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La N-glicosilación de proteínas se inicia en el retículo endoplásmico con la transferencia de un oligosacárido de estructura Glc3Man9GlcNAc2 desde dolicol-P-P a polipéptidos nacientes [1]. El oligosacárido unido a la proteína es inmediatamente procesado por glucosidasas específicas en el lumen del reticulo endoplásmico. La glucosidasa I hidroliza el residuo de Glc más externo en unión α(1,2) y luego la glucosidasa II hidroliza los dos residuos de Glc más internos en unión α(1,3). También pueden removerse algunas manosas por acción de manosidasas en el RE. Luego las glicoproteínas son procesadas a lo largo del camino secretorio por una serie de glicosidasas y glicosiltransferasas, con hidrólisis de restos de manosa, transferencia de N-acetilglucosamina, galactosa, ácido siálico y fucosa, lo que da lugar a la variedad de estructuras encontrada en las glicoproteínas maduras. Por marcación con [14C]glucosa en células de mamíferos, plantas, hongos y tripanosomátidos se detectó la formación de [glucosa-14C]-Glc1Man5-9GlcNAc2 unidos a proteínas [2-10]. Los resultados experimentales indicaban que estos compuestos se formaron en parte por glucosilación de los correspondientes Man5-9GlcNAc2-Prot sin intervención de derivados de dolicol. En todos los casos los restos de Glc fueron removidos y no aparecieron en las glicoproteínas maduras. Se han hecho algunos estudios en sistemas libres de células con microsomas de hígado de rata para estudiar estas reacciones de glucosilación de oligosacáridos unidos a glicoproteínas [10]. En ellos se aprovecharon los aceptores endógenos presentes en los microsomas utilizados comofuente de actividad glucosilante. Con el objeto de estudiar en detalle esta nueva reacción de procesamiento de glicoproteínas ampliamente distribuida en la naturaleza, en el presente trabajo de Tesis se desarrolló un ensayo in vitro específico para esta serie de reacciones. El ensayo utiliza UDP-[14C]Glc como sustrato dador de restos de Glc radioactivos y una glicoproteína con oligosacáridos de tipo polimanosa como sustrato aceptor. Las glicoproteínas deben estar desnaturalizadas para poder actuar como aceptoras. La reacción necesita Ca++y pH neutro. Mediante este ensayo se detectó la actividad de glucosiltransferasa en microsomas de hígado de rata, porotos, Mucor rouxii, Crithidia fasciculata y Trypanosorna cruzi. En el ensayo de actividad de la UDP-Glc:glicoproteína glucosiltransferasa, el resto de Glc es transferido en el mismo tipo de unión α(1,3) y al mismo resto de Man que en el intermediario Glc1Man9GlcNAc2-P-P-dolicol. En Crithidia fasciculata, Leptomonas samueli y Trypanosoma cruzi se encontró una actividad equivalente a la glucosidasa II de otros eucariontes pero no se encontró actividad de glucosidasa I. Estos resultados sugieren que la glucosidasa II es la enzima que hidroliza in vivo los restos de Glc transferidos por este mecanismo. La actividad se localizó por fraccionamiento subcelular en el reticulo endoplásmico. Utilizando vesículas microsomales intactas de hígado de rata se caracterizó a la UDP-Glc:glicoproteína glucosiltransferasa como una proteína soluble del interior del retículo endoplásmico: Mostró latencia para la glucosílación de un aceptor exógeno y fue resistente a proteólisis en dichas vesículas. Se la pudo extraer soluble en medio isotónico con bajas concentraciones de detergentes, mediante métodos mecánicos sin utilizar detergentes y con pH alcalino. Se extrajo en la fase acuosa por partición con Triton X-114. La UDP-Glc:glicoproteína glucosiltransferasa de hígado de rata se purificó a homogeneidad. En electroforesis desnaturalizante en medio reductor corrió como una única banda de peso molecular aparente 160 kDa y en condiciones nativas se comportó como un homodímero. La enzima pura exhibió las mismas propiedades observadas en preparaciones crudas al desarrollar el ensayo in vitro: pH óptimo neutro, requerimiento absoluto de Ca++ para su actividad y de UDP-Glc como dador de Glc. Reconoció como sustrato aceptor únicamente a glicoproteínas desnaturalizadas y no a las mismas glicoproteínas en estado nativo. Esto no se debió a una diferente accesibilidad del oligosacárido entre la forma nativa y la desnaturalizada sino al reconocimiento por parte de la glucosiltransferasa de algún factor estructural en las glicoproteínas desnaturalizadas. Se generó un antisuero de conejo contra la UDP-Glc:glicoproteína glucosiltransferasa de hígado de rata capaz de reconocera la proteína desnaturalizada y nativa. Se obtuvo la secuencia de amino ácidos del extremo amino terminal y de fragmentos internos de la glucosiltransferasa de hígado de rata. Los datos previos junto con los presentados en esta Tesis permiten en conjunto confirmar la existencia de un mecanismo de transferencia de un resto de Glc a oligosacáridos de tipo polimanosa en glicoproteínas. La glucosiltransferasa involucrada, una proteína soluble del retículo endoplásmico, reconoce como sustratos a glicoproteínas que aún no han adoptado su estructura nativa. La glucosidasa II hidroliza el residuo de Glc transferido por ésta glucosiltransferasa. Este ciclo de glucosilación- deglucosilación continuaría hasta que las glicoproteínas adoptan su estructura nativa y dejan de ser sustrato de la glucosiltransferasa.

El presente trabajo de Tesis Doctoral tuvo el objetivo de estudiar los glaciares y glaciares de escombros en tres regiones montañosas a lo largo de la Cordillera de los Andes Argentina: Monte San Lorenzo (Provincia de Santa Cruz), Volcán Domuyo (Provincia de Neuquén), y Nevados de Cachi (Provincia de Salta). Cada uno de estos sitios presenta características climáticas propias, representativas de tres porciones particulares de los Andes: Andes Patagónicos Meridionales, Andes Centrales Meridionales y Andes Desérticos respectivamente. Considerando las particularidades de los cuerpos de hielo presentes en cada región, se evaluaron imágenes satelitales ópticas Landsat, ASTER y ALOS, así como los modelos digitales de elevación globales y locales ASTER GDEM, SRTM y ALOS) para la identificación y la compilación de un inventario de glaciares preciso y técnicamente eficiente. La identificación y mapeo de hielo libre de detrito fue evaluada en detalle en la zona del Monte San Lorenzo, donde se comparó el área captada por los cocientes de bandas de imágenes Landsat y la digitalización manual, encontrándose diferencias menores al 4%. Con algunas salvedades, puede asumirse que el promedio de una serie de digitalizaciones manuales en imágenes de alta resolución puede ser utilizado como referencia para conocer el error de mapeo en imágenes de menor resolución. Sin embargo, en un experimento de digitalización manual por parte de varios operadores que incluyó 10 glaciares de menos de 5 km² con hielo cubierto y descubierto, las digitalizaciones manuales sobre imágenes ALOS PRISM (2.5 m) generaron contornos glaciares más grandes en un 4.8% en término medio respecto de aquellas derivadas del cociente de bandas Landsat (30 m). Asimismo, encontramos que la comparación entre digitalizaciones manuales entre imágenes de media (Landsat) y alta (ALOS PRISM) resolución, no necesariamente produce resultados más precisos, debido a la aparición de mayor cantidad de detalles y al bajo contraste óptico en las imágenes pancromáticas. Debido al bajo error respecto de la digitalización manual, los menores tiempos de ejecución y la replicabilidad de los resultados, se concluye que es preferible utilizar los cocientes de bandas para delimitar el hielo libre de detrito, restringiendo únicamente la digitalización manual para las correcciones requeridas en las partes incorrectamente mapeadas como el hielo cubierto y en sombras. Para establecer el error en el mapeo de glaciares con hielo cubierto, se sugiere calcular la variabilidad en píxeles para distintos tamaños de glaciares, a partir de los tamaños máximos y mínimos digitalizados manualmente. Una vez hallada dicha variabilidad, puede calcularse un buffer para la totalidad de los glaciares inventariados. Se generó un método combinado multiespectral-morfométrico para identificar hielo cubierto en base a un árbol de decisiones, agregando a un cociente de bandas umbrales de temperatura en superficie, índice de vegetación, máscara de agua y pendiente. Esta metodología es especialmente sensible a la inclinación de las lenguas de hielo cubierto y funciona mejor cuando la misma es de alrededor de 12º. Si bien la cantidad de hielo cubierto varió según el glaciar (entre el ~50-150% en la región del Monte San Lorenzo) y los contornos generados por esta clasificación deben ser corregidos manualmente, los mismos constituyen una base importante para la localización e identificación de sectores de hielo cubierto, reduciendo notablemente los tiempos de digitalización manual en zonas extensas. El efecto de la resolución espacial en el mapeo de glaciares de escombros fue investigado mediante imágenes ASTER (15 m), ALOS AVNIR2 (10 m) y ALOS PRISM (2.5m). La variabilidad en el error de mapeo disminuye con la resolución espacial desde ±76% a ±33% y ±22% respectivamente. Se vio que una resolución de 15 m resulta apropiada únicamente para el mapeo de glaciares de escombros activos con frentes bien definidos y con área mayor a 0.1 km², siempre y cuando exista un buen contraste con el entorno. Para la producción de inventarios de glaciares de escombros y lóbulos de talud que incluyan geoformas con superficies del orden de 0.001 km², es necesaria la utilización de imágenes de entre 2.5m a 5m de resolución, mientras que imágenes de aún mayor resolución deben ser implementadas en trabajos que requieran mayor nivel de detalle. Tomando modelos digitales de elevación elaborados a partir de esteropares ALOS PRISM como referencia, se evaluaron las características y el potencial de los modelos globales SRTM y ASTER GDEM en cuanto a los desfases en planimetría y altimetría entre modelos, y las diferencias en los valores de una serie de parámetros topográficos (pendiente, altura máxima, media y mínima, orientación, etc.) de los glaciares y glaciares de escombros. Adicionalmente, se validaron los modelos globales mediante la toma de puntos de control de terreno relevados con instrumental GPS en modo diferencial. Al contrario de otros estudios de similar naturaleza, se encontró para los casos de estudio seleccionados una mejor respuesta del ASTER GDEM por sobre el SRTM. Además de la generación de inventarios actualizados en la medida que las imágenes satelitales lo permitieran, se estudiaron las fluctuaciones glaciarias de las décadas recientes. A su vez, dichos cambios de área fueron investigadas en función de las tendencias de temperatura y precipitación registradas en estaciones meteorológicas dentro de cada zona de estudio, así como también a partir de datos de reanálisis, y contextualizadas en el marco de estudios climáticos de carácter regional. La altura de la isoterma de -1º C y sus cambios en décadas recientes fueron asimismo calculadas para conocer las condiciones termales bajo las cuales se desarrollan glaciares de escombros activos en la actualidad y su interacción mutua. Para la región del Monte San Lorenzo, se inventariaron 213 glaciares y manchones de nieve permanentes, que corresponden a 206.9 km² en el año 2005, y se ubican entre los 500 m y 3776 m de altitud. La línea de equilibrio (ELA) se infirió en 1800 m aproximadamente. Del total de superficie englazada, casi un 10% (20 km²) corresponde a hielo cubierto. A su vez, 44.3 km² de hielo glaciar ha desaparecido entre los años 1985-2008, es decir, el área cubierta de hielo ha mermado en un 18.6% para dicho período, lo cual se traduce en un 0.8% de reducción anual. Adicionalmente, 40 glaciares menores a 0.26 km² han desaparecido por completo desde 1985. Por otra parte, se identificaron y mapearon 141 glaciares de escombros y 36 lóbulos de talud, de los cuales 106 (9.57 km²) y 24 (0.29 km²) fueron clasificados como geoformas intactas (ricas en permafrost) respectivamente. La elevación a partir de la cual aparecen las geoformas intactas es de 1400 m.s.n.m; en promedio, la densidad espacial de glaciares de escombros a partir de esta altura es del 1.37%. Los registros de temperatura diaria extrapolada a 1400 m indican una temperatura media anual del aire desde 2002 de +1.5º C, lo cual indicaría, al menos preliminarmente, un estado de desequilibrio entre los glaciares de escombros y el clima de la última década. Adicionalmente, la isoterma de -1º C, indicadora de la altura límite del permafrost de montaña discontinuo, se habría elevado a razón de 25 m por década desde 1970. En la región del Volcán Domuyo se contabilizaron 112 glaciares equivalentes a 25.6 km² de hielo. Debido a las condiciones climáticas de la región que favorecen la producción de criosedimentos (mayor diafanidad, alta insolación, amplitud térmica) respecto de la región del Monte San Lorenzo, el hielo cubierto ocupa una mayor proporción (36%). Algunos manchones de nieve pequeños se encuentran a alturas tan bajas como 2100 m. Sin embargo, los glaciares mayores parten desde la cumbre misma del volcán y alcanzan, como muy bajo, a los 2700 m. Debido a la abundancia de detrito sobre las lenguas glaciarias, inclusive en las cabeceras o porciones altas de los glaciares, no fue posible estimar la altura de equilibrio. Entre 1990 y 2008, se registró una pérdida de 8.86 km² de hielo, lo cual representa una reducción de ~25.6% aproximadamente en un período de 19 años, es decir 0.46 km² ó ~1.3% por año. Ciento treinta y tres (10.5 km²) glaciares de escombros y 40 (0.5 km²) lóbulos de talud intactos fueron reconocidos, de los cuales 68 (5.8 km²) y 21 (0.3 km²) respectivamente fueron clasificados como activos. Los frentes de los glaciares de escombros activos se encontraron por encima de los 2800 m, y la densidad espacial a partir de esta altura es del 0.87%. Extrapolando los datos de temperatura mensual media de las estaciones meteorológicas Andacollo y Pampa de Chacaico, se encontró que la altura para la isoterma de -1º C para el período 1997-2013 sería de entre 2845 m y 3387 m de altura respectivamente. Dependiendo entonces cuál de las dos estaciones meteorológicas se trate, podría decirse que los glaciares de escombros se encontrarían en condiciones termales de equilibrio o desequilibrio con el clima actual. El Nevado de Cachi está prácticamente desprovisto de glaciares, con tan sólo unos pocos cuerpos de hielo y nieve recongelada que totalizaron 0.2 km² de hielo para el año 2009. Estos glaciares funcionarían como glaciares reservorio, donde el total de la superficie actúa como área de acumulación o de ablación dependiendo del año, y por lo tanto no existiría una línea de equilibrio. Su superficie ha disminuido un 76% entre 1988 y 2009. Los circos dejados por las glaciaciones pleistocénicas, ahora libres de hielo, han constituido un nicho ideal para el desarrollo de importantes glaciares de escombros. Se relevaron 308 (36.5 km²) glaciares de escombros y 114 (2.1 km²) lóbulos de talud intactos, de los cuales 219 (22.4 km²) y 80 (1.3 km²) son activos. Las geoformas activas se sitúan por encima de los 4600 m, y su densidad espacial es del 2.2%. La altura de la isoterma de -1º C fue estimada desde la estación meteorológica de Salta Aeropuerto en 4000 m, por lo que los frentes de glaciares de escombros más bajos se encontrarían a unos -6º C de temperatura media anual del aire. La influencia de la litología en la tipología y tamaño de los glaciares de escombros fue evaluada realizando tests estadísticos no paramétricos, encontrándose una relación estadísticamente significativa entre el tamaño de los glaciares de escombros y la litología para las zonas de Nevados de Cachi y Volcán Domuyo, mientras que fueron no significativas en el caso del Monte San Lorenzo. Podría decirse entonces que, dadas condiciones topoclimáticas favorables para la formación de glaciares de escombros, la litología puede constituir un factor condicionante adicional para su desarrollo. En particular, se encontró que las rocas esencialmente granitoides forman capas activas blocosas, lo cual favorece la formación y preservación de estas geoformas. La ausencia de registros instrumentales de temperatura y precipitación completos y de larga duración representó un problema común para los tres sitios estudiados. Esta es, salvo escasas excepciones, una condición frecuente a lo largo de los Andes Argentinos y constituye un factor profundamente limitante para el entendimiento de las interacciones del clima y los componentes de la criósfera en la Cordillera de los Andes. Se entiende entonces, que a tal fin es imperiosa la necesidad de contar con una verdadera red de estaciones meteorológicas modernas, ubicadas altitudinal y geográficamente próximas a la localización de los glaciares y geoformas periglaciales.

Existen evidencias de que en la infección oral temprana la principal vía de transmisión de Streptococcus mutans es a través del contacto salival madre-niño y que la adquisición inicial tiene lugar durante un periodo especifico de tiempo denominado ''Ventana de Infectividad"; que transcurre entre los 6 y 30 meses de vida del niño, existiendo mayor riesgo entre los 18 y 30 meses de edad. En cuanto a la fuente y forma de transmisión se señala que el numero de Streptococcus mutans en saliva materna puede ser un factor de riesgo para la salud del niño. En esta investigación se evaluó la situación de los factores de riesgo criogénico en mujeres embarazadas durante el ultimo trimestre de gestación y su relación con la transmisión y homologa de las cepas de Streptococcus mutans en los binomios madre-niño, en pacientes que asisten al Hospital Universitario de Maternidad y Neonatología. Se analizo la situación de los factores de riesgo cariogenico en 53 embarazadas entre los 20 - 30 años de edad sin antecedentes de enfermedad sistémica. Las madres dieron su consentimiento informado por escrito para la participación del binomio madre-niño en esta investigación. En el transcurso del tiempo de estudio, la muestra inicial sufrió un desgranamiento; por razones personales, cambio de domicilio, fallecimiento, etc.; completando el estudio 24 binomios madre-niño. En las mujeres embarazadas durante el último trimestre de gestación se realizo una entrevista por cuestionario para relevar información respecto a la frecuencia y momentos de cepillado y de consumo de bebidas azucaradas. Se realizo además, el examen clínico en el consultorio del Servicio de Odontología, siguiendo el procedimiento de rutina tacto visual, registrándose la cantidad de piezas dentarias, superficies sanas, cariadas, con extracción indicada 0 perdida y obturadas en dentición permanente. A partir de estos datos se calcularon los índices de CPOD y CPOS. Se confeccionaron los índices de Higiene Oral (IHO) y de Salud Gingival (ISG) en base a los criterios de Loe y Silness. En muestras de saliva estimulada se determino Vol/min, capacidad amortiguadora, recuento de UFC de Streptococcus mutans (SM) y de Lactobacillus spp (LB), a los fines de determinar el riego criogénico. . Una vez producido el nacimiento del niño, se procedió a tomar muestras de saliva total y de placa dental de la madre y el niño a los 6 y 18 meses, las que fueron sembradas en el medio selectivo Agar Mitis Salivarius Bacitracin (0,28 mg/ml) durante 48 horas a 37°C y 5 porciento C02 para el crecimiento de Streptococcus del grupo mutans, las colonias se identificaron morfológica y bioquímicamente. A los fines de evaluar el grado de homología de Streptococcus mutans en los binomios madre-niño, se utilizó la técnica de reacción en cadena de la polimerasa con primers arbitrarios (AP-PCR). Las colonias bacterianas se recuperaron en 5 ml de caldo cerebro corazón e incubaron a 37°C durante 48 hs. La extracción de ADN se llevó a cabo según el método de Bollet. La AP-PCR se realizó con los primeros OPA 05 Y OPA 02, en termociclador Biometra uno II Thermoblock, con 50 ciclos. Los productos de AP-PCR se observaron por electroforesis en gel de agarosa 1 porciento (0,5ug/ml de bromuro de etidio) EI grado de similitud entre las muestras se analizó visualmente banda por banda, asignándose a cada banda amplificada 1 (presente) ó 0 (ausente). Los valores medios de los indicadores de salud en las embarazadas, resultaron para CPOD 16±5, CPOS 22±11, TD 28±3, IHO 1,10±0,58 e ISG 1,03±0,61. EI 54,7 porciento de la muestra presenta >=105 UFC/mL SM, el 52,8 porciento >=105 UFC/mL LB, el 18,9 porciento capacidad amortiguadora media-baja y el 13,2 porciento volumen de saliva <1mUmin. Se observó una correlación significativa entre ISG - IHO (R=0,90; p<0,0001), Y entre la prevalencia de niveles de UFC/mL >=105 de SM con categorías de CPOS (Eta=0,32; p<0,05). Además, se observó una correlación significativa entre la cantidad de superficies dentarias cariadas y la frecuencia de ingesta de bebidas azucaradas (r=0,63; p<0,05) y los momentos de cepillado (r=0,64; p<0,05) A los 6 meses del nacimiento del niño: el 58,33 porciento de las muestras de saliva de la madre resultaron positivas, mientras que en el 100 porciento de las muestras de saliva del infante no se detectó la presencia del microorganismo. A los 18 meses del nacimiento del niño: el 79,16 porciento de las muestras de saliva y el 100 porciento de las muestras de placa dental de las madres fueron positivas, en tanto que las muestras de saliva y placa dental del infante resultaron positivas para Streptococcus mutans en un 20,83 porciento y 70,83 porciento respectivamente. La técnica de AP-PCR utilizando los primeros OPA-02 y OPA-05 puso en evidencia elevado polimorfismo genético en las cepas de Streptococcus mutans aisladas. Del análisis de homología de Streptococcus mutans en los binomios, el 64,7 porciento de las cepas de las madres presentaron similitud genética con la de sus niños La colonización inicial por Streptococcus del grupo mutans en los binomios estudiados, se observó en el 20,83 porciento de los infantes a los 18 meses edad. La adquisición de Streptococcus mutans ocurrió en mayor proporción en hijos de madres de bajo riesgo de UFC de SM, lo que sugiere la posibilidad de la incidencia de otros factores que favorecen la colonización temprana. Si bien reconocemos a la madre como la fuente mas importante de infección para el niño, consideramos que también se deben tener en cuenta otros factores biológicos y socio-culturales en la transmisión y adquisición inicial de Streptococcus mutans en la edad temprana

En este trabajo se realizó la investigación de aciertos y dificultades de la entrevista inicial en el Psicodiagnóstico Clínico tomando una muestra de 15 casos de alumnos que realizaron esta experiencia. Se presentó la distribución de frecuencia de ocurrencia de las mismas, para cada ítem de la evaluación propuesta. En el desarrollo se planteó el marco teórico a partir del cual se exploró la muestra, y se identificaron cuáles fueron los ítems que presentaron mayores fortalezas y cuáles mayores dificultades. Dentro de los que obtuvieron mayores fortalezas encontramos: El logro de un adecuado desarrollo de la entrevista, un apropiado tiempo de realización, una adecuada alianza de trabajo, la observación de características del lenguaje verbal y no verbal, el señalamiento de algunos vectores cuando el entrevistado no sabe cómo empezar o continuar. Entre los de mayor dificultad encontramos: Inconvenientes en la apertura y cierre de la entrevista, imposibilidad para efectuar el encuadre de manera idónea, limitaciones en el logro de la disociación instrumental, obstáculos para rastrear la relación entre lenguaje no verbal y verbal e inadecuado cierre de la entrevista. Se establecieron algunas comparaciones entre los resultados de las evaluaciones y la encuesta de registro de datos, destacando la importancia de la terapia psicoanalítica durante la formación.