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Acinetobacter baumannii (A. baumannii) y ‘Candidatus Phytoplasma’ asteris (Fitoplasma) son dos patógenos con diferentes estilos de vida. Por un lado, A. baumannii es un patógeno nosocomial oportunista capaz de generar infecciones en pacientes inmunodeprimidos y gravemente heridos, y está asociado a infecciones de alta mortalidad. Las cepas aisladas de infecciones son generalmente resistentes a múltiples antibióticos y capaces de persistir en condiciones de hambreado severo y desecación. Se postula que dos de los mecanismos que esta bacteria utiliza como estrategia para la subsistencia son la motilidad y la capacidad de adherirse y formar biofilms sobre superficies bióticas y abióticas. En el presente trabajo de tesis se estudió la capacidad de regulación de diversos aspectos fisiológicos y moleculares de A. baumannii en función de la luz y la temperatura, utilizando técnicas biofísicas, de biología molecular y microbiología. Los resultados obtenidos indican que se detecta una temperatura crítica por debajo de la cual el fotorreceptor es funcional, por lo que habría dos niveles de control: la expresión del gen blsA y la fotoquímica de BlsA en función de la luz y la temperatura. Además, se muestra que estos procesos son reversibles. También se muestran resultados que indican que A. nosocomialis y A. sp. A47 son capaces de regular la motilidad en función de la luz y esto tiene una dependencia de la temperatura diferente a A. baumannii, pudiendo modular la motilidad en función de la luz incluso a temperaturas compatibles con hospedadores de sangre caliente. Esta capacidad de modular la motilidad a temperaturas moderadamente altas podría deberse a una dotación desigual de genes homólogos a blsA, cuyos productos génicos podrían tener estructuras que les permitan funcionar en otros rangos de temperaturas. Mostramos que el mensajero secundario diguanilato cíclico (c-di-GMP) estaría involucrado en la transducción de la señal lumínica y que A. baumannii cuenta con 11 genes putativos que codificarían por diguanilato ciclasas (DGCs) y Fosfodiesterasas (PDEs), enzimas responsables de su síntesis y degradación. Otro factor que participaría en la transducción de la luz es el producto del gen bof, el cual presenta un dominio de unión a oligonucleótido/oligosacárido. Este, actuaría como un regulador transcripcional de los genes involucrados en la formación de biofilms y su función dependería de BlsA. Por el contrario, el efecto del producto del gen bof en la motilidad sería a través de una molécula fotosensible distinta a BlsA y a temperaturas de 24° C y 37° C. Finalmente, mostramos que la modulación por luz observada para la susceptibilidad a antibióticos en cepas clínicas de A. baumannii se correlaciona con la modulación de los niveles de expresión de genes que codifican por componentes de dos bombas de eflujo capaces de expulsar tigeciclina (TIG), como AdeABC y AdeIJK. Esta modulación no dependería de BlsA y cursaría por medio de la generación de 1O2. Por su parte, Fitoplasma es un patógeno de plantas que produce efectos devastadores en más de 700 cultivos de alto y bajo interés agronómico, incluyendo varios destinados a la alimentación. Es un microorganismo endosimbionte obligado que se transmite a través de insectos del orden Hemiptera, por lo que son capaces de vivir en asociación con dos hospedadores diferentes. Cuando un insecto portador de fitoplasma se alimenta de la planta inyectando su estilete, deposita a la bacteria en ese compartimiento, donde se desarrolla y disemina. Fitoplasma tiene un genoma muy reducido y carece de muchos genes que codifican por componentes de vías catabólicas, por lo que se cree que la utilización del malato, abundante en el floema, puede ser la clave para la obtención de energía y poder reductor a través de la vía del malato. Utilizando técnicas bioquímicas y de biología molecular, en el presente trabajo de tesis se estudió la cinética de la enzima málica (EM) para comprobar su posible participación en la vía del malato y la regulación de su actividad por diversos metabolitos de dicha vía. Además, se evaluó la estructura cuaternaria y la importancia del residuo de Tirosina de la posición 36 que forma parte del sitio activo. También se evaluó la capacidad de la enzima PduL de participar en la vía del malato y la regulación de su actividad por diversos metabolitos de la vía. Los resultados indicaron que tanto la EM como la PduL tienen la capacidad de participar en la vía del malato para la obtención de energía y poder reductor, que sus actividades están reguladas concertadamente por unos pocos metabolitos (Glutamina, Glutamato y acetil-fosfato) y especialmente por el nivel energético de la célula representado por la relación ATP/ADP. También se vio que el residuo Tyr36 es fundamental para la actividad catalítica de la EM, pero no para la formación y mantenimiento de la estructura dimérica, la cual es especialmente interesante ya que este residuo en un sitio activo es aportado por un brazo proveniente del otro monómero. En el presente trabajo de tesis se ha logrado ampliar el conocimiento de diversos aspectos de estos dos patógenos con diferentes estilos de vida. A partir de la información generada en este trabajo se pueden proponer diferentes blancos de acción para combatirlos de manera de controlarlos y evitar así las infecciones que pueden producir.

Esta tesis se enfoca en el estudio de contaminantes magnéticos emitidos por las distintas actividades humanas: emisiones vehiculares e industriales mediante el uso de colectores de origen vegetal, tanto pasivos (líquenes sobre cortezas de árboles) como activos (trasplante de líquenes), y mediciones in situ de líquenes en la ciudad de Tandil en Argentina. Además, se evalúan las partículas magnéticas liberadas por las chimeneas de una coquera en la localidad de Ensenada, La Plata. El presente estudio de contaminantes se centra en la utilización de técnicas de magnetismo ambiental y el uso de biomonitores como herramienta de bajo costo y relativamente rápida para la identificación de áreas críticas en ciudades; asimismo, como complemento de las técnicas tradicionales en el monitoreo de la contaminación. Los estudios de magnetismo ambiental permiten determinar las variaciones en la mineralogía, concentración y tamaño de grano de los minerales magnéticos en un material, las cuales dan información sobre las fuentes y características de la formación del material. Si bien es de relevancia la caracterización magnética de los portadores, también lo es su relación con elementos potencialmente tóxicos, de allí su utilización para la investigación del impacto de contaminantes en distintos ambientes. El estado de contaminación atmosférica de diferentes ambientes suelen ser analizados usando técnicas y parámetros magnéticos, los cuales permiten su monitoreo. La utilización de técnicas magnéticas de monitoreo in situ permite conocer las propiedades de acumulación de elementos contaminantes de los biomonitores a utilizar, en este caso particular, Parmotrema pilosum, la distribución de los contaminantes sobre el espécimen y su variación en el tiempo. Además, la realización de mediciones in situ contribuye a la preservación de la especie y permite la evaluación de la contaminación ambiental en periodos cortos o prolongados. 14 En el Capítulo 1: Introducción, se realiza una descripción de los antecedentes en el área de estudio, los tipos de contaminantes, las fuentes y las relaciones con los minerales magnéticos. Además, se describe cómo el material particulado afecta a la salud humana y las propiedades magnéticas en la identificación de la contaminación ambiental. En el Capítulo 2: Métodos y áreas de estudio, en una primera parte se realiza una descripción de los parámetros magnéticos medidos directa e indirectamente, estudios termomagnéticos, y no magnéticos como microscopia de barrido electrónico. Además, se detallan los equipos utilizados. En la segunda parte, se describen las áreas de estudios de los diferentes trabajos: ciudad de La Plata y Tandil, y se detalla el diseño de muestreo. En el Capítulo 3: Biomonitores de la contaminación atmosférica, se diferencia entre un biomonitor y un bioindicador, además se describen distintos tipos de biomonitores (líquenes, hojas, Tillandsias y musgos), sus características principales y la utilización de biomonitores en problemas de contaminación atmosférica. En el Capítulo 4: Contaminación del aire causada por MP de origen industrial a partir de la producción de coque de petróleo en La Plata, se presenta el estudio de las propiedades magnéticas de muestras de residuos carbón emitidos de las chimeneas de una coquera y su dispersión con los vientos predominantes de la zona. En el Capítulo 5: Monitoreo magnético pasivo de la contaminación del aire en Tandil usando la especie Parmotrema pilosum, se presenta la investigación de la utilización de colectores pasivos (líquenes) y técnicas magnéticas para monitorear la contaminación del aire. Y se describe la determinación de las áreas de mayor concentración de minerales magnéticos y su relación con las fuentes de emisión de contaminantes. Finalmente, en el Capítulo 6: Monitoreo magnético in situ y activo utilizando la especie Parmotrema pilosum, se describe la técnica de trasplante de P. pilosum (monitoreo activo) y la realización de un monitoreo temporal de la calidad del aire en distintos sitios de Tandil. Además, se presenta un estudio innovador de mediciones magnéticas sobre líquenes Parmotrema pilosum sin recolectarlos y afectarlos, permitiendo la realización de monitoreos in situ.