Eugenia uniflora L., es una especie nativa, arbustiva que pertenece a la familia Myrtaceae; es ampliamente usada en la medicina tradicional, con reconocimiento de vastos compuestos químicos y propiedades biológicas. Los objetivos de la investigación fueron extraer y aislar principios activos a partir de las hojas y realizar una búsqueda de posible actividad antimicrobiana en los extractos no polares obtenidos. El material vegetal, secado y pulverizado, fue extraído con hexano mediante maceración, concentrado y obteniendo un Extracto Hexánico Concentrado (EHC) que fue fraccionado por cromatografía en columna. Se colectaron 150 fracciones reuniéndose veintidós que presentaron un comportamiento cromatográfico semejante, a las cuales se les realizaron un seguimiento bioguiado: Fr1-9, Fr1-14, Fr1-15, Fr1-16, Fr1-20 y Fr1-22. En la FrD3, procedente de Fr1-22, fue identificado el ácido ursólico a través de una CCD contra testigo. Del fraccionamiento de Fr1-20 por cromatografía preparativa en columna se obtuvo la Fr2-10, en donde fue caracterizado el acetato de bornilo. FrD3 y Fr2-10 fueron analizadas a través de HPLC – HRMS, por ionización a presión atmosférica (API) y el detector usado fue Masa de Impacto Electrónico (IE), encontrando en FrD3 el pico del ión molecular m/z 456 [M+] correspondiente con el ácido ursólico y en Fr2-10, m/z 196 [M+] compatible con el acetato de bornilo. Los estudios fueron complementados con tablas de las fracciones analizadas, especificando los distintos picos, a diferentes señales, con su m/z resaltando aquellas coincidentes con m/z del espectro de masas de cada uno de los compuestos, provenientes de una base de datos. Fr1-9 y Fr1-15 fueron analizadas en HPLC-MS en LC/ MSD VL Agilent Technologies 1100 Series Liquid Chromatography en un rango de m/z 50 a 1500, con detector Masa APCI. En Fr1-9 se identifica la Pulegona al comparar con su espectro homónimo aportado por la base de datos. En Fr1-15, el Germacrone, correspondiente a m/z 218 [M+] y los otros fragmentos característicos aportados por la base de datos permitió realizar posibles vías de fragmentación con la obtención de diferentes compuestos con una m/z coincidente a algunas señales de la fracción. Se determinó la actividad antimicrobiana en Fr1-9, Fr1-14, Fr1-15, Fr1-16, Fr1-20, Fr1-22, EDCMT y Fr2-10 a través del método de difusión: “cilindro placa” (USP 29) y el “Contact bioautography” como método bioautográfico. Se emplearon los microorganismos: Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 8739, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 y Staphylococcus aureus ATCC 29737 y el antibiótico estándar fue Ceftazidina. Los resultados mostraron inhibición de crecimiento frente a Staphylococcus aureus en todas las fracciones analizadas. La Bioautografía resultó ser un método útil para encontrar componentes naturales activos. De acuerdo al Rf del ácido ursólico, en los sistemas cromatográficos empleados, y la ubicación de los componentes químicos en la placa cromatográfica con actividad antimicrobiana, podría presumirse que uno de los compuestos presentes en el extracto hexánico con acción biológica sería el ácido ursólico.