Catálogo de publicaciones

Tesis (Doctor en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2015

Fil:Alche, Laura Edith. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Fil:Blejer, Jorgelina Luisa. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Se caracterizó la infección aguda y persistente del C. musculinus inoculado experimentalmente por distintas vías con la cepa atenuada XJ Cl3 de virus Junín. La morbimortalidad fue dependiente de la edad de los animales y de las dosis inoculadas. La sintomatología clínica fue neurológica y las muertes debidas a severas meningoencefalitis. Los animales que no enfermaban, o se recuperaban de la etapa aguda limpiaban el virus del organismo o se presentaban persistentemente infectados. En ambos casos se detectaron altos títulos de anticuerpos neutralizantes. El reservorio de virus en el organisno de los animales crónicamente infectados fue exclusivamente el cerebro, y en un bajo porcentaje las glándulas salivales. Los estudios sobre transmisión del virus entre cricétidos demostraron que la misma ocurre en forma horizontal, no pudiendo establecer la existencia de transmisión vertical. Con el objeto de esclarecer el mecanismo de persistencia se estudiaron las alteraciones que sufre el virus durante la infección persistente. La caracterización de las poblaciones virales presentes en el cerebro de los C. musculinus crónicamente infectados demostraron: 1) Las poblaciones virales se enriquecen en función del tiempo en variantes ts. 2) Se detectaron en las mismas poblaciones la aparición de mutantes serológicas, que son pobremente neutralizadas por los anticuerpos neutralizantes presentes en los sueros de los mismos animales. Además se detectó la presencia de un factor interferente antiviral inespecífico que podría tener algún papel en la patogenia viral.

El virus Junín (JUNV), agente etiológico de la fiebre hemorrágica argentina, pertenece a la familia Arenaviridae. Los virus pertenecientes a esta familia son capaces de causar infecciones persistentes en roedores, los cuales actúan como reservorios naturales, asegurándose así su evolución y perpetuación en la naturaleza. Asimismo, son capaces de multiplicar en una amplia variedad de cultivos celulares pudiendo desarrollar el estadio de persistencia en la mayoría de ellos. El objetivo de este trabajo fue determinar las diferencias existentes entre infecciones agudas y persistentes en cultivos de células Vero frente a tratamientos que tienden a desestabilizar el equilibrio virus célula. A tal fin, mediante la infección experimental de células Vero con la cepa XJCl3, se obtuvo una línea celular persistentemente infectada con dicho virus, denominada V3, que se utilizó como modelo de estudio. En los ensayos realizados con el agente mutagénico 5-fluoruracilo (5-FU) se observó que la susceptibilidad a la inhibición ejercida por esta droga sobre JUNV dependió del lapso transcurrido entre el momento de la infección y el tratamiento, y de la m.o.i. utilizada sugiriendo que la proporción de células infectadas al momento de tratar definía la resistencia a la droga. En este sentido, las células V3 resultaron menos afectadas por el 5-FU en comparación con las células infectadas y tratadas durante la etapa aguda. Por otro lado, el análisis del ciclo celular de células Vero mostró que la infección con JUNV generó alteraciones en la respuesta del cultivo frente a estímulos como la confluencia de las células de la monocapa y el tratamiento con agentes inductores de arresto del ciclo. Durante ensayos de transfección con proteínas virales dicha alteración del ciclo fue asociada a la nucleoproteína viral N. Sin embargo, a pesar de la aparente manipulación del ciclo celular por parte del virus no se pudo asociar alteraciones inducidas del ciclo, a una disminución en el rendimiento viral. Teniendo en cuenta que los cultivos persistentemente infectados no presentan el efecto citopático (EC) típico de las infecciones agudas de este virus en células Vero, se evaluó en primer lugar la naturaleza de dicho fenómeno. El estudio de distintos indicadores de apoptosis mostró que dicho evento seguía una cinética similar a la desarrollada por el EC viral, observándose además un incremento en la expresión de p53 y en el clivaje de la caspasa 3. Cuando estos indicadores se analizaron en células V3, los valores encontrados presentaron valores similares a los de células Vero sin infectar. Por otro lado, al analizar la respuesta de los distintos cultivos frente a la inducción de apoptosis con staurosporina (STS) o luz ultravioleta (UV) los cultivos persistentemente infectados resultaron más resistentes que los cultivos infectados de forma aguda y las células sin infectar frente a la apoptosis inducida por luz UV y todos se comportaron de manera similar frente a la STS. Este comportamiento sugiere que JUNV podría estar modulando negativamente la apoptosis durante la persistencia de manera específica frente a ciertos estímulos aunque no frente a un inductor fuerte como la STS. La resistencia al estrés térmico también fue evaluada como un parámetro diferencial entre los distintos tipos de cultivos. En forma similar a lo que sucedió con el 5-FU el virus resultó más resistente al tratamiento con calor cuando éste se aplicó a tiempos de tratamiento p.i. tardíos y a mayores m.o.i.. La síntesis de HSP-70, principal efector de la respuesta celular al shock térmico, no se asoció temporalmente con la reducción de los títulos virales. De manera similar a lo observado con la respuesta al shock térmico, el tratamiento con arsenito de sodio (Ars), inductor de estrés oxidativo, resultó menos efectivo cuanto mayor era la proporción de células infectadas en los cultivos. El conjunto de resultados permite concluir que las características diferenciales presentadas por los cultivos infectados en forma persistente serían adquiridas durante el transcurso de la infección, al menos en el caso de la resistencia a los inductores de: extinción viral (5-FU), estrés térmico y oxidativo (HS y Ars) y alteraciones del ciclo. Esta estrategia estaría basada en la acumulación de suficiente cantidad de proteínas, en particular, la nucleoproteína N, a fin de controlar las respuestas a estrés, ya sea por intervención directa de dichas proteínas o a través de la modulación en la formación de gránulos de estrés citoplasmáticos y/o de cuerpos nucleares asociados a la proteína de leucemia promielocítica.

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2019

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2020

Con el fin de determinar la presencia del virus de influenza en piaras de producción porcina intensivas, de mediana y gran escala, se llevaron a cabo tres estudios independientes. Se realizó un estudio serológico retrospectivo en un grupo de muestras provenientes de 17 establecimientos. Se determinó la presencia de anticuerpos contra influenza serotipos H1N1 y N3N2 a través de las pruebas de inhibición de la hemaglutinación (IHA) y la prueba de ELISA. La prueba de IHA utilizó antígenos contra los serotipos circulantes en la población humana durante el año 2002 y la prueba de ELISA antígenos de subtipos porcinos circulantes en Norte America. Los sueros evaluados a través de la técnica de IHA mostraron un alto porcentaje de establecimientos y animales seropositivos a H3N2 y H1N1. A pesar del bajo porcentaje de sueros positivos detectados con la prueba de ELISA, esta detectó por lo menos un animal positivo por granja. Muestras de pulmón, obtenidas en plantas de faena con lesiones compatibles con bronconeumonia necróticas fueron evaluadas por IHQ y microscopia electrónica. Se observó inmuno marcación en macrófagos alveolares y epitelio respiratorio en cortes por congelación. En los mismos tejidos se pudo observar partículas virales intracitoplasmáticas compatibles con virus de influenza. Se realizó un estudio longitudinal prospectivo en 10 establecimientos de producción intensiva. Se evalúo seroconversion así como la eliminación del agente y la presencia de lesiones pulmonares compatibles con la infección por el virus de influenza durante un ciclo completo de producción. No se detectaron anticuerpos y no se observó la circulación del virus de influenza durante el periodo en estudio. Sumado a la evaluación de influenza se evalúo la presencia de múltiples agentes que afectan al aparato respiratorio y factores de riesgo que pueden afectar parámetros productivos. La seroconversión contra Mycoplasma hyopneumoniae durante la ultima etapa de producción mostró tener una alta correlación con una alta prevalencia de lesiones pulmonares durante la faena. Sumado a esto se observo que la presencia de estas lesiones tiene un impacto negativo en la ganancia diaria de peso durante la etapa de desarrollo. Se determinaron numerosos factores de riesgo asociados a la presencia de animales seropositivos a PCV-2. Finalmente se realizó un estudio de brote en una piara que presentó un cuadro respiratorio agudo con alta morbilidad y baja mortalidad. A través de estudios anatomopatológicos se observaron lesiones características en patrón de tablero de ajedrez. La marcación con anticuerpos antinucleoproteína de influenza mostraron tinción positiva en células epiteliales y macrófagos alveolares. Finalmente las muestras procesadas por rRT-PCR mostraron señal positiva con marcadores universales contra influenza. La eliminación viral fue determinada por la presencia de efecto citopatico e infección en embriones de pollo con muestras obtenidas por hisopados traqueales y muestras pulmón de cerdos clínicamente afectados. Se realizó la secuenciación viral observándose que el brote fue debido la circulación e infección de una cepa H3N2 humana no contemporánea.

Dos fagos de colección de Lactobacillus plantarum (ATCC 8014-B1 y ATCC 8014-B2) fueron sometidos a estudios moleculares que incluyeron la determinación del mecanismo de empaquetamiento del ADN fágico, el secuenciamiento de los genomas y la identificación de sus proteínas estructurales. Adicionalmente, se estudió la morfología de ambos fagos. Por otro lado, se evaluó la viabilidad durante la conservación a diversas temperaturas y valores de pH de los fagos de colección y de dos fagos aislados previamente de gránulos de kefir (FAGK1 y FAGK2). Posteriormente, se caracterizó la interacción fago-cepa: influencia de cationes divalentes en el ciclo lítico, rango de hospedadores, ciclos de multiplicación fágica, proceso de adsorción, receptores fágicos y el mecanismo de fagorresistencia del tipo Restricción/Modificación. En el segundo capítulo de esta tesis, se estudió el comportamiento de los fagos frente a diferentes estrategias que podrían utilizarse para disminuir el riesgo de infecciones fágicas. Esto incluyó el estudio de la resistencia fágica a tratamientos térmicos, químicos y fotocatalíticos, así como también el aislamiento de mutantes espontáneos fagorresistentes con aptitudes tecnológicas. En particular, la eficiencia de la fotocatálisis en la inactivación fágica fue evaluada para fagos de diversas especies de bacterias lácticas. Los resultados obtenidos en este estudio permiten profundizar los conocimientos referidos a infecciones fágicas en Lb. plantarum, los cuales serían necesarios si esta especie bacteriana es utilizada en el desarrollo de alimentos funcionales. Por otro lado, este trabajo demostró que es posible el aislamiento de variantes fagorresistentes con adecuadas propiedades tecnológicas.

Los bacilos gram negativos no fermentadores (BNNF) son un grupo heterogéneo de microorganismos que no utilizan los hidratos de carbono como fuente de energía o los degradan a través de vías metabólicas diferentes de la fermentación (1-3). Son bacterias aerobias estrictas no esporuladas que se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza.