-Zip I y II. Se utilizaron microarreglos de tratamientos de estrés abiótico de Arabidopsis, obteniéndose listas de blancos directos putativos para cada FT, llamadas módulos de actividad transcripcional (MATs). Los promotores de los genes de los MATs presentaron elementos ABRE, señalando una potencial regulación cruzada con otros FTs. La coordinación de la expresión en estrés por calor sugirió una participación de los FTs HD-Zip en esta respuesta. La caracterización funcional de los MTAs mostró categorías nuevas y desconocidas para los FTs estudiados. Este trabajo profundiza nuestro conocimiento sobre los mecanismos de acción de los FTs HD-Zip y genera nuevas hipótesis para investigaciones futuras.