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-Se estudió el efecto de citocininas, análogos estructurales de las mismas,inhibidores del metabolismo y factores del crecimiento sobre el balance hídrico de hojas aisladas de maiz. Los resultados obtenidos fueron los siguientes: a —Ia cinetina y la zeatina promovieron la apertura estomática, con un efecto máximo por parte de la cinetina a 5E10-6 M y la zeatina a 5ElO-7 M, Hubo un mayor efecto en la oscuridad, el cual aumentó con el curso del tiempo. La sensibilidad a las drogas disminuyó con el tiempo de incubación. b - Ambas citocininas promovieron la capacidad de absorción hídrica y el peso seco por unidad de área foliar. c - La cinetina aumentó la transpiración y absorción del agua en hojas aisladas de plantas sometidas a sequía. d —La cinetina y la luz revirtieron parcialmente la inhibición de la transpiración producida por Cl Na (lO-3_10-5 M). e —Un tratamiento de "temple" contra la sequía al estado de semilla aumentó la transpiración y absorción de agua en hojas aisladas de plantas sometidas a sequía. f —Los análogos estructurales de 1a cinetina:adenina, adenosina, 8-azaadenina, puromicina, guanina, 8-azaguanina, 6-bencilamino-9-tetrahidropirano-2-yl)—9 H-purina , y las pirimidinas: uracilo y tiouracilo, aumentaron en variado grado y en forma aditiva la capacidad de absorción hídrica. Guanina y azaguanina no promovieron a1 peso seco; adenina, puromicina y tiouracilo no promovieron 1a capacidad de absorción hídrica. g -La actinomicina D y la ribonucleasa pancrática promovieron la capacidad de absorción hídrica y estimularon inicialmente la capacidad transpiratoria, pero luego llegaron a inhibirla. Ambas sustancias en especial 1a actinomicina, deprimieron el peso seco en experimentos de larga duración. En ambos casos el agregado de cinetina tuvo un ligero efecto aditivo. h -D-threo cloramfenicol (10-5 -10-4 M) inhibió notablemente 1a transpiración la cual fué revertida parcialmente por cinetina. A1 cabo de varias horas de incubación con el inhibidor hubo una recuperación y posterior estimulación de 1a transpiración y de 1a capacidad foliar de absorción hídrica. El peso seco fué muy inhibido, pero 1a cinetina alivió el efecto. E1 isómero L no tuvo un efecto apreciable. i -El ácido indolacético (5,10-6 -10E-4 M)estimuló temporariamente 1a transpiración, inhibió ligeramente 1a capacidad de absorción hídrica y promóvió los pesos secps en experimentos de larga duración. No hubo interacción con cinetina. j -El ácido giberólico (5.10-6M) tuvo un notable efecto sobre 1a capacidad de absorción hídrica, pero interactuó con cinetina. Se concluye que 1a cinetina, la zeatina y posiblemente otros análogos estructurales intervienen en el mecanismo regulatorio del balance hídrico en las plántulas de maíz. Ia analogía entre las respuestas de las plantas tratadas con cinetina y "templadas" sugiere la intervención de mecanismos de acción similares. Las citocininas y productos de degradación de los ácidos nucléicos actuarían a través de un efecto revitalizante del metabolismo. Se propone además, que las plantas podrían regular el contenido de cininas de sus diversos órganos y tejidos para poder mantener el equilibrio en condiciones de "stress" hídricos

La citocromo P450 reductasa (CPR) es una flavoproteína que coordina la transferencia de electrones desde el NADPH hacia distintas hemoproteínas, como los citocromo P450 (CYPs), el citocromo b5, y la hemooxigenasa. Los CYPs se encuentran involucrados tanto en la síntesis de compuestos endógenos, tales como esteroles y ácidos grasos, como en la activación y detoxificación de compuestos exógenos. Pese a que existen numerosos genes CYP funcionales en mamíferos, existe sólo una CPR en cada especie. La producción de una clase especial de esteroles, entre los que se incluyen el ergosterol y otros metil-esteroles, es una importante vía metabólica involucrada en el crecimiento y la viabilidad celular de microorganismos eucarióticos, como protozoos u hongos, que se encuentra ausente en mamíferos. En T. cruzi se han identificado y caracterizado bioquímicamente una familia de genes integrada por tres putativas CPRs, llamadas TcCPR-A, TcCPR-B y TcCPR-C, cuyas secuencias poseen los dominios conservados para FMN, FAD y NADPH. TcCPR-A carece del domino hidrofóbico amino terminal. La sobreexpresión de TcCPR-B en epimastigotes incrementa su resistencia a drogas, sugiriendo su participación en el metabolismo de detoxificación del parásito. En la búsqueda de un rol fisiológico para las TcCPRs, en el presente trabajo se analizó el efecto de la sobreexpresión de las mismas, centrándose principalmente en su posible participación en la biosíntesis de esteroles. Una cepa de Saccharomyces cerevisiae deficiente para CPR fue utilizada en ensayos de complementación con las TcCPRs recombinantes de T. cruzi. La baja tasa de crecimiento y la disminución de la resistencia al ketoconazole de la levadura mutante, lograron revertirse parcialmente sólo con TcCPR-B y -C. La sobreexpresión de TcCPR-A en células de epimastigotes resulta letal, produciendo un aumento del contenido de ADN, una morfología aberrante y numerosas alteraciones ultraestructurales. La sobreexpresión de TcCPRB y -C incrementó la biosíntesis de ergosterol y la relación NADP+/NADPH. Los parásitos transgénicos con mayor contenido de ergosterol presentaron un aumento en el orden de membrana, con la respectiva disminución de la endocitosis. Notablemente, TcCPR-B se ha encontrado en reservosomas mientras que TcCPR-C se ha localizado en el retículo endoplasmático. Los resultados obtenidos en esta Tesis junto al correspondiente análisis bibliográfico permiten proponer un rol para las TcCPRs en mecanismos de estrés (TcCPR-A), en reacciones de detoxificación (TcCPR-B) y en la biosíntesis de esteroles (TcCPR-C).

Fil:Affranchino, José Luis. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

El presente trabajo de Tesis se basa en el estudio citogenético básico y evolutivo de especies de Heteroptera fitófagas de interés agroeconómico para nuestro país. Se analizó el complemento cromosómico y el desarrollo meiótico de las siguientes especies: Hypselonotus bitriangulifer bitriangulifer Berg (2n= 19/20= 16+2m+X0/16+2m+XX), Athaumastus haematicus (Stål, 1859), Leptoglossus impictus (Stål, 1859) y Phthia picta (Drury, 1770) (las tres especies poseen 2n= 21/22= 18+2m+X0, 18+2m+XX) (Coreidae); Largus fasciatus (Blanchard, 1843) y Largus rufipennis Laporte, 1832 (ambas con 2n= 13/14= 12+X0/12+XX) (Largidae); Lygaeus alboornatus Blanchard, 1852 (2n= 12= 10+XY/10+XX) (Lygaeidae sensu lato); Dysdercus albofasciatus Berg, 1878 (2n= 12= 10+neoXY/10+neoXX), Dysdercus chaquensis Freiberg, 1948, Dysdercus imitator Blöte, 1931 y Dysdercus ruficollis (Linnaeus, 1764) (las tres especies con 2n= 13/14= 12+X0/12+XX) (Pyrrhocoridae); Jadera haematoloma (Herrich-Schaeffer, 1847) y Jadera sanguinolenta (Fabricius, 1775) (ambas con 2n= 13/14= 10+2m+X0/10+2m+XX) (Rhopalidae). En este trabajo se han encontrado alteraciones numéricas y estructurales en las especies analizadas de las familias Coreidae, Largidae, Lygaeidae y Pyrrhocoridae. Teniendo en cuenta el número cromosómico diploide modal para Coreidae, en Hypselonotus bitriangulifer bitriangulifer se observó una fusión autosómica que trajo aparejado una reducción del número de pares de autosomas. Los resultados obtenidos en Lygaeus alboornatus (Lygaeidae) muestran que esta especie posee el número cromosómico diploide más bajo mencionado hasta el presente para la subfamilia Lygaeinae, el cual se habría originado a partir del complemento cromosómico diploide atávico a través de una fusión autosómica. En la población de Largus fasciatus (Largidae) se encontró un individuo portador de un cromosoma B, mientras que en una población de Dysdercus albofasciatus (Pyrrhocoridae) cuatro especímenes presentaron un cromosoma supernumerario, que por sus características se habría originado a partir de un autosoma. En una población de Largus rufipennis (Largidae) se encontró un individuo portador de una translocación recíproca desigual entre dos cromosomas no homólogos de tamaño mediano. Finalmente, se encontraron individuos con alteraciones en los cromosomas sexuales en especímenes de Jadera sanguinolenta y J. haematoloma, los que presentaron un polimorfismo cromosómicoen relación con el tamaño del cromosoma sexual. Con respecto a los sistemas cromosómicos de determinación del sexo en Heteroptera, se encontró un sistema sexual neo-XY en Dysdercus albofasciatus, que es original para el género, así como para la familia Pyrrhocoridae, y para Heteroptera en virtud de su origen.

En este trabajo de Tesis se estudiaron mediante citogenética clásica y molecular las nueve especies de escorpiones de la familia Buthidae descriptas para la Argentina, además de una especie aún no descripta. Se analizó el cariotipo, el desarrollo meiótico, la distribución de la heterocromatina constitutiva y la localización de las regiones organizadoras nucleolares y de repeticiones teloméricas. Todas las especies presentaron cromosomas holocinéticos y meiosis aquiasmática en machos, como es característico de la familia. Se observó una gran variación inter- e intraespecífica para el número diploide y las configuraciones meióticas en machos: Ananteris balzanii, 2n=14 (4II+VI); Tityus (Tityus) bahiensis, 2n=12 (2II+III configuración 2 + V), 2n=13 (4II+V, 3II+VII configuración 1, 3II+VII configuración 2), 2n=14 (4II+VI) y 2n=15 (6II+III configuración 1); Tityus (Tityus) confluens, 2n=5 (V configuración 1, V configuración 2) y 2n=6 (II+IV, VI); Tityus (Tityus) argentinus, 2n=9 (II+VII) y 2n=10 (5II, 3II+IV, X); Tityus (Tityus) sp. 1, 2n=32 (16II) y 2n=31 (14II+III); Tityus (Tityus) uruguayensis, 2n=31 (12II+VII, 10II+IV configuración 1+VII, 10II+IV configuración 2 +VII); Tityus (Archaeotityus) paraguayensis, 2n=16 (8II, 5II+2III, 6II+IV); Zabius birabeni, 2n=16 y Zabius fuscus, 2n=18 (9II, 7II+IV). Los multivalentes en meiosis I, producto de rearreglos cromosómicos, se encontraron en estado polimórfico en T. confluens, T. paraguayensis, Tityus sp. 1 y T. uruguayensis, y en estado polimórfico y politípico en T. bahiensis, T. argentinus y Z. fuscus. La segregación cromosómica en meiosis I fue balanceada, tanto en individuos homocigotas como heterocigotas estructurales. Las hembras partenogenéticas de distintas poblaciones de Tityus (Tityus) trivittatus presentaron 2n=6, sin variabilidad cariotípica. En la meiosis femenina en Z. fuscus se describió un estadio difuso y bivalentes en forma de anillo en profase I tardía; se discute el posible origen de estos bivalentes en el marco de una meiosis quiasmática o aquiasmática. La localización de la heterocromatina constitutiva mostró variaciones entre las especies. La mayoría presentó bloques terminales en todos los cromosomas e intersticiales en algunos, mientras que A. balzanii, T. paraguayensis y Z. fuscus presentaron bloques terminales en pocos pares cromosómicos. Las regiones organizadoras nucleolares se localizaron principalmente en un par cromosómico en posición terminal y asociadas a un bloque conspicuo de heterocromatina constitutiva; las excepciones fueron dos pares cromosómicos con NORs terminales en T. uruguayensis y la posición subterminal en A. balzanii. Las repeticiones teloméricas (TTAGG)n se localizaron exclusivamente en regiones terminales y permitieron el análisis detallado de la profase meiótica de machos y hembras. Los estudios poblacionales de T. confluens, T. bahiensis y T. argentinus permitieron proponer qué cromosomas estaban implicados en los rearreglos cromosómicos que originan los multivalentes, así como en las variaciones de los números diploides. La variabilidad cromosómica intraespecífica se debe principalmente a fusiones y, en menor grado, a translocaciones recíprocas. Los estudios citogenéticos pueden aportar datos para la delimitación y diagnosis de nuevas especies, como en T. uruguayensis y Tityus sp. 1. El estudio de una población de T. confluens permitió proponer que existirían cromosomas sexuales crípticos homomórficos XY/XX (macho/hembra), que en algunas especies se asociarían con la heterocigosis estructural en machos y la homocigosis estructural en hembras.

Los armadillos de la tribu Euphractini son un grupo de mamíferos xenartros, que se encuentran clasificados en 5 especies cuya distribución ocurre principalmente en la Argentina (salvo Euphractus sexcinctus). Por su condición filogenética basal en placentados, su biología requiere ser cuidadosamente revisada y estudiada. Se caracterizó citogeneticamente y desde el punto de vista reproductivo a Euphractini, para poder esclarecer posibles mecanismos de aislamiento reproductivo (MAR) acontecidos durante su historia evolutiva: 1). MAR post-cigóticos: mediante la caracterización citogenético-molecular de: 223 ejemplares (131 machos y 92 hembras) de Chaetophractus villosus, 2n=60 y NF=88; 103 ejemplares de Chaetophractus vellerosus, en sus dos distribuciones disyuntas, 2n=62 y NF 88-90 [48 ejemplares (28 machos y 20 hembras) de la distribución principal, incluyendo los márgenes de la misma, y 55 ejemplares (28 machos y 27 hembras) de la distribución secundaria]; 14 ejemplares (4 machos y 10 hembras) de Zaedyus pichiy, 2n=62 y NF=98; y 7 ejemplares (4 machos y 3 hembras) de E. sexcinctus, 2n=58 y NF=106. 2). MAR precigóticos: con el estudio de la morfología del tracto genital masculino en machos de Ch. villosus, y de la fisiología reproductiva, con estudio del ciclo reproductivo en machos de Ch. villosus y en hembras de Ch. villosus y Ch. vellerosus.