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Las estructuras cuyas dimensiones se encuentran en la escala nanométrica poseen propiedades físico-químicas estrechamente relacionadas con su tamaño, forma y morfología y que difieren notablemente de las de su equivalente de mayor tamaño. Esto ha conllevado al estudio intensivo de estos sistemas las últimas décadas, donde se han encontrado propiedades magnificadas e incluso únicas y que han desencadenado avances tecnológicos importantes y el desarrollo de conocimiento en un área que está en la frontera de los fenómenos cuánticos. Una dirección importante en la síntesis de nanopartículas es la expansión a nanoestructuras híbridas conformadas por dominios discretos de diferentes materiales arreglados de manera controlada, conocidas como heteroestructuras y cuyas ventajas incluyen la multifuncionalidad, la generación de nuevas funciones y propiedades mejoradas no disponibles con un solo componente.Tres familias de nanopartículas formadas por un único núcleo de óxido de hierro y cáscaras de sílice amorfa fueron preparadas por métodos químicos. En cada caso, primero se obtuvo un ferrofluido de nanopartículas monodispersas de óxido de hierro cubiertas con ácido oleico, por la descomposición térmica de precursores orgánicos. La cobertura orgánica se aprovechó para promover el intercambio de ligandos en un proceso de microemulsión inversa, permitiendo transferir las partículas a la fase polar, donde ocurre de manera confinada la hidrólisis y condensación de TEOS (Si(OC2H5)4) y se forma una cáscara de SiO2 amorfo sobre cada nanopartícula. Los parámetros de síntesis fueron variados para obtener diferentes tamaños de núcleos y espesores de cáscaras.La transferencia de fase de nanopartículas hidrofóbicas por la formación de una cáscara química y mecánicamente resistente, es una alternativa interesante como primer paso de modificación superficial que permita la creación de estructuras más complejas y funcionales, aprovechando la conocida versatilidad de los compuestos organosilanos. A través de este método se obtienen partículas de tamaño y morfología homogénea, proveyendo un sistema que puede utilizarse como modelo para estudiar fenómenos básicos del magnetismo en la nanoescala.Núcleos de diámetros entre 8 y 13 nm con cáscaras de entre 1 y decenas de nanómetros fueron caracterizadas por difracción de rayos X (DRX), microscopia electrónica (TEM y SEM), y dispersión de rayos X a bajos ángulos (SAXS), confirmando la composición y morfología esperadas y la estabilidad de los coloides. Se llevó a cabo una intensa caracterización magnética, reconociendo la dependencia de los parámetros magnéticos principales con cada distribución de tamaños y las distancias entre núcleos.Todas las variaciones en los parámetros extraídos de la caracterización magnética muestran una dependencia con el inverso de la distancia entre partículas al cubo, permitiendo asociarlos directamente con un aumento en las interacciones dipolares a medida que disminuye el espesor de las cáscaras de sílice. Una frontera entre sistemas interactuantes y no interactuantes es identificada y discutida.

Fil:Podhajcer, Osvaldo Luis. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Dos objetivos principales fueron planteados en este trabajo: 1) investigar la heterogeneidad celular en carcinomas mamarios humanos, caracterizando distintas subpoblaciones celulares respecto a proliferación y expresión de diversos marcadores tumorales; 2) obtener anticuerpos monoclonales (AMC) contra estos tumores, con propiedades citotóxicas, que reconozcan células indiferenciadas, de alto potencial proliferativo. Los estudios de heterogeneidad celular fueron realizados utilizando muestras tumorales humanas, la proliferación evaluada mediante incorporación de [3H]Timidina y marcadores por inmunohistoquímica. Los resultados permitieron establecer una secuencia de expresión de marcadores a medida que progresa la diferenciación celular y disminuye la capacidad proliferativa. Pudieron identificarse marcadores asociados a distintas etapas de la diferenciación (NCA90, receptor estroncio, receptor de progesterona, TAG72, CaMBr1, CEA) y otros que comienzan a expresarse en células indiferenciadas, altamente proliferativas, y continuarían durante todo el proceso de diferenciación (Ag2.15, PEM). Se investigaron también las propiedades del AMC FC-2.15 (anti-Ag2.15) desarrollado utilizando como inmunogeno un carcinoma mamario humano indiferenciado. FC-2.15 presento una potente citotoxicidad contra células Ag2.15+ mediando lisis por complemento humano, reconocio un antígeno presente en membrana plasmática en alta densidad (2,8x10 6 /célula) y fue lentamente internalizado. Los resultados presentados en este trabajo sugieren que FC-2.15 podría ser útil en inmunoterapia de pacientes con neoplasias Ag2.15+.

El presente trabajo de tesis estuvo dedicado al estudio de la línea celular de tumor de mama humano MCF-7 considerando su heterogeneidad celular, sus características de crecimiento en un medio químicamente definido y su respuesta a diversos factores de crecimiento, hormonas y agentes moduladores de la diferenciación.

La primera parte del Trabajo de Tesis se relacionó con la modulación de la liberación del neurotransmisor simpático a través de adrenoceptores presinipticos. Los resultados presentados en el Capítulo I son compatibles con la hipotesis de que las varicosidades simpáticas poseen receptores de tipo β, los cuales participan de un mecanismo facilitador de la liberación de noradrenalina. Así lo sugiere el hecho de que en el bazo perfundido de gato el agonista β (-)-isoproterenol haya incrementado la liberación de noradrenalina inducida por estimulacion nerviosa y que dicho efecto haya sido antagonizado por el bloqueante (-)-propranolol(Tablas 1 y 2; Figuras 6 y 7). Los receptores presinápticos β serían estereoespecíficos pues el (+)isoproterenol no modifico la liberación del neurotransmisor simpático (Tabla l; Figura 6).Como se sabe, la estereoespecificidad para los ligandos también es una característica de los receptores β postsinápticos. El análisis de los datos obtenidos con (-)-isoproterenol y (-)-propranolol (Figura 8), y la comparación de los efectos del (-)-isoproterenol a diferentes frecuencias de estimulación (Figura 9), sugieren que el mecanismo regulatorio mediado por receptores presinápticos β podría ser activado por el mismo neurotransmisor liberado al espacio sináptico. Sin embargo, diversas evidencias señalan que la adrenalina circulante podría ser un importante activador de este mecanismo. En el Capítulo II se analizó la influencia de la temperatura sobre el mecanismo regulatorio β presináptico. La regulación de la neurotransmisión simpática a través de receptores β presinápticos sería un mecanismo sensible a la temperatura, pues en el bazo perfundido de gato el (-)-isoproterenol 14.0 nM aumentó la liberación de noradrenalina cuando las estimulaciones se hicieron a 37°C mientras que la droga no tuvo efecto a 27°C (Figura 10). El inhibidor de la fosfodiesterasa l-metil-3-isobutilxantina (MIX) 0.5 mM se comportó en forma similar al (-)-isoproterenol frente al cambio de temperatura, observandose un incremento en la liberación de noradrenalina a 37°C y no a 27°C (Figura ll). La similar dependencia de ambas drogas con respecto a la temperatura sugiere que la activación de los receptores presinípticos β aumenta la liberación de noradrenalina a través de un mecanismo en el cual participa el AMP cíclico.La ausencia de los efectos del (-)-isoproterenol y MIX a 27°C podría deberse a una menor actividad de la adenilato ciclasa o a una alteración en un paso posterior a la síntesis de AMPcíclico en el terminal nervioso. Sé estudió la influencia de la temperatura sobre los efectos de otro inhibidor de la fosfodiesterasa, la papaverina. A diferencia de MIX,papaverina 27 nM aumentó el eflujo basal de radiactividad. Por otra parte, durante la estimulación nerviosa papaverina incrementó la liberación del neurotransmisor a 37'C y también a 27°C (Figura 12). Estos resultados indican que a nivel de los terminales nerviosos simpáticos, Mix y papaverina podrían actuar por distintos mecanismos aün cuando ambas drogas sean inhibidoras de la fosfodiesterasa. Puesto que ni el efecto granular de la papaverina ni su efecto durante la estimulación nerviosa sufrieron modificaciones importantes al variar la temperatura, se sugirió que podría haber una relación entre ambas acciones de la droga. Cabe señalar que esta posible relación ya fue sugerida por Cubeddu y col. (1974b). En muchos tejidos la actividad β-adrenérgica decrece a medida que aumenta la edad del individuo, pero los resultados obtenidos en la aorta torácica aislada de gato (Capítulo III, Figura 14A)indican que en este tejido la actividad de los receptores β-presinápticos no disminuye entre los 2-3 meses y 1-6 mas años de vida. Existe la posibilidad de que en esta especie ocurran cambios en una etapa mas temprana del desarrollo pero también es factible que el proceso de maduración no afecte en forma sensible el mecanismo regulatorio β presináptico en la aorta del gato. Cabe recordar que la influencia de la edad sobre la actividad β adrenérgica no ha podido ser detectada en todos los tejidos ni en todas las especies estudiadas y hasta se encontraron diferencias en distintas porciones de una misma especie animal. Los gatos jóvenes y adultos sin embargo, presentaron diferencias relacionadas con el mecanismo inhibitorio de la liberación de noradrenalina mediado por receptores presinípticos α. De acuerdo con los datos obtenidos en la aorta torácica y la membrana nictitante (Figura 15), la activación de dicho mecanismo por la noradrenalina liberada al espacio sináptico es menor en los animales jóvenes que en los adultos. Esto podría deberse a distintos factores, como el número de receptores presinípticos, la afinidad de la noradrenalina por dichos receptores o la dimension del espacio sináptico.A nivel de los receptores α postsinapticos no se hallaron diferencias relacionadas con la edad. Otra diferencia entre los dos grupos de animales fue que en ausencia de calcio extracelular, la liberación remanente de noradrenalina inducida por estimulación transmural fue mayor en la aorta de los animales jóvenes, sugiriendo que podría haber cambios en la disponibilidad de calcio a nivel de los terminales nerviosos simpáticos. En la segunda parte del Trabajo de Tesis (Capítulo IV) se estudiaron los efectos del pimozide sobre la contracción inducida por noradrenalina en el musculo liso. El pimozide es considerado como un bloqueante específico de los receptores dopaminérgicos del sistema nervioso central y tejidos periféricos pero en la arteria mesentérica inferior aislada de gato parece actuar como un antagonista competitivo α-adrenérgico , pues desplazó hacia la derecha las curvas de dosis-respuesta inducidas por noradrenalina (Figura 17). Sin embargo, experimentos adicionales (Figuras 20 y 21) mostraron que en esta arteria el pimozide actuaría a través de otro mecanismo,probablemente relacionado con el calcio. También en otras preparaciones de músculo liso, el pimozide inhibió las respuestas inducidas por noradrenalina, aunque se hallaron diferencias de sensibilidad frente a la droga (Tablas 13 y 14). Estos resultados señalan que el pimozide no es una droga adecuada para ser utilizada como un bloqueante específico de los receptores dopaminérgicos en todos los tejidos periféricos, puesto que la droga presenta otros efectos. Particularmente, las arterias fueron muy sensibles a la acción in bitoria del pimozide.

Los paisajes son mosaicos de elementos que a toda escala se organizan formando un patrón, el cual refleja la acción de procesos subyacentes y tiene influencia en procesos ecológicos, manifestándose a través de la distribución asimétrica de los objetos, es decir, de la heterogeneidad. En la Pampa Deprimida, a pesar de los numerosos trabajos que caracterizan la vegetación, las relaciones entre geoformas y comunidades vegetales no se han explorado en detalle, sobre todo respecto al acompañamiento mutuo que se establecería entre las gradaciones geomorfológicas y las ecológicas.El objetivo general es ajustar el modelo conceptual de la estructura del paisaje en un sector de la cuenca inferior del arroyo del Azul y, específicamente, caracterizando el mosaico paisajístico a partir de su heterogeneidad geomorfológica, hidrológica y florística. El área de estudio abarca la porción más deprimida de la unidad geomorfológica Planicie de Agradación con Costra Calcárea Estratiforme (PACCE), donde las Unidades de Análisis se situaron sobre una transecta perpendicular al eje principal de escurrimiento superficial, linealizado así el gradiente topográfico y de aguas.La metodología consistió en la caracterización a nivel de Unidades de Análisis y de unidades muestrales. En las primeras, se consideró la topografía construyendo modelos de elevación y redes de drenaje; los suelos se caracterizaron con la descripción de perfiles; el agua freática somera se analizó instalando freatímetros, registrando niveles y extrayendo muestras. La vegetación se describió a partir de la fisonomía y composición florística. Las unidades muestrales se dispusieron cada 50 m en dos transectas paralelas de 700 m (orientación SE-NO). En cada una se consideró la topografía (altura) y el drenaje (n° de píxeles que allí drenan), el suelo (pH, CE, y % descubierto) y la vegetación. Esta última se analizó obteniendo la lista de especies para cada unidad y calculando las distancias florísticas entre ellas, para luego armar clasificaciones que permitan discriminar los grupos más robustos y sitios intermedios. Luego, se aplicó el método IndVal sobre los grupos, y con sus resultados se analizaron los sitios intermedios. Finalmente, se graficaron las distancias florísticas, geográficas y ambientales entre todas las unidades; se interpretó su ubicación y se correlacionaron las matrices de datos. La PACCE propiamente dicha constituye la matriz del paisaje. Las dunas parabólicas, cubetas de deflación, microlomas y microcanales, son elementos discretos, diferenciables de la matriz por sus características geomorfológica. La interpretación de perfiles de suelos mostró que no existen discontinuidades en la depositación del material parental, y que las diferencias observadas entre elementos se deben principalmente al relieve. Para las dunas parabólicas y microlomas, se infiere aporte eólico posterior. Los microcanales constituyen geoformas incipientes para las que se infieren episodios de excavación recientes. El escurrimiento superficial a pequeña escala se encuentra condicionado por las dunas y microelevaciones, que modifican las divisorias de aguas y alteran la orientación de los microcanales (hacia el norte). Respecto al agua subterránea, se deduce la existencia de flujos locales en microcanales y cubetas de deflación, de dirección transversal al flujo regional. La composición iónica estaría condicionada por los procesos de superficie, presentando alta variabilidad en distancias reducidas. Se reconoció un gradiente sureste-noroeste de aumento del contenido de iones y disminución de las alturas, acompañado de mayor proporción de suelos con alcalinidad superficial. Hacia el noroeste aumenta la representatividad espacial de los sectores con estas características.Se reconocieron 4 de las 5 unidades de vegetación típicas de la Pampa Deprimida, manifestándose una alta tasa de reemplazo de especies en distancias reducidas, acompañado de valores de diversidad alfa heterogéneos. La representatividad espacial de cada asociación es variable, aumentando la proporción de estepas de halófita hacia el noroeste. Las unidades intermedias presentan especies propias de las praderas húmedas de mesófitas, en concordancia con la alta proporción de ambientes sometidos a anegamientos presentes en el área de estudio. Hacia el noroeste se registró mayor proporción de especies indicadoras para las estepas de halófitas.La heterogeneidad manifestada en las asociaciones de especies se relaciona con las gradaciones geomorfológicas; la composición florística responde a variaciones locales en topografía y alcalinidad, existiendo alta correlación entre las gradaciones ambientales y florísticas, no así con las geográficas. Las praderas húmedas de mesófitas se ubican en microcanales de drenaje y vías de escurrimiento. Las estepas de halófitas se localizan en posiciones topográficas medias, dentro de la PACCE propiamente dicha. En esta última, todas las unidades de muestreo se clasificaron como estepas de halófitas o sitios intermedios, constituyen un conjunto de sitios con pH alcalino desde superficie y posición topográfica media. Las unidades intermedias en composición florística se localizaron en bordes de cubetas y microcanales, y flancos de dunas y microlomas, manifestándose como zonas de transición con los elementos del paisaje vecinos.Durante esta investigación, se exhibe cómo los factores que operan en niveles jerárquicos superiores restringen a los inferiores. Al mismo tiempo, los elementos geomorfológicos reconocidos a escalas amplias imponen restricciones ambientales similares a las producidas por aquellos observables en escalas espaciales reducidas.