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El interés en las respuestas fisiológicas al ejercicio exclusivo del grupo de edad pediátrica ha aumentado exponencialmente en los últimos 50 años. Varios problemas relacionados con el ejercicio de los niños han sido particularmente responsables de esta tendencia, como el reconocimiento de los beneficios para la salud del ejercicio en los jóvenes, y la creciente participación de éstos en niveles muy intensos de juegos deportivos. La introducción de los niños y adolescentes a diferentes tipos de entrenamiento físico nos hace pensar en que la fisiología del ejercicio pediátrico debe ser hoy una ciencia en desarrollo potencial. Más allá de su comparación con la fisiología del ejercicio del adulto, siendo la población infantil, una población especial. Muchos son los ejemplos que se han aplicado entrenamientos diseñados para adultos en niños, cayendo no solamente en errores metodológicos sino desatendiendo las características fisiológicas del infante. No se abarcará en esta ocasión las patologías pediátricas.

A fin de investigar el efecto fisiológico del etileno y del 1-metilciclopropeno en el progreso del ablandamiento del kiwi, se trató los frutos con esos reguladores inmediatamente después de la cosecha, o con 1-metilciclopropeno en diferentes estadios de la maduración después de 40, 80 o 120 d de almacenamiento refrigerado (0ºC). El tratamiento con etileno inmediatamente después de la cosecha estimuló el ablandamiento de la pulpa, incrementó y adelantó el pico de producción de etileno y la expresión de los genes KWACS1 y KWACO1 involucrados en la biosíntesis del etileno. En cambio, el tratamiento con 1-metilciclopropeno en el mismo estadio retrasó marcadamente el ablandamiento e inhibió la producción de etileno. Los incrementos en la abundancia de transcriptos de KWACS1 y KWACO1 fueron bloqueados por el tratamiento con 1-metilciclopropeno, indicando que estos genes son regulados positivamente por el etileno. Los kiwis almacenados en frío (0 ºC)por 40, 80 o 120 d y luego tratados con 1-metilciclopropeno antes de su retorno a 20 ºC para su maduración ulterior mostraron una tasa reducida de ablandamiento de la pulpa y un estadio de madurez de consumo extendido. Estos resultados indican claramente que la aplicación de 1-metilciclopropeno puede jugar un papel significativo en el inicio y en el progreso del ablandamiento del kiwi. El 1-metilciclopropeno inhibió o restringió severamente la producción autocatalítica de etileno en cualquier estado de maduración. La transcripción de los genes KWACS1 y KWACO1 resulto inhibida por el tratamiento con 1-metilciclopropeno después de 40 y 80 d de almacenamiento en frío, sugiriendo que existe una regulación por retroalimentación positiva para la producción de etileno, incluso después del almacenamiento refrigerado. Para investigar los niveles de expresión de genes relacionados con la pared celular durante la ontogenia del kiwi y en respuesta a la aplicación de etileno y de 1-metilciclopropeno, se obtuvo una secuencia completa de cDNA a la cual se denominó AdGAL1, determinándose por análisis bioinformático que es un homólogo de ß-D-galactosidasa de kiwi. El producto deducido de la traducción de AdGAL1 consta de 728 aminoacidos de longitud mientras que laproteina madura posee una masa molecular predicha de 81,12 kDa y un pI teorico de 7,5. Se efectuaron reacciones de RT-PCR semicuantitativas para evaluar la expresión de AdGAL1 y de una serie de secuencias de ADN. Los transcriptos que hibridizan con AdGAL1 resultaron apenas detectables durante el crecimiento del fruto pero se observaron tanto en mesocarpo externo como en columela al comienzo del ablandamiento del fruto (Fase IV, Estadio 1), y durante el ablandamiento tardío (Estadio 3)sugiriendo su injerencia en las grandes pérdidas de galactosa de la pared celular durante el ablandamiento del kiwi. La abundancia de transcriptos que hibridizan con AdARF1 y AdARF/XYL (codificantes de alfa-L-arabinofuranosidasa y de alfa-L-arabinofuranosidasa/ß-D-xilosidasa putativas)permaneció relativamente constante a traves de todo el crecimiento y la maduración(...)

Se estudiaron algunas propiedades del sistema visual de la vinchuca Triatoma infestans. La cuantificación de la respuesta fototáctica negativa de este insecto permitió: 1) establecer el umbral de sensibilidad de la respuesta a la luz blanca (<0.009 μW/cm²);2) demostrar que esta respuesta muestra una variación diaria, siendo mucho mayor durante la noche que durante el día; 3) demostrar que dicho ritmo es de naturaleza endógena, es decir, independiente de los ciclos luz-oscuridad; 4) demostrar la capacidad de los ocelos para mediar por si mismos la respuesta fototáctica; 5) estudiar la sensibilidad espectral de los ojos compuestos de T. infestans, la que fue establecida entre 357 nm (ultravioleta) y 665 nm (rojo lejano); 6) estudiar la dependencia de esta respuesta con la edad y las mutaciones. Por otra parte, mediante técnicas de morfología funcional se estudió la estructura de las omatidias y sus variaciones según el estado de adaptación y el momento del día. Estas variaciones incluyen movimientos de pigmento pantalla y cambios en la distancia focal, que permiten al ojo adaptarse a las condiciones de luz del ambiente. Estos cambios están bajo control de un oscilador endógeno. Se estudió, además, la interacción entre claves olfativas (presentes en las heces de este insecto) y visuales en el comportamiento de agregación de T. infestans. Los resultados muestran que existe una competencia y/o jerarquía entre las señales de distinta modalidad, dependiente de la composición espectral del estímulo visual. Finalmente, se midieron las condiciones luminosas (intensidad y composición espectral de la luz) en un ambiente natural, las que fueron relacionadas con los resultados presentados en este trabajo de Tesis.

Considerando que existe mayor probabilidad en la expresión de genes entre bacterias relacionadas, se obtuvo una colección de cepas del género Thiobacillus seleccionadas según los fenotipos asociados a resistencias de tipo enzimático a distintos metales inhibidores. Entre estas cepas se seleccionaron aquéllas que presentaron resistencias múltiples a los iones metálicos que son inhibidores de T. ferrooxidans con la expectativa de que, al igual que sucede en otras especies, estas resistencias pudieran estar codificadas en un plásmido único. Se determinaron los patrones plasmídicos y se purificaron los plásmidos de las cepas con resistencias múltiples. Uno de estos plásmidos fue transferido a una cepa de E. coli, obteniéndose un notable incremento en las resistencias a los iones metálicos inhibidores de T. ferrooxidans (Hg²+, Ag+, Cd²+, Te2O3=, A6O2-, y HA6O4=), en asociación con los fenotipos característicos. Esto indicó que el plásmido codifica resistencias múltiples a dichos iones, cuyos genes provienen de una especie de Thiobacillus. Por enriquecimiento y aislamientos a partir de muestras de minerales nacionales se constituyó un banco de cepas bacterianas que responden a las caracteristicas de T. ferrooxidans. Se analizó el crecimiento de las cepas así obtenidas, comparandolo con una cepa de colección de T. ferrooxidans en medio ferroso agarizado, a fin de obtener un método adecuado de plaqueo. Se descubrió que el principal problema en la obtención de colonias en corto tiempo, reside en el contenido de agua del medio. Se desarrolló también un método de obtención de colonias en un medio ferroso sin agarizar, constituido por una fina capa de sales depositadas sobre el vidrio de una placa. El requerimiento de un alto grado de deshidratación del medio, para el crecimiento rápido de estas bacterias, permite caracterizarlas como microorganismos Xerofílicos (del griego: amantes de lo seco). En vista del corto tiempo requerido para la obtención de colonias en estas condiciones (24 hs), se determinaron los tiempos de generación de las cepas en medio líquido y adheridas al sustrato sólido (altamente deshidratado). Se encontró que en medio líquido el tiempo de generación de distintas cepas oscila entre 7 y 11 hs, en tanto que adheridas a un medio sólido deshidratado, oscila entre 20 y 30 minutos. Estos resultados se analizaron en función de la principal barrera técnico-económica de los actuales procesos biohidrometalúrgicos, caracterizados por una baja velocidad de multiplicación bacteriana. Por microscopía de scanning se analizaron las relaciones microorganismo-producto cristalino, que se establecen durante la colonización bacteriana del sustrato. Se encontró que el producto de la actividad bacteriana en medios deshidratados se encuentra en estado cristalino, y que las bacterias van quedando, al menos temporalmente, ocluídas en el cristal que forman. Por aplicación de las condiciones anteriores, se estudió el crecimiento bacteriano y la bio-oxidación de distintos sulfuros metálicos sintéticos, concentrados y minerales. Se arribó a conclusiones respecto de las condiciones que independizan el crecimiento bacteriano del nitrógeno amoniacal, sugiriendo una elevada eficiencia en la fijación de nitrógeno, en medios deshidratados. Se propone que el cristal en el que las bacterias van quedando ocluídas, protege al sistema nitrogenasa del oxigeno. Se analizó la cinética del crecimiento de T. ferrooxidans en función del aumento de la masa proteica y del contenido de agua en el medio, y su correlación con la cinética de bio-oxidación de sulfuro cúprico. Se determinó que las cepas de T. ferrooxidans son resistentes a los iones metálicos que resultan inhibidores en medio líquido, cuando el grado de deshidratación de un medio sólido es el requerido para el desarrollo óptimo de la bacteria. La obtención de plásmidos con múltiples resistencias, provenientes de especies de Thiobacillus y el conocimiento del contenido de agua en un medio sólido, en el cual el T. ferrooxidans es sensible a los iones metálicos, crean un marco más adecuado para trabajar en el desarrollo de una metodología de transformación para T. ferrooxidans. Tanto en medios ferrosos como en sulfuros metálicos, se descubrieron fenómenos de translocación bacteriana en superficies, que no habían sido descriptos en estas bacterias y que podrían aplicarse con fines tecnológicos.

Los parasitoides son organismos que se desarrollan sobre o dentro de otro único organismo, el hospedador, alimentándose a expensas de su cuerpo, y matándolo como resultado directo o indirecto de su desarrollo. Por lo tanto, el encuentro y elección del hospedador representan etapas cruciales en la determinación del fitness del parasitoide. Mallophora ruficauda (Diptera, Asilidae), en su etapa larval es un ectoparasitoide solitario de larvas de coleópteros Scarabaeidae, que ataca preferentemente al tercer estadio de la especie Cyclocephala signaticollis. La búsqueda del hospedador es compartida entre la hembra adulta, quien ovipone en el hábitat de los hospedadores adultos, y el segundo estadio larval, quien busca activamente al hospedador dentro del suelo utilizando claves químicas. Según la literatura, las larvas no se alimentan hasta que se aferran al hospedador, sobre el cual permanecen luego hasta completar su desarrollo. Las primeras larvas parasitoides nacen dos meses antes de que haya hospedadores del estadio preferido, por lo que deben esperar al hospedador en el ambiente. A pesar de que sólo una larva se desarrolla por hospedador, el superparasitismo es frecuente. En esta Tesis se estudió el uso de recursos nutricionales en las larvas parasitoides y aspectos de los hospedadores adultos que podrían influir en la detección del hábitat por parte del parasitoide adulto. La utilización de recursos por parte de larva parasitoide se evaluó en términos del uso de recursos del suelo, la inversión de reservas energéticas de las hembras y la variación temporal de dichas reservas, y la elección de hospedadores de distinta calidad. Se encontró que en sustrato natural, con humedad y a temperaturas relativamente elevadas, la proporción de larvas que mudan al segundo estadio y su supervivencia son mayores que en otras condiciones. Además, las larvas son capaces de mudar al segundo estadio sin alimentarse. Las hembras ponen igual número de huevos y asignan cantidades similares de nutrientes a principio y final de la temporada reproductiva, y las larvas tempranas y tardías utilizan los nutrientes de manera similar. En cuanto a la calidad de los hospedadores, se encontró que la ocurrencia de mono y superparasitismo es independiente del peso, tamaño o reservas energéticas del hospedador. En los hospedadores adultos se evaluó el comportamiento térmico, como posible inductor del agrupamiento de hospedadores observado en el campo, y que podría ser explotado por el parasitoide adulto en la elección de sitios de oviposición. Se encontró que los hospedadores adultos presentan ciclos diarios de endotermia, concordantes con sus ciclos de actividad, que no están controlados por el sistema circadiano, y que varían en intensidad de acuerdo a la temperatura ambiente. La endotermia no estaría relacionada con el reconocimiento entre sexos, y se espera que no represente un factor importante en el agrupamiento de los hospedadores. Esta Tesis presenta resultados que contribuyen al conocimiento del sistema M. ruficauda - C. signaticollis en particular, y al conocimiento general de la fisiología y el comportamiento de los sistemas conformados por parasitoides dípteros y sus hospedadores.

El objetivo de esta tesis fue el estudio de distintos aspectos de la biología y fisiopatología de un tumor ovárico experimental altamente luteinizado (luteoma). Se analizaron parámetros relacionados a la proliferación celular, apoptosis, capacidad de síntesis esteroidogénica y de secreción del tumor. Se halló que el luteoma se desarrollaría preferentemente por hipertrofia y proliferación de células foliculares y una marcada ausencia de apoptosis. Además se detectó la síntesis de las distintas subunidades de inhibina a lo largo de 7 meses de desarrollo tumoral; se evidenciaron patrones fluctuantes a lo largo del tiempo para las subunidades β, que correlacionan estrechamente con los niveles séricos de FSH, demostrando así que tejido altamente luteinizado es capaz de producir inhibinas. Posteriormente, se estudió el camino de señalización de un análogo superactivo del GnRH, Buserelina, en células provenientes del luteoma, evidenciando que el camino clásico de transducción de señales acoplado al receptor de GnRH se encontraba alterado y hallándose los caminos altemativos activados por el decapéptido. Por otro lado, se puso de manifiesto la expresión del mRNA y del péptido de GnRH en células del luteoma, postulándose para el mismo un papel autocrino/paracrino en dicho tejido. Finalmente, evaluamos el efecto de drogas inmunosupresoras, Ciclosporina A y Dexametasona, sobre el desarrollo del tumor in vivo en comparación con animales con operación ficticia (Sham) a lo largo de 7 semanas. Los resultados indicaron que, a pesar de ser efectiva la inmunosupresión inducida por estas drogas sobre variables inmunológicas, las mismas no afectaron el desarrollo tumoral. A diferencia de los animales portadores del tumor, en animales Sham la Ciclosporina A indujo efectos sobre varios parámetros, sugiriendo la presencia de factor/es secretado/s por el tumor que impiden o compensan algunas de las acciones de la droga. Estos estudios aportaron nuevos conocimientos acerca de caracteristicas relacionadas al desarrollo y capacidad de síntesis y secreción del luteoma, como así también de caminos de señalización del receptor de GnRH y comportamiento del tumor bajo tratamiento con drogas inmunosupresoras.