Catálogo de publicaciones - tesis
Título de Acceso Abierto
Participación de la SUMOilación de proteínas componentes del spliceosoma en el proceso de splicing
María Berta Pozzi Anabella Srebrow
publishedVersion.
Resumen/Descripción – provisto por el repositorio digital
La mayoría de los genes eucariotas por la ARN polimerasa II dan lugar a ARN mensajeros “inmaduros” o precursores (pre-ARNm) que contienen exones e intrones. El splicing es el proceso mediante el cual los intrones son escindidos de sus exones flanqueantes y los exones son posteriormente religados para dar lugar a ARN mensajeros maduros (ARNm). Este proceso es llevado a cabo por el spliceosoma, un mega complejo ribonucleoproteico compuesto por cinco partículas denominadas “snRNPs” (U1, U2, U4, U5 y U6) y factores proteicos asociados. Cada snRNP está formado por un ARN pequeño nuclear (snRNA), un set común de proteínas Sm o LSm y un número variable de proteínas específicas de cada partícula. El spliceosoma no existe formado como tal en el núcleo celular sino que se ensambla de novo a partir de sus componentes, de manera precisa y ordenada, sobre cada región del pre-ARNm que debe ser escindida reconociendo secuencias específicas que determinan los sitios de splicing. Trabajos previos de nuestro laboratorio demostraron que el factor de splicing SRSF1 es también un regulador de la vía de SUMOilación, ejerciendo una actividad de tipo E3 ligasa. Estos resultados nos condujeron a explorar una posible conexión entre las maquinarias de SUMO y splicing, hipotetizando que la conjugación a SUMO podría modular la dinámica del proceso de splicing al afectar las interacciones entre proteínas y entre éstas y el ARN. En este trabajo, hemos hallado que el agregado de la proteasa de SUMO SENP1 disminuye la eficiencia de splicing in vitro. Por otra parte, el análisis por espectrometría de masa de proteínas inmunoprecipitadas con un anticuerpo anti-SUMO a partir de complejos spliceosomales purificados a distintos tiempos de la reacción de splicing nos permitió identificar diversas proteínas componentes del spliceosoma como sustratos de SUMOilación. Enfocándonos en una de ellas, la proteína componente del di-snRNP U4/U6 Prp3, detectamos su SUMOilación en células en cultivo y, mediante mutagénesis dirigida, hallamos que las lisinas 289 y 559 son sitios de conjugación de SUMO dentro de esta proteína. Observamos que la doble mutante Prp3 K289/559R, deficiente en SUMOilación, no interacciona con los snRNAs U2 y U5 ni con las proteínas spliceosomales SF3a1 (componente del snRNP U2) y Snu 114 (componente del U5 snRNP) a diferencia de la versión salvaje de Prp3, pero sí interacciona con proteínas y snRNAs componentes del di-snRNP. Estos resultados sugieren que el ensamblado de esta partícula (U4/U6) es independientemente de la conjugación de SUMO a Prp3 pero que sin embargo, esta modificación post-traduccional es necesaria para la interacción de Prp3 con las partículas snRNPs de las que ella no forma parte (U2, U5). Además, la versión mutante de Prp3 no logra rescatar los niveles de eficiencia de splicing de pre-ARN mensajeros cuando es sobre-expresada en células en cultivo, en comparación a la versión salvaje (wild type), en un contexto de silenciamiento de la proteína endógena. Experimentos de inmunoprecipitación de la cromatina sugieren que esto responde a un menor reclutamiento de la versión mutante a regiones intrónicas en el ADN, comparada con la versión salvaje, durante el splicing co-transcripcional. Estos hallazgos proponen que la conjugación de SUMO juega un papel importante en el proceso de splicing y sugieren que la SUMOilación de Prp3 participa en la formación o reclutamiento del trisnRNP durante el ensamblado del spliceosoma.Palabras clave – provistas por el repositorio digital
SPLICEOSOMA; MODIFICACIONES POST-TRADUCCIONALES; SUMO; SRSF1; PRP3; SPLICEOSOME; POSTTRANSLATIONAL MODIFICATIONS
Disponibilidad
| Institución detectada | Año de publicación | Navegá | Descargá | Solicitá |
|---|---|---|---|---|
| No requiere | 2017 | Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) |
|
Información
Tipo de recurso:
tesis
Idiomas de la publicación
- español castellano
País de edición
Argentina
Fecha de publicación
2017-03-07
Información sobre licencias CC
