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Título de Acceso Abierto
La respuesta transcripcional y de splicing alternativo al daño al ADN y el rol de la glucógeno sintasa kinasa 3 (GSK-3)
Nicolás Nieto Moreno Alberto Rodolfo Kornblihtt Manuel Javier Muñoz Anabella Srebrow
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Resumen/Descripción – provisto por el repositorio digital
En esta tesis doctoral estudiamos la respuesta transcripcional y de splicing alternativo (SA) al daño al ADN producido por luz ultravioleta (UV) en células humanas en cultivo. Los CPDs, lesiones en el ADN producidas por la luz UV, y su reconocimiento por el factor de reparación XPE provocan una cascada de transducción de señales mediada por la proteína ATR que finaliza en la hiperfosforilación de la RNA polimerasa II (RNAPII) y en una reducción en su tasa de elongación. Esto produce cambios en los patrones de SA en el marco del modelo de acoplamiento cinético entre la transcripción y el SA.Para identificar qué otros factores vinculan las lesiones en el ADN con la RNAPII desarrollamos un sistema reportero fluorescente de SA que permite conocer la regulación del SA de forma rápida y sencilla: consiste en un minigén inducible que expresa las proteínas GFP o dsRed según se incluya o no un exón alternativo. Con este reportero, realizamos un rastreo con 686 inhibidores de kinasas del Published Kinase Inhibitor Set (PKIS2 library) de GlaxoSmithKline. De los 686 inhibidores analizados, sólo 11 demostraron tener un efecto en la regulación del SA en respuesta a UV. En particular, la glucógeno sintasa kinasa 3 (GSK-3) es un blanco común a 6 de los 11 inhibidores. Por lo tanto, nos centramos en el estudio del rol de GSK-3 en la regulación del SA trabajando con inhibidores altamente selectivos y con células en las que eliminamos la expresión de las isoformas α o β de GSK-3, provenientes de dos genes parálogos, mediante la tecnología CRISPR. Observamos que GSK-3 juega un papel central en la respuesta al daño: la inhibición de GSK-3 previene la respuesta transcripcional y de SA medida a nivel de la hiperfosforilación de la RNAPII, revierte la reducción de la tasa de elongación de la RNAPII e impide los cambios en el SA de genes previamente identificados como genes regulados por la irradiación con luz UV. Además, la inhibición de GSK-3 previene la apoptosis inducida por UV. En conjunto, estos resultados develan un rol central para GSK-3 en la respuesta al daño al ADN inducido por luz UV.Palabras clave – provistas por el repositorio digital
Daño al Adn; Transcripción y Splicing Alternativo; Rnapii; Glucógeno Sintasa Kinasa 3 (Gsk-3); Bioquímica y Biología Molecular; Ciencias Biológicas; CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
Disponibilidad
| Institución detectada | Año de publicación | Navegá | Descargá | Solicitá |
|---|---|---|---|---|
| No requiere | 2019 | CONICET Digital (SNRD) |
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Información
Tipo de recurso:
tesis
Idiomas de la publicación
- español castellano
País de edición
Argentina
Fecha de publicación
2019-03-25
Información sobre licencias CC
