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Elhexaclorobenceno (HCB)es un tóxico ambiental ampliamente distribuido en la biósfera. La exposición crónica de animales de laboratorio al HCB, produce porfiria, inducción de enzimas microsomales hepáticas, disfunciones tiroideas, inmunosupresión, cambios en la función reproductiva y en el metabolismo lipídico e inducción de tumores tiroideos y hepáticos. En este estudio, hemos demostrado que el HCB, administrado a ratas hembras por intubación góstrica, induce cambios en la función de membrana celular hepática, de manera dependiente del tiempo y de la dosis. Nuestros resultados mostraron pa primera vez, que la intoxicación crónica con HCB, producía una internalización de los receptores de EGF (REGFs),acompañado de cambios en la actividad de quinasas de tirosina (PTKs)y de alteraciones en el contenido de fosfotirosina de numerosas proteínas endógenas de membrana y citosólicas. Estas modificaciones ocurrieron desde dosis muy bajas en las que no hay alteraciones en otros parametros indicativos de toxicidad manifiesta, como porfiria y disminución de T4 sérica. En un modelo de intoxicación aguda (24 horas post-tratamiento), el HCB aumenta las actividades de Ornitina Decarboxilasa (ODC) y Proteína quinasa C (PKC) dependiente de calcio y fosfolípidos, y el contenido de espermina, y disminuye la actividad de PTKs de membrana. El contenido de poliaminas (putrescina, espermidina y espermina) se incrementó significativamente a las 48 horas post-tratamiento. Nuestros resultados sugieren que el mecanismo de acción del HCB, estaría mediado por la transducción de señales de receptores de factores de crecimiento.

Fil:Orti, Eduardo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

La especificidad en la vía de transducción de señales de cAMP-PKA está determinada por el reconocimiento de la secuencia blanco en el sustrato y por la localización de la quinasa en compartimentos subcelulares. En Saccharomyces cerevisiae los determinantes de la especificidad de la proteína quinasa A (PKA) están menos caracterizados que en mamíferos. Analizamos el comportamiento de los sustratos y los determinantes de secuencia alrededor del sitio de fosforilación de tres proteínas sustrato: Piruvato quinasa 1 (Pyk1), Piruvato quinasa 2 (Pyk2) y Trehalasa neutra (Nth1). La proteína Nth1 es mejor sustrato que la proteína Pyk1 y ambas son fosforiladas tanto por Tpk1 como por Tpk2, dos de las isoformas de la subunidad catalítica de la PKA de levaduras. Las tres proteínas contienen uno o más motivos consenso de PKA, Arg-Arg-X-Ser, pero no todos ellos son fosforilados. Análisis de esos sitios permitieron determinar que los residuos ácidos en la posición P+1 o en el extremo N-terminal son deletéreos para la reacción catalítica, mientras que los residuos positivos presentes más allá de las posiciones P-2 y P-3 la favorecen. Un residuo hidrofóbico voluminoso en posición P+1 no resulta crítico, a diferencia de lo que ocurre con los sustratos de la PKA de mamíferos. El mejor sustrato tiene en la posición P+4 un residuo ácido, equivalente al que se encuentra en la secuencia inhibitoria de Bcy1, la subunidad regulatoria de la PKA de levaduras. Se analizó también el efecto del sustrato sobre la activación de la holoenzima y demostramos que tanto los sustratos peptídicos como las proteínas enteras sensibilizan en diferentes grados, dependiendo de sus secuencias, a la holoenzima para la activación por cAMP. Los resultados también sugieren que las proteínas enteras son mejores co-activadores que los péptidos. Se determinaron los catalitic turnover numbers de las isoformas Tpk1 y Tpk2, y ambas enzimas mostraron el mismo valor, 3 seg-1, diez veces menor que el valor determinado para las subunidades C de mamíferos. La compartimentalización de la señal del cAMP, otro punto de regulación de la especificidad, es mantenida por el agrupamiento de las enzimas de la vía de señalización en unidades discretas a través de las proteínas de anclaje de la proteína quinasa A (AKAPs), las cuales interactúan con la subunidad regulatoria de la holoenzima. Hasta el momento no habían sido identificadas proteínas de anclaje en levaduras. Definimos, utilizando abordajes in silico y bioquímicos de copurificación e identificación por espectrometría de masa, proteínas que hacen interacción con Bcy1, entre ellas: GTPase activating protein 2 (Ira2), Myosin2 (Myo2), Heat shock protein 60 (Hsp60) and Protein Tyrosine Phosphatase 1 (Ptp1). Utilizando arrays de péptidos se identificaron los residuos críticos para la interacción en las proteínas de anclaje. Los dominios definidos como claves de la interacción presentan una estructura posible de α-hélice con residuos cargados positivamente que son importantes para la interacción. Usando mutantes de deleción se definió que las proteínas estudiadas hacen interacción con la región N-terminal de Bcy1. Se verificó la interacción in vitro por ensayos de pull-down, e in vivo por inmunoprecipitación. También se demostró que Bcy1 e Ira2 localizan en la misma fracción subcelular y que péptidos derivados de Ira2 son fosforilados por las Tpks in vitro. Se analizó la relevancia fisiológica de la interacción entre Bcy1 y Hsp60 y se observó que la actividad quinasa de PKA disminuye en ausencia de la chaperona, indicando que la Hsp60 tendría una función estabilizadora sobre las Tpks y además que frente a un estrés térmico Bcy1, Tpk1 y Hsp60 aumentan su localización en la fracción mitocondrial, lo que permitiría modular el transporte de proteínas mitocondriales por fosforilación

La permanencia de la mayoría de las neuronas durante toda la vida del organismo necesaria para mantener sus funciones, y el hecho de que estas células no se dividan luego del desarrollo sugieren que, durante la evolución, se ha ejercido una fuerte presión sobre el sistema nervioso de modo de desarrollar diversos mecanismos que lo protejan contra la muerte celular. Las dramáticas consecuencias de la neurodegeneración enfatizan la importancia de estos mecanismos que promueven la supervivencia y plasticidad neuronal. Por lo tanto, la identificación de los factores implicados en la regulación de la homeostasis y supervivencia neuronal es imprescindible para comprender el desarrollo y establecimiento de las enfermedades neurodegenerativas y para el diseño de una terapia racional para su tratamiento. La expresión temprana y extensa de p19INK4d, un miembro de la familia INK4 de inhibidores del ciclo celular, en el cerebro y su participación en la reparación del DNA y en la apoptosis sostienen la hipótesis de que esta proteína participaría en mecanismos de protección de las neuronas frente a la muerte celular. El objetivo del presente trabajo consistió en evaluar el potencial rol de p19 en este sentido, así como también su mecanismo de activación. Se utilizaron células SH-SY5Y diferenciadas con ácido trans-retinoico como modelo neuronal y cultivos primarios de neuronas hipocampales de rata. Los tratamientos con genotóxicos como el péptido β-amiloide o neocarzinostatina indujeron la expresión y fosforilación de la proteína de p19. Ambos efectos fueron dependientes de la movilización de calcio intracelular, ya que la incubación con el ionóforo de calcio A23187 o con una concentración aumentada de potasio, recapitularon la acción de los genotóxicos sobre p19. La inhibición de la actividad de CDK5 o la incubación con calpeptina, un inhibidor de la calpaína, responsable de la proteólisis de p35, subunidad regulatoria de CDK5, a p25, su forma más activa, causaron la inhibición de la fosforilación de p19 en respuesta a genotóxicos, demostrando que la quinasa CDK5 es la enzima efectora de dicha fosforilación. Se establecería un balance entre la síntesis y degradación de la proteína p19, ya que la misma parecería ser un sustrato de la calpaína, proteasa que se activa en presencia de los genotóxicos mencionados. Por otro lado, el factor de transcripción E2F1 participaría en la inducción de la expresión de p19 frente al péptido β-amiloide. Las células neuronales con sobrexpresión inducida de p19 repararon más eficientemente el DNA dañado y mostraron niveles reducidos de muerte celular en respuesta al tratamiento con el péptido β-amiloide o neocarzinostatina. Resultados opuestos se obtuvieron en células deficientes en esta proteína. La presencia de los genotóxicos también produjo la inducción del gen de p19 en neuronas de hipocampo. Estas células con niveles disminuidos de p19 presentaron una menor eficiencia en la reparación del DNA y un mayor grado de apoptosis luego del tratamiento con los genotóxicos. La presencia de p19 influenció la sensibilidad neuronal a largo plazo y confirió resistencia al estrés neurotóxico. Ensayos in vivo llevados a cabo en el hipocampo del ratón mostraron que en ausencia de p19 existía un mayor porcentaje de células dañadas luego de la inyección de neocarzinostatina. De esta forma, los resultados obtenidos en esta tesis nos permiten hablar de p19 como un factor neuroprotector, implicado no sólo en los mecanismos de reparación del DNA en respuesta al estrés genotóxico exógeno, sino también en la resistencia y en la supervivencia de las neuronas en respuesta a procesos endógenos que conducen a la neurodegeneración.

El dealeado o disolución selectiva de aleaciones es un proceso de corrosión característico de muchos sistemas metálicos, por el cual la superficie de la aleación se empobrece en su componente menos noble. Y se recubre de una capa rica en el metal más noble. Esta es generalmente porosa y de escasa resistencia mecánica, lo cual es comúnmente causa de fallas en servicio. El objeto de esta investigación fue el estudio del dealeado en el sistema Cadmio-Magnésio, que presenta características que lo hacen de sumo interés para la elucidación de aspectos básicos de este fenómeno. Pese a que actualmente estas aleaciones sólo son de interés teórico, es de esperar que las conclusiones obtenidas sean de utilidad para la mejor comprensión de los problemas de dealeado de aleaciones industriales, tales como latones, bronces de aluminio, cuproníqueles o aleaciones cobre-oro. El presente trabajo consistió básicamente en un estudio de la cinética y morfología de la disolución selectiva de Mg en aleaciones Cd-Mg ricas en Cd, en soluciones acuosas de NaClO4 y otros electrolitos. Se estudió el efecto de distintas variables, tales como: potencial de electrodo, temperatura, pH, composición de la aleación y del electrolito, además del efecto del agregado de pequeñas cantidades de un tercer aleante. Los resultados se analizan a fin de determinar el mecanismo que gobierna el proceso de dealeado en este sistema.

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El objetivo general de este trabajo es contribuir a la determinación de la constitución, la topografía, y las transformaciones de los lípidos en el núcleo celular. Es, además, determinar los mecanismos de acción en los que los lípidos están involucrados que conducen, entre otros, a la regulación de la expresión genética. Se propusieron los siguientes objetivos específicos: 1- Determinar la constitución y la localización de los pooles lipídicos nucleares de células de hígado de rata normal. 2- Determinar los posibles mecanismos por los cuales los ácidos grasos procedentes del citosol se internalizan, interaccionan y redistribuyen en los pooles lipídicos del núcleo celular. 3- Determinar el rol de L-FABP en la internalización, interacción y redistribución de los AG en los pooles lipídicos del núcleo celular. Con esos objetivos se plantearon las siguientes hipótesis: • Los pooles lipídicos nucleares y endonucleares están constituídos mayoritariamente por fosfolípidos y por un alto porcentaje de AG polinosaturados. • Los AG llegan al interior nuclear como AGL o como acilCoAs e interaccionan con los pooles lipídicos nucleares y endonucleares por un mecanismo acil-CoA dependiente. • La L-FABP favorece de manera específica la interacción de los AG con los pooles lipídicos nucleares y endonucleares.

Fil:Kerber, Norma Lucía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

En este trabajo, se dilucida el mecanismo de reacción de la descomposición fotolítica del ioduro de isopropilo en fase gaseosa, en presencia de mercurio, con radiación de longitud de onda mayor fue 3.1301Å , estableciendo que es el siguiente: IiC3H7 —> I + i C3H7 (1) i C3H7 + i C3H7 -> C3H6 + C3H8 (2) i C3H7+ i C3H7 -> C6H14 (3) i C3H7+ IiC3H7 —> C3H8 + IiC3H6 (4) I (ó 12) + Hg -> I2Hg (5) Se llega a la conclusión de que tanto la reacción de descomposición molecular, (6) IiC3H7 —> C3H6 + I H (6) como 1a abstracción de hidrógeno sobre carbono primario (7) seguida de la descomposicióndel radical resultante (8) i C3H7 + IiC3H7__, I C3H6+ C3H8 (7) I C3H6 —> I + C3H6 (8) no ocurren en un apreciable porcentaje. Se encuentra para delta (iC3H7- i C3H7),que es la relación de las constantes de velocidad de las reacciones (2) y (3) un valor promedio de 0.576 +- 0.014, en total acuerdo con el dato informado en la literatura, lo cual muestra fehacientemente que los ioduros de alquilo pueden ser una fuente muy útil de radicales libres. Se analiza tambien el comportamiento del sistema azometano más ioduro de isopropilo bajo 1a acción de radiación de longitud de onda mayor que 3130, en presencia de mercurio, y se encuentran valores para la "combinación cruzada" de los radicales metilo e isopropilo, en acuerdo con los hallados previamente, lo cual también es una demostración del comportamiento normal de los fragmentos. Se determinó adyacentemente, el “calor de la constante de velocidad de la reacción (9) a 300 °K. CH3 + IiC3H7 -> ICH3 + 1 C3H7 (9) que resultó ser aproximadamente: k9 = 7.42 10 7 cc mol-1 seg-1 La conclusión final que se extrae es que la fotólisis de los ioduros de alquilo en fase gaseosa, en presencia de mercurio,es una excelente fuente de radicales alquilo, lo cual, dada la gran diversidad de estas sustancias su alta volatilidad y su fácil obtención y manipuleo, abre nuevas posibilidades al estudio de las reacciones entre radicales libres en fase gaseosa. A los efectos de conocer los antecedentes del trabajo realizado, se hace en el primer capítulo una reseña de los aportes fundamentales realizados hasta el presente, en materia de fuentes fotolíticas de radicales alquilo, reacciones entre radicales, reacciones de tranferencia de hidrógeno y de halógenos por parte de radicales y fotólisis de haluros de alquilo. En el segundo y tercer capitulo se describen la parte experimental del trabajo, y los resultados obtenidos, respectivamente y en el cuarto se realiza la discusión de dichos resultados y se sacan las conclusiones finales.

Fil:Billi de Catabbi, Silvia Cristina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.