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Los telómeros son complejos nucleoproteicos localizados en los extremos de los cromosomas eucarióticos. Están involucrados en la preservación de la integridad de los mismos, protegiéndolos de la degradación por nucleasas y de la recombinación y fusión con otros cromosomas. Por lo tanto, el mantenimiento de la función telomérica resulta fundamental para la estabilidad genómica y la viabilidad celular. Dado que una cantidad importante de mutágenos químicos son utilizados como agentes antitumorales, el estudio del daño inducido a nivel genético por estos compuestos reviste gran interés. El objetivo general de este trabajo de Tesis Doctoral consistió en obtener nuevos conocimientos para lograr una mejor comprensión de los efectos de los mutágenos químicos sobre los telómeros de los cromosomas eucarióticos y estudiar la inestabilidad telomérica en un modelo murino de inducción tumoral. De este modo, se pretende establecer si los mutágenos químicos inducen inestabilidad telomérica retardada o persistente y si el desarrollo tumoral se relaciona o asocia con alteraciones específicas en el patrón de expresión de los genes ligados al mantenimiento telomérico. Para tal fin, en primer término se abordó el estudio de la inestabilidad telomérica (IT). Este comprende el análisis del daño cromosómico a nivel telomérico, los eventuales cambios en la longitud telomérica y en la actividad de la enzima telomerasa en la progenie de las células de rata ADIPO-P2, que fueron expuestas inicialmente a los mutágenos químicos bleomicina (BLM), estreptonigrina (EN) y estreptozotocina (EZ). Si bien se conocen parcialmente los efectos inmediatos o a corto plazo de algunos mutágenos químicos sobre los telómeros, se desconoce qué es lo que ocurre a largo plazo con los telómeros de las células que sobreviven al tratamiento con un mutágeno dado y si los mutágenos químicos inducen inestabilidad telomérica retardada tal como ocurre con las radiaciones ionizantes. El análisis de las aberraciones cromosómicas se llevó a cabo aplicando la técnica de PNA-FISH con sonda telomérica. Asimismo, se estudió la actividad de la enzima telomerasa, utilizando un kit comercial específico y la longitud telomérica se determinó mediante la técnica de Flow-FISH por citometría de flujo. Nuestros resultados demuestran que los mutágenos químicos BLM, EN y EZ pueden inducir inestabilidad telomérica hasta al menos 15 días después del tratamiento con los mismos. Asimismo, se evidenció que los llamados cromosomas incompletos (CI), a pesar de carecer de un extremo cromosómico, pueden ser transmitidos a la progenie de las células que fueron originalmente expuestas a dichos mutágenos. Además, se 5 determinó que las células expuestas a los mutágenos químicos mencionados son cromosómicamente inestables desde la primera división mitótica luego del tratamiento. Por otro lado, se observó que en las células ADIPO-P2 expuestas a los mutágenos, BLM, EN y EZ, la actividad de la enzima telomerasa depende de la presencia de telómeros cortos y no se correlaciona directamente con la inestabilidad telomérica registrada citogenéticamente. De esta manera, los resultados de la presente investigación permitieron obtener un mejor conocimiento de los efectos de los mutágenos químicos antitumorales sobre el genoma a largo plazo y por lo tanto, contribuirán a una mejor comprensión de su modo de acción sobre las células, lo cual resulta de fundamental importancia al momento de evaluar la eficacia y uso terapéutico de dichos compuestos. En segundo término, para determinar si el desarrollo tumoral in vivo se relaciona con alteraciones en el perfil de expresión de genes teloméricos (complejo shelterina), se estudió la actividad transcripcional de los genes responsables del mantenimiento telomérico. Para ello, se empleó la técnica de PCR en tiempo real en un modelo murino de inducción tumoral. Nuestros datos indican una disminución significativa de la actividad transcripcional en 2 de los 6 genes integrantes del complejo telomérico en mamíferos (trf1 y rap1). Esta alteración en la expresión de los mismos, podría considerarse como un posible marcador de inestabilidad genómica en melanoma murino. De este modo, mediante el desarrollo de la presente Tesis Doctoral, se lograron aportes significativos en relación a la inestabilidad telomérica existente a largo plazo a nivel telomérico, en células de mamífero (rata) expuestas in vitro a antibióticos antitumorales y la inestabilidad telomérica presente en un modelo in vivo de inducción tumoral (melanoma murino).

La alergia a la leche de vaca es la causa más común de alergia alimentaria en lactantes y niños, probablemente porque la LV constituye uno de los primeros antígenos alimentarios a los que resultan expuestos los niños en la primera infancia. Si bien generalmente esta situación patológica resulta transitoria, ya que la mayoría de los niños afectados desarrollan tolerancia con el tiempo, los pacientes son sometidos a tratamientos con dietas libres de LV y sus derivados. En pacientes con edades menores a los dos años se emplean sustitutos lácteos, siendo los más empleados los hidrolizados extensivos de proteínas de leche. También suelen incluirse fórmulas alternativas como las formuladas a base de proteínas de soja o sus derivados. Sin embargo, se ha reportado que un cierto porcentaje de pacientes con alergia a leche de vaca muestran una intolerancia clínica a las mismas. Descartando la existencia de proteínas de leche como contaminantes o adulterantes, y considerando que los niños afectados probablemente no han estado en contacto con antígenos de soja, dado que no es un alimento común en la dieta de un lactante, la intolerancia clínica podría explicarse por la presencia de epitopes de reactividad cruzada entre proteínas de leche bovina y de soja. Sobre la base de estas observaciones, en el presente trabajo de tesis se planteó dilucidar las bases moleculares de este fenómeno y desarrollar herramientas y conocimientos que permitan en un futuro desarrollar terapias alternativas. Los objetivos generales planteados fueron los siguientes: o Caracterizar la inmunorreactividad in vitro e in vivo de proteínas de soja empleando distintas herramientas inmunológicas. o Identificar la presencia de epitopes inmunorreactivos presentes en proteínas de soja que compartan homologia secuencial o estructural con caseínas bovinas. o Validar un modelo murino de alergia alimentaria a proteínas de leche bovina para ser empleado como herramienta biológica para el estudio de la reactividad cruzada entre soja y proteínas de leche de vaca, para analizar la alergenicidad de nuevas fórmulas hipoalergénicas y para el desarrollo de nuevas vacunas mucosales a ser empleadas en el tratamiento de la alergia alimentaria.

El brócoli es una hortaliza ampliamente consumida y cuya producción se halla en continuo crecimiento a nivel mundial. Se trata de un vegetal que tiene un buen aporte nutricional debido a su contenido de proteínas y vitaminas, además de tener un bajo valor calórico y alto aporte de fibra. El brócoli contiene compuestos de elevado valor nutracéutico, como son los flavonoides y los glucosinolatos, los cuales presentan numerosos beneficios a la salud humana, como propiedades antioxidantes, antiinflamatorias, antimicrobianas y anticancerígenas. La parte comestible de la planta de brócoli es su inflorescencia, se trata de un órgano que, al momento de la cosecha, se encuentra en pleno desarrollo y, por lo tanto, la demanda de agua, hormonas y nutrientes, es alta. Es debido a esto último que la cosecha le ocasiona un importante estrés y una senescencia acelerada. Este proceso de senescencia provoca el amarillamiento del órgano junto con la pérdida de proteínas, azúcares, compuestos antioxidantes, como el ácido ascórbico, y glucosinolatos. Nuestro grupo de trabajo ha estudiado a lo largo de varios años diversos tratamientos poscosecha, buscando prolongar la vida del brócoli. Los tratamientos analizados fueron: radiación UV-C, tratamientos térmicos, atmósferas modificadas y luz visible. Y también se realizaron estudios fisiológicos con hormonas vegetales vinculadas al proceso de senescencia, como citoquininas y etileno. Estos estudios brindaron herramientas para la manipulación poscosecha de brócoli. También se ha comprobado que estos tratamientos producen cambios a nivel de expresión génica en brócoli, tanto en la vía de degradación de clorofilas como en la vía de biosíntesis de compuestos flavonoides. El objetivo del presente trabajo fue analizar la expresión de los genes BoNYC1, BoNOL y BoHCAR, codificantes de las primeras enzimas de la vía de degradación de clorofilas; y analizar la expresión de los genes BoCHS y BoCHI, que codifican para las primeras enzimas en actuar en la formación del esqueleto primario de los flavonoides, en los distintos tratamientos analizados en brócoli. Los resultados del presente trabajo señalan que BoNYC1 sería un gen altamente regulado, a diferencia de BoNOL y BoHCAR de menor respuesta frente a los distintos estímulos. Se observó que en muchos de los tratamientos la expresión de estos genes se reprimió, correlacionando con una retención en el contenido de clorofilas ocasionada por los tratamientos poscosecha. Mientras que, en otros ensayos, se observó que estos genes presentaron comportamientos diversos, señalando participación en otras vías metabólicas u otra forma de regulación. Por otro lado, la expresión de BoCHS y BoCHI fue bastante afectada por los tratamientos, indicando que es una vía de rápida respuesta frente a los agentes externos como la luz solar y la temperatura. Se observó un comportamiento compatible con un ciclo circadiano en ambos genes. Los ensayos de luz visible y radiación UV-C verificaron, además, un incremento en el contenido de flavonoides.

El estudio de los factores de cambio ambiental introducidos por las actividades humanas es importante para comprender las dinámicas de los ecosistemas. En esta tesis estudiamos dos factores de cambio de origen antropogénico: el mejillón dorado Limnoperna fortunei y el herbicida glifosato, enfocándonos en los efectos que tiene el mejillón sobre la concentración de glifosato en los ecosistemas de agua dulce y el comportamiento que tienen los grupos bacterianos asociados al biofilm de las valvas del mejillón ante la presencia de este herbicida. Para analizar el efecto del glifosato, del molusco y su interacción sobre la abundancia y composición bacteriana del biofilm asociado a las valvas del mejillón dorado, se llevaron a cabo bioensayos semi estáticos bajo condiciones controladas de laboratorio y se midieron los cambios en la concentración de nutrientes y glifosato en presencia y ausencia del mejillón. Los grupos bacterianos presentes en el biofilm de las valvas de los moluscos y sus modificaciones ante la presencia del glifosato, se analizaron mediante la técnica de biología molecular CARD FISH (Catalyzed Reporter Deposition- Fluorescence in situ Hybridization). La significativa reducción de la concentración del glifosato en presencia de Limnoperna fortunei y de sus valvas, conjuntamente con el aumento significativo en la concentración de ácido aminometilfosfónico (AMPA), principal metabolito en la degradación de glifosato, al igual que el aumento significativo en la concentración de fosfatos, nitratos y amonio, sugieren la intervención de Limnoperna fortunei y de las bacterias presentes en el biofilm de sus valvas en la degradación de este herbicida. Los resultados obtenidos también sugieren que en la reducción del herbicida pueden estar actuando otros mecanismos asociados al metabolismo propio de Limnoperna fortunei o a las bacterias presentes en su cavidad paleal y/o del tracto digestivo del molusco. Se analizaron 5 grupos bacterianos dentro de las Eubacterias, propios de ecosistemas de agua dulce (alfaproteobacterias, betaproteobacterias, gamaproteobacterias, actinobacterias, bacteroidetes) y se encontró un aumento significativo del grupo gamaproteobacterias ante la presencia de glifosato, lo que estaría indicando la participación de este grupo en la degradación de glifosato en el agua. Este estudio constituye un punto de partida para el estudio del componente bacteriano del biofilm presente en las valvas de Limnoperna fortunei y abre la posibilidad de pensar en este invasor como un aliado en la biodegradación del glifosato, sin embargo tanto la presencia de Limnoperna fortunei como la del glifosato y su interacción parecen acelerar los procesos de eutrofización en los ecosistemas de agua dulce.

Entre los roedores Hystricomorpha del Nuevo Mundo, Ctenomys, el único género viviente de la subfamilia Ctenomyinae (Octodontidae), ha sido considerado hasta el momento homogéneo en cuanto a su diversidad morfológica y adaptativa. El género comprende unas 85 especies nominales de hábito subterráneo que ocupan gran variedad de ambientes en América del Sur. En este trabajo se explora la diversidad morfológica de rasgos esqueletarios del miembro anterior y cráneo vinculados con la capacidad excavatoria en Ctenomys, en un contexto comparativo que incluye otros géneros de caviomorfos, especialmente de la superfamilia Octodontoidea. Los objetivos son: evaluar el grado de especialización excavadora en las especies de Ctenomys, comparar la disparidad en los rasgos estudiados, y detectar posibles patrones morfo-funcionales y su grado de relación con factores filogenéticos. Se estudió material esqueletario craneano y del miembro anterior de 20 especies vivientes y 5 especies extintas de Ctenomys, incluyendo a †C. chapalmalensis, la especie más antigua conocida en forma relativamente completa. El material comparativo incluyó cuatro especies de 3 géneros extintos de ctenominos, nueve especies vivientes de octodontinos, cinco especies de otros octodontoideos y el cávido Cavia aperea. Para identificar rasgos derivados vinculados con la mayor capacidad fosorial en el cráneo (dento-excavación) y miembro anterior (braquio-excavación), se realizó un análisis cuali- y cuantitativo; esto último mediante medidas lineales, índices y morfometría geométrica. La variación morfológica encontrada se exploró mediante Análisis de Componentes Principales. La posible influencia del tamaño corporal se analizó mediante análisis de alometrías. El grado de variabilidad morfológica de rasgos craneanos y del miembro anterior se cuantificó mediante el coeficiente de variación. Se utilizaron métodos filogenéticos comparativos para analizar la influencia filogenética sobre los rasgos estudiados. De acuerdo con los resultados obtenidos, el grado de especialización morfológica vinculada a la capacidad fosorial de Ctenomys es moderado. Mientras que a nivel craneano el género presenta varios rasgos distintivos, en el miembro anterior los únicos detectados como exclusivos son la forma del extremo de la espina escapular, la gran amplitud de la gran muesca escapular, el proceso pseudoestiloide de la epífisis distal del radio y el gran escafolunar de forma compleja. El género no difiere de otros octodontoideos en otros caracteres de importancia morfo-funcional del esqueleto del miembro anterior.El grado de expresión de las especializaciones braquio- y dentoexcavadoras varió entre las especies estudiadas. Se definieron cuatro morfotipos: morfotipo flamarioni con cráneo y miembro anterior más generalizados; morfotipo “‘perucho’” con especializaciones esencialmente dentoexcavadoras, morfotipo “mármol’” con especializaciones esencialmente braquioexcavadoras, y morfotipo lewisi con fuertes especializaciones en ambos sentidos. En este último morfotipo estuvieron presentes los siguientes rasgos morfológicos derivados: mayor procumbencia de los incisivos superiores, incisivos inferiores de implantación más profunda, especialización morfológica en la región postglenoidea; escápula muy robusta, con proceso coracoides largo y curvado, espina larga, robusta y curvada con respecto al plano escapular, ausencia de metacromion y proceso teres major bien desarrollado; húmero robusto, con cresta deltoidea distalizada, epicóndilos bien desarrollados, y superficie articular distal alta y ancha; radio y ulna robustos, con diáfisis curvada, articulaciones profundas y bien definidas, y porción distal engrosada; la epífisis distal del radio con un proceso pseudoestiloide adicional; carpo con escafolunar relativamente grande y con superficie articular irregular, en contacto amplio con el unciforme; central muy reducido; metacarpianos II-V robustos y firmemente encajados entre el carpiano distal y los metacarpianos adyacentes. La variabilidad detectada en los rasgos estudiados del miembro anterior es algo mayor que la de los rasgos craneanos, aunque la diferencia no es estadísticamente significativa. Los índices morfofuncionales de cráneo presentaron alta correlación, posiblemente debida a la acentuada integración entre los rasgos analizados. Los patrones morfo-funcionales de especialización excavadora no se distribuyeron al azar en la filogenia del grupo. Se detectaron fuertes especializaciones excavadoras en un clado de especies bolivianas (C. frater, C. conoveri, y C. lewisi), incluidas en el morfotipo lewisi, y escasa especialización morfológica en especies del grupo mendocinus (C. australis, C. azarae, C. flamarioni). La existencia de estos grupos de especies sugiere que la disparidad en estas especializaciones excavadoras se fijó tempranamente en la evolución del género. Además, la existencia de los morfotipos definidos anteriormente señala que las especializaciones morfológicas braquio- y dentoexcavadoras de las especies de Ctenomys no están necesariamente correlacionadas ni son necesariamente excluyentes entre sí. †C. chapalmalensis fue incluida en el morfotipo flamarioni sobre la base de su escasa especialización en el cráneo y miembro anterior, pero la variabilidad morfológica existente en el Plioceno no puede ser evaluada por la escasez de material. Ya en el Pleistoceno, el rango de disparidad morfológica es comparable con el actual. En el contexto de los roedores subterráneos del mundo, las especializaciones braquioexcavadoras de Ctenomys, y al menos parte de las dentoexcavadoras, fueron moderadas. La antigüedad de los taxones puede jugar un papel importante en esta diferencia, ya que la subfamilia Ctenomyinae es relativamente joven con respecto a otros clados de roedores subterráneos.

Tesis para obtener el grado de Máster en Biotecnología, de la Universidad Internacional de Andalucía, en 2010

Tesis para optar al grado de Magister Scientiae en Producción Animal, de la Universidad Nacional de Mar del Plata, en 2012

Una comprensión cabal del agente etiológico, de la presentación clínica y de la epidemiología de la tuberculosis, así como de la manera de aplicar eficazmente las herramientas disponibles actualmente para su control, pueden aumentar la eficiencia de un programa nacional de control de la tuberculosis. La provincia del Chaco constituye una de las jurisdicciones con mayor tasa de notificación de casos del país, siendo las formas extrapulmonares y la tuberculosis infantil los casos más difíciles de diagnosticar que conllevan a un aumento de la morbilidad y mortalidad. Este estudio se realizó con el objeto de determinar la frecuencia y características demográfico/bacteriológicas de los casos de tuberculosis confirmados en el laboratorio de referencia provincial de la Provincia del Chaco durante el período 2014-2015. Se revisaron los registros de laboratorios de pacientes ambulatorios y hospitalizados, pediátricos y adultos ingresados al Laboratorio Central de la provincia de Chaco. Los resultados de este estudio evidenciaron que la tuberculosis continua afectando en su mayoría a varones en edades jóvenes. El cultivo permanece como una herramienta fundamental para confirmar el diagnóstico de casos extrapulmonares. La proporción de casos multirresistentes (resistente al menos a los dos fármacos más efectivos en el tratamiento de la tuberculosis -isonicida y rifampicina-) entre los casos con factores de riesgo para resistencia es muy elevada. La implementación de metodologías rápidas que permitan evaluar universalmente la sensibilidad a los medicamentos anti tuberculosis de los casos identificados, parece un elemento importante a fin de identificar los casos de multirresistencia en forma más temprana, acelerándose así la administración de un tratamiento adecuado y la interrupción de la transmisión de la enfermedad.

La innovación en el sector agropecuario boliviano es importante para el desarrollo productivo y la competitividad, dado que es un sector que se caracteriza por utilizar bajas proporciones de conocimientos avanzados en sus procesos productivos. La producción de camélidos en el municipio de Jesús de Machaca, la cual se realiza en unidades de producción familiar de autoconsumo no es la excepción. El objetivo de la tesis fue analizar el proceso de innovación local en la cadena de camélidos sudamericanos del municipio de Jesús de Machaca (La Paz, Bolivia) como factor clave de la competitividad, para orientar políticas que permitan superar asimetrías territoriales. Partiendo del concepto de “sistema de innovación” como el conjunto de actores que interactúan en el proceso de creación y diseminación de innovaciones, el estudio se enfocó a dar respuesta a los siguientes interrogantes ¿Cómo interactúan entre sí los diferentes actores? ¿Cuáles son las organizaciones que caracterizan el sistema de innovación? ¿Cuál es el impacto de las interacciones entre los productores y los principales agentes del sistema? El análisis se realizó a partir de las principales organizaciones del sector que ayudaron a identificar a los actores del sistema y aquellas innovaciones que mejoren su competitividad. Se trata de una investigación de alcance descriptivo correlacional, donde se utilizaron para el relevamiento de datos, cuestionarios a productores y entrevistas semiestructuradas a los principales agentes del sistema. Para analizar las relaciones, se aplicó el análisis de redes mediante el programa UCINET v.6.6. Los resultados mostraron mayor orientación hacia innovaciones de procesos y que los atributos de los productores no influyeron significativamente en la adopción de innovaciones; por otro lado, el análisis relacional reveló el rol clave que cumple la Asociación de Promotores en Crianza de Camélidos y las ONGs, así como la débil participación de instituciones públicas claves para el proceso de innovación (La Universidad Pública de el Alto (UPEA) y el Instituto Nacional de Innovación Agropecuaria y Forestal (INIAF)). Los resultados son de utilidad para tomadores de decisiones, sean estos organismos públicos o privados.

La Hidatidosis, es una zoonosis parasitaria, endémica en la provincia de Río Negro. Las áreas geográficas de mayor riesgo están ubicadas al oeste y al centro de la provincia, en donde las condiciones ecológicas favorecen la sobrevida de huevos de Echinococcus granulosus y las condiciones sociales, culturales y económicas generan un ambiente epidemiológico que favorecen el ciclo de transmisión. En este estudio se evalúa la relación entre la distribución geográfica de la tasa de hidatidosis en niños y factores de riesgo ambientales y climáticos como temperatura, vegetación y regiones naturales. Para tal fin se emplearon modelos espaciales de Poisson de efectos fijos y mixtos. La temperatura media anual de la superficie terrestre y el Índice de Vegetación de Diferencia Normalizada, influyeron en forma negativa, y la región ecológica Patagonia Extra Andina Occidental en forma positiva, sobre la razón de morbilidad estandarizada de hidatidosis en chicos de 0 a 14 años. Cuando se evalúa la temperatura por rangos, la correlación se obtuvo con el intervalo de 17.19 a 20.90 °C. Las covariables mencionadas explicaron en parte la distribución de casos en el área de estudio mediante el modelo de efectos fijos, presentando sobredispersión. Modelos jerárquicos Bayesianos espaciales de efectos mixtos modelaron la sobredispersión mediante la incorporación de efectos aleatorios estructurados y no estructurados en el espacio, favoreciendo la bondad de ajuste y el potencial de predicción del modelo. La descomposición del riesgo relativo indicó que los radios censales ubicados al centro-sur y sur-oeste provincial fueron explicados por efectos fijos, mientras el riesgo relativo del radio censal n° 4, ubicado en el centro-norte, es debido a efectos aleatorios no estructurados en el espacio. Los modelos desarrollados podrían ser utilizados para predecir la distribución de casos en el área programa Hidatidosis.