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Tesis de Doctorado

Llegó @Desenchufalo, “Desconectá de una vez”. La plataforma que te propone cortar con la rutina y descubrir cómo sacarle el jugo a tu tiempo libre. Desenchufalo es un espacio que te acerca actividades para despejar tu mente, conectar con lo que te gusta y encontrar tu cable a tierra. Hoy en Argentina no existe una plataforma que centralice la demanda de este tipo de actividades, por lo que todo el tráfico de búsquedas de este tipo de actividades se canalizará a través de nuestra web, potenciándola y posicionándola como el único sitio para este nicho de mercado. Nuestra plataforma acerca a los instructores/profesores que quieren ofrecer sus clases o talleres con aquellas personas que buscan realizar distintas actividades recreativas. Está orientado a personas que buscan talleres, cursos y workshop recreativos, para desconectar o relajar su mente. Ofrecemos cursos cortos de actividades de interés general como, por ejemplo: pintura, botánica, tejido, cerámica, carpintería, reiki, etc. Nuestra propuesta de valor e conjuga en la diversidad y amplitud de la oferta y, al mismo tiempo, la focalización en la experiencia del cliente y la personalización de la oferta. El flujo de ingresos estará compuesto por las comisiones que se cobrarán sobre de los ingresos por ventas de cursos, talleres o actividades recreativas en nuestro market-place. Mientras que los principales costos están asociados a el desarrollo de la plataforma y acciones de marketing digital. El equipo emprendedor de Desenchufalo, que lleva a cabo el proyecto, está formado por 2 socios, profesionales con conocimiento y experiencia en el desarrollo de productos digitales, así como conocimientos sobre medios de pago electrónico y financiación. Desenchufalo se encuentra en la etapa inicial de ideación y diseño de la plataforma, requiere de una inversión de capital inicial de tan sólo unos USD 18.000. La TIR del proyecto asciende a 126% y el VAN a USD 750M. En cuatro años se espera llegar a aproximadamente 780.000 usuarios anuales con una plataforma posicionada en el Top of mind con 2,3MM de visitas al año.

Este proyecto de intervención propone el diseño de una serie documental transmedia, en tanto producción de conocimiento pedagógico para la formación docente en el ámbito de la gestión de la Dirección de Capacitación y Docencia, específicamente en la Especialización en Docencia Universitaria de la Secretaría de Asuntos Académicos de la Universidad Nacional de La Plata. Como estrategia de producción explora un área de conocimiento que se encuentra en constante desarrollo: las narrativas tansmedia. Las reflexiones, experiencias y perspectivas en torno de las problemáticas que se plantean se consideran centrales para pensar la configuración actual de los procesos de formación en la universidad. El interés parte de una preocupación por promover nuevos modos de encuentro a través de una producción transmedia, de saberes y experiencias docentes, de recorridos y búsquedas, de dimensiones y procesos, al tiempo de un reconocimiento de la importancia que la Universidad tiene, en el marco de una comunidad, como actor social, político y cultural, en tanto agente de transformación acortando distancias y desigualdades.

Considerando que a pesar de la semejanza en la estructura química de ΔHOP con respecto a los glucocorticoides. este esteroide produjo una inhibición de la síntesis de ARN en timocitos de rata "in vitro" mediante un mecanismo de acción no genómico distinto al de los glucocorticoides, se resolvió probar sus efectos biológicos "in vivo". En el tratamiento agudo ¿ΔHOP produjo su máximo efecto en la inhibición de incorporación de uridina por los timocitos 18 horas después de la inyección, desapareciendo a las 24 horas; mientras que en el tratamiento crónico el máximo efecto se produjo a las 5 horas manteniéndose invariable durante las restantes 30 horas, no observándose variaciones en los valores de corticosterona plasmática en ninguno de los dos casos. Por otro lado, la dexametasona tanto en forma aguda como crónica produjo la máxima inhibición a las 5 horas de la última inyección, desapareciendo completamente el efecto a las 24 horas manteniendo los niveles de corticosterona plasmática por debajo de los valores normales. Tratamientos agudos y crónicos con ΔHOP indicaron que este esteroide tuvo acción antiinflamatoria con una potencia similar a la dexametasona, tanto por vía inyectable, oral y tópica. Además en estos experimentos se observó que ΔHOP no producía leucopenia, en comparación con dexametasona que disminuyó notablemente el número de linfocitos, monocitosy eosinófilos circulantes. Los cultivos realizados con células mononucleares de sangre humana periférica estimuladas con phitohemoaglutinina, demostraron la capacidad inmunosupresora de ΔHOP a altas concentraciones (10 -4M). Este esteroide inhibió la estimulación linfocitaria mediante un mecanismo no genómico, semejante al observado "in vitro" en timocitos de rata y también inhibió la producción de Il-l por los macrófagos, lo que explica su potente acción inmunosupresora y antiinflamatoria. Se estudió también su posible acción tóxica en animales tratados en forma aguda y crónica y se determinó que en relación al efecto tóxico de los glucocorticoides, no hubo cambios en los pesos de órganos sensibles a estos esteroides tales como timo y bazo; no afectó al eje hipotálamo-hipofisiario, por no alterar los niveles de ACTH plasmático ni el peso de las glándulas suprarrenales. Además el efecto sodio-retentor fue significativamente menor al producido por otros glucocorticoides y produjo un aumento de glucógeno hepático similar al producido por dexametasona. Todo ello demuestra que este nuevo esteroide tendría los efectos tóxicos muy atenuados con respecto a los glucocorticoides. Finalmente para comprobar si el efecto de ΔHOP a altas concentraciones se producía por un mecanismo no genómico a través de la membrana plasmática, se realizaron en timocitos de rata pruebas de polarización de fluorescencia, para observar si el esteroide producía cambios en las cadenas hidrocarbonadas de los fosfolípídos y "capping" de las proteínas de superficie de la membrana. En el primer caso, el esteroide no modificó el entorno lipidico de la membrana y en el segundo, impidió la movilidad de las proteínas de membrana tanto "in vivo" como "in vitro", en este último el efecto desapareció al ser lavadas las células. Además se observó una afinidad semejante a la corticosterona con respecto al receptor de glucocorticoides a concentraciones entre 5 x lO -8M a 5 x lO -6M, lo que sugeriría que a bajas concentraciones este esteroide actuaría mediante un mecanismo mediado por receptor, y a altas concentraciones (10 -4M) lo haría a través de la membrana. En conclusión de acuerdo a los resultados obtenidos se puede afirmar que ΔH0P a altas concentraciones actuaría a través de la membrana plasmática produciendo un efecto inmunosupresor semejante a los glucocorticoides pero con menos acción tóxica.

Rhizopus oryzae es el principal agente causal de la mucormicosis. Actualmente, no existe un tratamiento totalmente efectivo para estas micosis, debido a que estos hongos son resistentes a la mayoría de los antifúngicos y a la toxicidad del principal tratamiento disponible, anfotericina B (AMB). Como un intento de resolver esta problemática, nos planteamos en este trabajo estudiar los mecanismos moleculares de resistencia de R. oryzae al voriconazol y evaluar nuevas opciones terapéuticas. Se demostró que la secuencia codificante del gen RoCYP51A es la única responsable de los patrones de sensibilidad a azoles de R. oryzae. Se comprobó que la sustitución natural F129Y en la Cyp51Ap tiene implicancia en la resistencia a voriconazol y en la sensibilidad reducida a posaconazol. En cuanto a la búsqueda de alternativas terapéuticas, se evaluó la actividad in vitro de ocho drogas, solas y en combinación con voriconazol, frente a 25 cepas de Mucorales. AMB y posaconazol fueron las drogas más activas cuando se evaluaron solas. Para algunos aislamientos se observó al microscopio alteraciones en el desarrollo de la hifa (AH) cuando se enfrentaron a las combinaciones de drogas. Utilizando un modelo de mucormicosis en Galleria mellonella, se observó una mejor supervivencia en los tratamientos combinados de VRC con AMB y con caspofungina, en comparación con AMB sola para R. microsporus. Esa mayor supervivencia se obtuvo utilizando una dosis de AMB 32 veces menor cuando se combinó con voriconazol que cuando se usó sola. Estas dosis antifúngicas emulan las concentraciones antifúngicas donde se observaron las AH.

El propósito de este plan de investigación surge como parte de un proyecto más general dedicado a la síntesis, el estudio estructural y espectroscópico de cromonas y flavonas. El presente trabajo de Tesis Doctoral tiene como objetivo general la preparación y el análisis de compuestos con potencial actividad biológica. Se eligió un derivado fluorado que contiene el esqueleto de cromona (benzopiran-4-ona)1 como estructura de partida y, a partir del mismo, se generaron nuevos compuestos con diferente funcionalidad mediante reacciones: a) de sustitución electrofílica aromática; b) de sustitución nucleofílica con aminas alifáticas y aromática y c) de adición a iso(tio)cianatos sencillos. Para cada uno de los compuestos obtenidos se estudiaron, además, sus propiedades fisicoquímicas empleando métodos espectroscópicos (IR, Raman, UV-visible y RMN) y utilizando el complemento de la espectrometría de masas. La técnica de difracción de rayos X en monocristales fue la base para elucidar la geometría molecular en fase sólida y sus interacciones. Por otro lado, se usó la química computacional para determinar las principales conformaciones que pueden estar presentes en fase gaseosa y, a partir de las mismas, calcular los espectros que ayudaron a interpretar los experimentales. Los estudios mencionados tuvieron el propósito de entender mejor el comportamiento estructural de los compuestos analizados, para poder usarlos posteriormente en la construcción de moléculas de mayor tamaño molecular.

Hacia el año 2009 varios países de América del Sur se dispusieron a conmemorar los doscientos años del inicio de los procesos de independencia del régimen colonial español. Impulsados por la excepcionalidad de esta efeméride, los Estados destinaron significativos recursos económicos y humanos para poner en marcha un vasto repertorio de actividades festivas y conmemorativas. A su vez, aquella misma razón -al calor de las disputas políticas del momento- fue la que inspiró en el campo intelectual y académico intensos debates y controversias sobre el pasado, el presente y el futuro de las naciones y la región en su conjunto. La presente investigación procura volver sobre algunos de estos acontecimientos con el fin de precisar cuáles fueron los usos que hicieron del pasado, de qué manera reconstruyeron la memoria histórica y cómo restauraron, a partir de esas operaciones, ciertas identidades colectivas los gobiernos de Argentina, Bolivia, Ecuador y Venezuela durante sus celebraciones de los bicentenarios de "independencia". Para ello, se examinan las prácticas y los discursos conmemorativos oficiales con la certeza de que los mismos constituyen un novedoso punto de entrada para indagar en los mecanismos simbólicos a partir de los cuales estos gobiernos -enmarcados en el llamado "giro a la izquierda"- intentaron reconstruir las identidades y los imaginarios sobre la nación, a la vez que para ahondar en los sentidos políticos y estratégicos que rodearon a las celebraciones en cuestión. Más que aspirar a develar la "naturaleza" de aquellos fenómenos políticos o, siquiera, la carga de verdad de dichos acontecimientos, se buscará analizar qué visión del mundo revelaron esos anhelos y, en última instancia, contribuir a la comprensión de las mencionadas experiencias gubernamentales a partir de esos momentos particulares dentro de sus trayectorias.

La promoción del reconocimiento de las relaciones objetivas, de la instrumentalidad transformadora, del pensamiento crítico y de la creación e invención de soluciones materiales para la vida misma. Sí. Interrogar sistemáticamente a la actualidad y cumplir la condición de tener como objetivo el servir a la diseminación de los resultados de los recorridos. Sí. Emitir con todos los medios al alcance, a través de la teoría comprobada, y de una circulación interdisciplinaria y audaz, las novedades que nuestras prácticas provean. Sí... Pero también, reconocer a esos otros que nos hablan desde siempre y cuya palabra no parece estar incluida sino de manera instrumental en nuestras prácticas. Reconocer a esos otros, que muchas veces somos nosotros mismos, como objetos y sujetos de identidad plena. Comunicable. Amable. Con el sentido de la única posibilidad de transformación de aquellas disyuntivas perversas: la realización de una nueva oportunidad para construir caminos entre nuestros nudos, hasta tejer una red que nos haga desechar las opciones de hierro que sólo nos hacen desear nuestro avión (estemos en él, conduciéndolo, o en la torre a destruir).

El objetivo fundamental de este trabajo de Tesis fue el desarrollo de rutas sintéticas para la obtención de tioazúcares cuyo azufre se encuentra incorporado en un anillo de cinco miembros. Estas moléculas podrían resultar biológicamente activas, o podrían emplearse como precursores para la síntesis de productos naturales, o de análogos azufrados de los mismos. El reemplazo del oxigeno del ciclo por azufre induce interesantes cambios en las propiedades y reactividad química. Desde el punto de vista bioquímico, se ha descripto que los tioazúcares actúan como antimetabolitos, inhibidores enzimáticos o inductores de enzimas hidrolíticas de ()-glicósidos. Los estudios de síntesis, reactividad y actividad biológica se han realizado principalmente sobre 5-tiopiranosas, mientras que la química y bioquímica de las 4-tiofuranosas y sus derivados es menos conocida. Por ello, se plantearon como objetivos: primeramente la síntesis de la 4-tio-L-ramnosa, y luego la síntesis de aldopentono-l,4-tiolactonas. Cabe destacar que en la literatura no se encontraba descripto ningún procedimiento sintético para obtener estas moléculas. Dado que la L-ramnosa se encuentra frecuentemente formando parte del lipopolisacárido de bacterias Gram negativas, su análogo azufrado, la 4-tio-L-ramnosa (190), podría resultar un potencial inhibidor de sistemas enzimáticos de dichas bacterias. Esta síntesis resultaba de interés pues complementaría los estudios realizados en nuestro laboratorio sobre la reactividad de 4-sulfonatos derivados de monosacáridos de distinta configuración, y con diferentes grupos protectores en posición 2 y 3, frente a la reacción de sustitución con nucleófilos precursores del grupo tiol. La estrategia sintética empleada para la síntesis de 190, a partir de L-ramnosa, consistió en la obtención del metil α-L-ramnopiranósido, cuyos HO-2 y HO-3 se protegieron por acetonación. Con el objeto de invertir la configuración de C-4 se oxidó el hidroxilo libre (HO-4) del metil 2,3-O-isopropilidén-α-L-ramnopiranósído (164) y el carbonilo generado se redujo estereoselectivamente con NaBH4, para obtener el metil 6-desoxi-2,3-O-isopropilidén-α-L-talopiranósido (167). Se prepararon diferentes 4-O-sulfonil derivados de 167 [(mesilato (168), nosilato (169) y triflato (171)] para analizar la reactividad en la posterior etapa de sustitución. Los intentos de sustitución del grupo sulfonato de 168, 169 y 171 por KSCN resultaron infructuosos. Se consideró que el anillo dioxolano fusionado con el ciclo piranósico introducía mayor rigidez en el sistema que si HO-2 y HO-3 se derivatizaban, por ejemplo, como acetato. Una molécula más flexible podría adoptar una conformación adecuada para la sustitución nucleófilica sobre C-4. Se prepararon pues el metil 2,3-di-O-acetil-6-desoxi-4-O-[p-nitrobencén)sulfonil]α- L-talopiranósido (175) y el metil 2,3-di-O-acetil-6-desoxi-4-O-trifluorometansulfonil- α-L-talopiranósido (176). El triflato 176 experimentó la sustitución por KSCN, conduciendo al tiociano derivado de configuración mano (177) con rendimiento moderado (53%). La resistencia de los diversos derivados sulfonilados de la serie talo a la reacción de sustitución del C-4 se justificó considerando un efecto repulsívo β-cis-axial, que operaría en el estado de transición entre el grupo saliente (sulfonato) y el sustituyente axial de C-2. Por reducción del 4-tiocianato de configuración L-mano (177) se obtuvo el tiol piranósico 183, el cual por acetólisis produjo el tetraacetato piranósico 185 como único producto. La desacetilación de 185 condujo a la 4-tio-L-ramnosa (190), en su configuración furanósica, inusual para una hexosa. Por acetilación de 190 se obtuvo la mezcla anomérica de los tetraacetatos furanósicos 191 y 192. En base a las constantes de acoplamiento (J) entre los protones del anillo furanósico se realizó su análisis conformacional, mediante el procedimiento previamente desarrollado en este laboratorio, el cual indicó que ambos anómeros (191 y 192) se encuentran poblando la región 2T3 del itinerario pseudorotacional. Por otra parte, nuestro interés en la sintesis de tiolactonas surgió de la diversidad de aplicaciones en síntesis asimétrica de los anillos lactónicos de 5 miembros, en particular de la D-ribono-l,4-lactona, utilizada como precursora de numerosos productos naturales. Se ha descripto el uso de ésta para la construcción de estructuras cíclicas y acíclicas, de ciclopentenonas quirales empleadas en la preparación de nucleósidos carbocíclicos y de sistemas oxabicíclicos relacionados estructuralmente con las prostaciclinas. La 4-tio-D-ribono-1,4-lactona (193) constituiría un compuesto de partida conveniente para la síntesis de productos naturales, o sus análogos azufrados. El análisis retrosintético de la 4-tio-D-ribono-l,4-lactona (193) sugería un precursor con la configuración de C-4 invertida, por lo cual la L-lixono-l,4-lactona resultaba un compuesto de partida conveniente. Puesto que ésta no es comercial, se partió de la L-gulono-l,4-lactona (196), la cual presenta la misma relación estereoquímica en todos los carbonos del anillo pero con un átomo de carbono más en la cadena lateral. Por di-O-isopropilidenación de 196 e hidrólisis regioselectiva se obtuvo la 2,3-O-isopropilidén-L-gulono-l,4-lactona (198), la cual se oxidó con IO4- para degradar la cadena lateral, con formación de un aldehído en C-5. Por reducción quimioselectiva con NaBH3CN a pH 4 se obtuvo la 2,3-O-isopropilidén-L-lixono1,4- lactona (203), cuyo HO-5 se derivatizó como tosilato. La 2,3-O-isopropilidén-5- O-(p-toluensulfonil)-L-lixono-1,4-lactona (204) reaccionó con NaMeO, el cual indujo la apertura del anillo lactónico por ataque al carbonilo para dar el éster metílico. Simultáneamente el HO-4 desplazó al tosilato de C-5, originando el 4,5-epóxido 205. Este compuesto se convirtió, por reacción con tiourea, en el 4,5-epitioderivado 206, con inversión de la configuración del C-4 (serie D-ribo). El paso siguiente consistió en la apertura regioselectiva del anillo tiirano por acción de un nucleófilo sobre el C-5 de manera que el grupo S- generado promoviera la tiolactonización. Así, por reacción con KOAc-HOAc en DMF se obtuvo la 5-O- acetil-2,3-()-isopropilidén-4-tio-D-ribono-l,4-lactona (207), y por hidrólisis ácida de los grupos protectores, la 4-tío-D-ribono-l,4-lactona (193), con un rendimiento total del 20% a partir de 196 (37% a partir de 200). Con el propósito de verificar si la metodología empleada anteriormente podía extenderse a la síntesis de otras tiolactonas, se procedió a sintetizar la 4-tio-L-lixono- l,4-lactona (209) a partir de D-ribono-l,4—lactona (60). La tiolactona de configuración lixo resultaba además de interés porque difiere de su diastereoisómera 193 en la configuración de C-4, y es este carbono el que actúa como centro estereogénico en numerosas síntesis asirnétricas que emplean aldonolactonas como precursores quirales. Por tratamiento de la 2,3-()-isopropilidén-5-O-(p-toluensulfonil)—D-ribono1,4- lactona (82) con NaMeO se obtuvo el derivado oxirano 212. El epóxido de 212 se convirtió en el tiirano 213 por reacción con tiourea. En este proceso se produjo inversión de C-4, y en el paso siguiente el metil 4,5-didesoxi-4,5-epitio-2,3-O- isopropilidén-L-lixonato de metilo (213) experimentó apertura del anillo tiirano y tiolactonización por calentamiento con KOAc-DMF, para dar la 5-0-acetil-2,3-O- isopropilidén-4-tio-L-lixono-1,4-lactona (214). Por remoción de los grupos protectores se obtuvo la 4-tio-L-lixono-1,4-lactona (209), con un rendimiento del 32% a partir de 60. Los derivados 2,3-insaturados de aldonolactonas, denominados comúnmente butenólidos (2-butén-4-ólidos) son compuestos versátiles de amplio uso en síntesis. Por ello, se planteó como última meta de este trabajo la obtención de 2-butén-4- tiólidos a partir de las tioaldonolactonas preparadas previamente. En primera instancia se procedió a proteger selectivamente el hidroxilo primario de las tiolactonas 193 y 209, empleándose al ter-butildifenilsilano como grupo protector. Se aplicaron luego las siguientes reacciones a los derivados 5-0- sililados 220 y 225, con la finalidad de convertir en un doble enlace al sistema diol de C-2, C-3: i) tratamiento con N,N-dimetilfonnamida dimetil acetal, seguido de la eliminación del anillo 2-dimetilamino-l,3-dioxolano de 221 y 228 por pirólisis con Ac2O, o por formación de la sal de amonio cuatemaria (por tratamiento con Mel) y posterior pirólisis. ii) preparación de los tionocarbonatos 222 y 226, y eliminación reductiva con Ni-Raney; iii) síntesis de los derivados 2,3-di-O-acetilado (233) y 2,3-di-O-benzoilado (234) para realizar una eliminación con Sml2. Mediante los procedimientos ii) y iii) se obtuvieron los derivados tiobutenólidos 223 y 227 con rendimientos aceptables. El poder rotatorio de estos productos resultó, como era de esperar, de signo contrario y de aproximadamente el mismo valor. Sin embargo, el valor absoluto del poder rotatorio registrado resultaba llamativamente bajo si se comparaba con el de butenólidos análogos oxigenados, sugiriendo racemización durante la eliminación. Se intentó determinar la pureza óptica de 223 y 227 mediante métodos fisicos (ccd con selector quiral y desplazamiento de las señales de RMN-'H por complejos de lantánidos con ligandos quirales), pero los resultados no fueron concluyentes. Se recurrió entonces a una transformación química, procediéndose a hidrogenar (Pd/C) los tiobutenólidos 223 y 227, pero también en este caso el valor absoluto del poder rotatorio de las 2,3- didesoxi-l,4-tiolactonas obtenidas (224 y 235) era pequeño. Cuando se realizó el tratamiento del 2,3-di-0-benzoíl derivado 234 con SmI2 en presencia de una fuente de hidrógeno (Bu'OH) se obtuvo la (4R)-didesoxitiolactona 235', que presentaba las mismas propiedades espectroscópicas que las didesoxitiolactonas 234 y 235 obtenidas por otros métodos, pero su poder rotatorio era mayor (- 49,6°). Estos resultados indicaron que los métodos aquí empleados para la síntesis de tiobutenólidos conducen a productos parcialmente racémicos. La racemización se justificaría si se considera la estabilización adicional del radical resultante de la abstracción de H-4, por efecto del átomo de S del anillo. Afortunadamente la 2,3-didesoxitiolactona 235' se encontraría en alto grado de pureza enantiomérica y constituiría un precursor adecuado para ulteriores transformaciones sintéticas, incluyendo la preparación de tiobutenólidos quirales a partir de ella.

Calvo, Pablo