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El grano de cebada cervecera (Hordeum vulgare L.)debe conservar su capacidad germinativa para poder ser malteado. El brotado pre-cosecha (BPC)y el pre-germinado obstaculizan la consecución de este objetivo. El objeto de esta tesis fue desarrollar conocimientos y herramientas tecnológicas que permitan manejar la susceptibilidad a estas adversidades en pre- y pos-cosecha del cultivo. Se evaluó el efecto del ambiente durante el llenado de granos sobre la dinámica de salida de la dormición y la susceptibilidad a BPC del cultivo y se estudiaron relaciones entre el nivel de pregerminado y la longevidad potencial (Ki)de lotes de cebada, en los principales cultivares comerciales de uso actual en Argentina. Ni la disponibilidad de nitrógeno del suelo ni el fotoperíodo medio durante el llenado tuvieron efectos sobre el nivel de dormición de los granos y la susceptibilidad a BPC del cultivo. La baja disponibilidad hídrica durante el llenado y las altas temperaturas imperantes durante las últimas etapas de este período aumentaron la susceptibilidad a BPC en todos los cultivares con resistencia intermedia a brotado, existiendo interacción entre ambos factores ambientales. Se desarrollaron modelos predictivos de la susceptibilidad a BPC basados en los efectos del ambiente térmico, para cada cultivar. Si la susceptibilidad es alta y existe pronóstico de lluvias el productor de cebada puede anticipar la cosecha y secar artificialmente. El pre-germinado no afectó la viabilidad inicial pero sí la longevidad potencial de los lotes de cebada. Se encontraron asociaciones positivas entre este último parámetro y el valor de Falling Number de los lotes. Esto permite la predicción de la viabilidad de un lote de cebada durante su almacenamiento en la maltería, y el diseño de las condiciones de almacenaje según el nivel de daño por pre-germinado y los requerimientos de la industria

La brucelosis es una enfermedad zoonótica de distribución mundial, con un alto impacto en la salud pública y en la economía. De las 10 especies de Brucella reconocidas, B. abortus es la causante de la brucelosis bovina. La publicación del genoma de varias especies de Brucella facilitó el diseño de distintos esquemas basados en marcadores moleculares. El objetivo de la primera parte de la tesis fue emplear un esquema de análisis multilocus de VNTR (Multiple Locus VNTR Analysis, MLVA) en 58 aislamientos de B. abortus de Argentina. El empleo de este esquema de MLVA nos permitió discriminar entre las dos biovariedades de B. abortus analizadas y poner de manifiesto la gran diversidad de genotipos de esta especie circulantes en el país. Además, a través del análisis mediante goeBURST se pudo relacionar a todos los genotipos entre sí y proponer al genotipo de la biovariedad 2, E1, como genotipo fundador. Este hecho ya había sido propuesto por Margaret Meyer en los años 90 basándose únicamente evidencias bioquímicas, en este trabajo se aportan, además, evidencias moleculares. Dada su localización expuesta, las lipoproteínas bacterianas cumplen una gran variedad de funciones, muchas de ellas asociadas a virulencia. En la actualidad, solo tres lipoproteínas de B. abortus, Omp10, Omp16 y Omp19, se encuentran bien caracterizadas. Como primer objetivo de la segunda parte de la tesis, nos propusimos conocer cuántas lipoproteínas están codificadas por el genoma de B. abortus S2308 y qué roles cumplen en la bacteria. Se identificaron 58 lipoproteínas de B. abortus mediante herramientas bioinformáticas. Para determinar su rol en virulencia, se generaron cepas mutantes mediante disrupción integrativa de los genes que codifican para 24 de ellas y posteriormente, se evaluó si presentan fenotipo atenuado en el modelo murino de infección esplénica. Una de las mutantes resultó atenuada (B. abortus Lp1, siendo BAB1_0009 el marco de lectura interrumpido) por lo que se realizaron diferentes estudios para caracterizarla. Posteriormente, se analizó la capacidad de generar una respuesta inmune protectora de la cepa mutante atenuada empleando el modelo de protección esplénica en ratones BALB/c. Los resultados mostraron una capacidad protectiva superior a la generada por la cepa B. abortus S19, empleada como cepa vacunal en la actualidad en bovinos. Para determinar si la 3 atenuación en virulencia de la mutante en B. abortus también se observa al interrumpir los genes ortólogos de B. suis y B. melitensis, se construyeron las respectivas cepas mutantes, se evaluó su virulencia y se caracterizaron. Se confirmó el fenotipo atenuado sólo en la cepa mutante de B. suis. Esta parte de la tesis contribuyó a determinar los posibles roles que cumplirían las lipoproteínas en B. abortus y a identificar a una lipoproteína, OppA, codificada por BAB1_0009, que participaría en virulencia en B. abortus y B. suis y que, al menos la cepa mutante B. abortus Lp1, sería capaz de generar una respuesta inmune protectora en el modelo murino. Estos resultados sientan las bases para el diseño y evaluación de nuevas vacunas contra la brucelosis.

La brucelosis osteoarticular es la localización más común de la enfermedad activa en el hombre. Sin embargo, los mecanismos inmunomoleculares implicados no han sido completamente dilucidados. Los resultados obtenidos en esta tesis indican que B. abortus invade y se replica en los osteocitos de la línea murina (MLO-Y4) inhibiendo la expresión de conexina-43, sin afectar su viabilidad e induciendo la secreción de mediadores proinflamatorios, entre los cuales RANKL y TNF-α fueron los principales involucrados en la inducción de osteoclastogénesis. La respuesta de los osteocitos pudo ser modulada por macrófagos infectados, los cuales redujeron la expresión de conexina-43 e indujeron la muerte de los osteocitos por apoptosis. Los osteocitos son la forma totalmente diferenciada de los osteoblastos (células implicadas en la secreción de matriz ósea). B. abortus fue capaz de invadir y multiplicarse en osteoblastos inhibiendo la secreción de matriz mediante un mecanismo que depende de la activación de la vía autofágica. B. abortus invade pero no se multiplica en los linfocitos B, indicando que constituyen un nicho de persistencia de la bacteria. Nuestros resultados demostraron que los linfocitos B están implicados en el daño óseo al inducir osteoclastogénesis mediante un mecanismo que involucra a RANKL. En conjunto estos resultados indican que B. abortus crea un microambiente proinflamatorio y proosteoclastogénico el cual podría contribuir a la destrucción ósea y articular observada en pacientes con complicaciones osteoarticulares de la brucelosis.