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Se describe un método original de extracción y cultivo de células hepáticas en suspensión. Fueron extraídas del hígado con una solución salina de tetrafenilboren de Na. y cultivadas con medio de cultivo preparado en el laboratorio, con solución salina balanceada de Hank, vitaminas y glucosa de Eagle y mezcla de aminoácidos MEM. Se suplementó con suero de ternero al 10% y antibióticos. Con la extracción se obtuvieron preferentemente hepatocitos. Se realizaron estudios sobre el crecimiento de la población celular, medido por el contaje de células y el contenido de ADN. Se determinó el tiempo de replicación celular usando colchicina. Se pudo comprobar que a través del tiempo de cultivo sobrevivían los hepatocitos, no encontrándose prácticamente otro tipo celular. Se probó el efecto del medio de cultivo para determinar diversas funciones: respiración celular, actividades enzimáticas, incorporación de aminoácidos en proteínas. Asimismo, se midió la producción de urea y glucógeno a través del tiempo de cultivo, comprobándose que estas dos funciones primordiales no se habían modificado. Con el objeto de verificar la posibilidad de utilizar el sistema para estudios hormonales y bioquímicos de regulación, se midió el efecto de dos hormonas, insulina y glucagón, sobre la respiración celular y la biosíntesis de glucógeno. Las células respondieron en la forma esperada. También se probó la hormona de crecimiento bovina sobre el incremento de la división celular, obteniéndose resultados positivos. Para estudiar bioquímicamente el proceso de desdiferenciación celular, se midieron diversas constantes bioquímicas de tres enzimas relacionadas con el metabolismo de los hidratos de carbono: glucosa 6-fosfatasa, pirofosfato inorgánico-glucosa fosfotrasferasa y pirofosfato-fosfohidrolasa. Estas tres acciones fueron atribuídas a una sola enzima multifuncional, afirmación que está en divergencia con los resultados obtenidos en este trabajo. Las tres enzimas tienen diferentes relaciones de disminución de actividad a través del tiempo de cultivo; además la actividad fosfotrasferasa está poco disminuída, con respecto a las otras dos, y se deduce de esto una tendencia a la fosforilación de la glucosa, no considerada como actividad glucoquinásica, ya que no existe insulina en el medio de cultivo. Midieron también las constantes de Michaelis y se determinó una disminución de la afinidad de la glucosa 6-fosfatasa por su sustrato, interpretándose como un mecanismo para prevenir la liberación de glucosa. Además se probó el efecto de la insulina sobre la actividad específica de la glucosa 6-fosfatasa y fosfotrasferasa y el efecto de la insulina y puromicina sobre la primera. A ese respecto se especula con la teoría de que las hormonas actúan como inductores o re­presores en términos bacterianos.

El objetivo del trabajo experimental de esta tesis ha sido tratar de delinear modelos experimentales para el estudio de la CIV en ratones normocomplementémicos y en ratones con deficiencia congénita de C5, así como en conejos normocomplementémicos y en conejos con deficiencia congénita de C6. El síndrome del CIV fue producido por la infusión lenta de TPL tisular. Los resultados obtenidos con los modelos utilizados, permiten sacar las siguientes conclusiones: Los ratones B10 D2 de la línea "new", normocomplementémicos, y de la línea "old", deficientes en C5, reaccionan con trombocitopenia ante la infusión de TPL homóloga y heteróloga. Esta trombocitopenia es máxima al finalizar la infusión y tiende a corregirse gradualmente. La TPL homóloga es más eficiente que la hereróloga y la respuesta trombocitopénica depende de la concentración de TPL utilizada.

Fil:Burgos, Enrique Miguel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Fil:Mochulsky, Marcos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

El objetivo del presente trabajo fue estudiar el catabolismo del alcaloide gramina en plantas de Hordeum vulgare (cebada). Dicho estudio implicó la síntesis de gramina marcada en distintas posiciones con isótopos de carbono e hidrógeno, y de otros compuestos indólicos relacionados, los cuales fueron utilizados en experiencias "in vivo" con plantas de cebada en desarrollo. Los productos sintetizados permitieron realizar un estudio detallado de los espectros de RMN-¹H y particularmente RMN-¹³C de indoles sustituidos. En esta tesis se desarrollaron los siguientes temas: 1. Introducción: donde se resumen las características que le confieren a ciertas moléculas el carácter de alcaloide; se describen las características de las plantas de cebada utilizadas, los alcaloides presentes en las mismas y en particular, la presencia de gramina y los estudios realizados por otros autores sobre su biosíntesis y catabolismo. Se mencionan además las propiedades biológicas de la gramina y se hace referencia a su posible función en el vegetal. 2. Síntesis de indoles isotópicamente marcados: Se describe la síntesis de los distintos trazadores, radiactivos o no, y de otros compuestos indólicos empleados en la elucidación del camino catabólico de gramins y en estudios espectroscópicos . Ellos fueron: gramina-α-14C , gramina-α-¹³C, gramina-2-14C, gramina-2-¹³C, gramina-6-²H, gramina-6-³H, indol-2-¹³C, indol-6-²H, indol-3-carboxaldehido-2-14C, indol-3-carboxaldehido-2-¹³C, indol-3-carboxaldehido-6-²H, ácido indol-3-carboxílico-2-14C, 3-(hidroximetil)-indol, 3-(aminometil)-indol, 3-(metilaminometil)-indol, 6-bromoindol, 6-bromogramina y 1-trimetilsililindol . En especial, se desarrolló una síntesis novedosa para la obtención de indoles marcados con deuterio o tritio en el anillo bencénico, la cual resultó superior en especificidad y rendimiento químico e isotópico, a las anteriormente conocidas. Se aclararon además algunas contradicciones halladas en la literatura sobre la aplicabilidad de modificaciones de la reacción de Madelung para la síntesis de indol isotópicamente marcado. 3. Experiencias con plantas de cebada:En este Capítulo se describen: a) Las condiciones utilizadas para el desarrollo de las plantas y el método de inoculación de trazadores en plantas de cebada intactas en desarrollo. b) Experiencias de degradación de gramina-α-14C donde se determinó la degradación del C-α a C02. c) Experiencias de degradación de gramina-2-14C, donde se determinó la degradación del C-2 a C02. d) Experiencias de degradación de gramina-α-¹³C y su seguimiento por RMN-¹³C e) Experiencias de competencia y captura utilizando gramina-α-14C y gramina-2-14C en conjunto con posibles catabolitos como indol-3-carboxaldehido, ácido indol-3-carboxílico o 3-(hidroximetil)-indol y triptofano, ácido N- formilantranílico o formiato, respectivamente. f) Experiencias de degradación de indol-3-carboxaldehido-2-14C y ácido indol-3-carboxílico-2-14C donde se determinó la reversibilidad de la conversión gramina indol- 3-carboxaldehido. g) Experiencias realizadas con tallos aislados de cebada. h) Experiencias de degradación de gramina-6-³H y de gramina-(6-³H, 2-14C), donde se determinó la degradación total del sistema aromático. En base a estos estudios se concluyó que el C-α de la cadena lateral de la gramina es degradado cuantitativamente a C02, mientras que el C-2 sería eliminado como formiato que en gran parte se oxidaría a C02 mientras el resto pasaría al reservorio de C-1 del organismo donde sería posteriormente metabolizado a una variedad de compuestos. Los pasos en esta degradación serían la desmetilación secuencial del grupo dimetilamino y transformación a indol-3-carboxaldehido a través de una transaminasa, siendo esta parte de la secuencia reversible y probablemente común con el proceso biosintético de la gramina. Posteriormente se produciría la oxidación irreversible a ácido indol-3-carboxílico, descarboxilación con pérdida de la cadena lateral y ruptura oxidativa del anillo pirrólico para dar ácido N-formilantranílico y finalmente ácido antranílico y formiato. Las experiencias com gramina-6-³H permitieron además determinar que el ácido antranílico intermediario era también rápidamente degradado oxidativamente, con eliminación del ³H de la posición 6 de la gramina como ³H2O. La reversibilidad de la conversión gramina indol-3-carboxaldehido es analizada desde el punto de vista de su implicancia en la biosíntesis de gramina, la cual no se encontraba completamente elucidada. 4. Andlisis espectroscópico: Los distintos compuestos indólicos sintetizados, y en particular la marcación con ²H y ¹³C, permitió estudiar exhaustivamente los espectros de RMN-¹H y RMN-¹³C de estos compuestos. En especial se reasignaron las resonancias de los carbonos 5 y 6 de indol y gramina y 4 y 6 de indol-3-carboxaldehido en sus espectros de RMN-¹³C, los cuales estaban mal asignados en literatura. Además, se determinaron los espectros de RMN-²H de los compuestos deuterados, los cuales permitieron también asignar inequívocamente las resonancias del H-6 en los espectros de RMN-¹H de los compuestos sintetizados. Se asignaron completamente los espectros de RMN-¹H de indol, indol-6-²H, 6-bromoindol , gramina-6-²H, 6-bromogramina e indol-3-carboxaldeido-6-²H. 5. Parte experimental: Se describe la parte experimental de la labor realizada, donde se detallan las síntesis realizadas, las técnicas extractivas, cromatográficas y espectroscópicas empleadas, las condiciones de crecimiento de las plantas y de adrninistración de trazadores .

Temas tratados: - Estudio y experiencias con el micro-electrodo de plata - Comportamiento del micro-electrodo de plata en soluciones de cloruros - Comportamiento del micro-electrodo de plata en soluciones de bromuros - Comportamiento del micro-electrodo de plata en soluciones de yoduros - Comportamiento del micro-electrodo de plata en soluciones de mezclas de halogenuros - Estudio de la conversión del BrAg en IAg - Estudio y experiencias con el micro-electrodo plano, de capa fina de mercurio - Comportamiento del micro-electrodo plano, de capa fina de mercurio en soluciones de plomo (II) - Comportamiento del micro-electrodo plano, de capa fina de mercurio en soluciones de plomo (II) - mercurio (II) -

La química de los hidratos de carbono se ha transformado en un significativo punto de unión entre la química orgánica, la química medicinal y la biología. Levoglucosenona es un carbohidrato generado de la pirólisis de material celulósico y constituye una unidad estructural enantioméricamente pura con un gran potencial para su transformación en diversos derivados quirales. En este trabajo de Tesis, se exploró la factibilidad de utilizar levoglucosenona como material de partida para la construcción del esqueleto carbonado de Herbarumin I, un potencial agente herbicida natural y en la síntesis de tioazúcares y sus posibles aplicaciones. En el Capítulo III se describen los avances alcanzados en la obtención del esqueleto carbonado de Herbarumin I lográndose datos relevantes sobre la reactividad de los precursores obtenidos y que han permitido plantear futuras pautas a tener en cuenta para su transformación química en la estructura carbonado deseado. En los Capítulos IV y V se presenta un estudio detallado de la reactividad de tioazúcares intermediarios y derivados oxiranos que han estimulado parte de este trabajo de investigación dado su interesante comportamiento químico observado y aportado datos al conocimiento científico de elevado interés teórico y experimental. Los resultados presentados en este trabajo aportan datos experimentales que amplian el campo de aplicación de tioazúcares en síntesis orgánica y en la obtención de compuestos enantioméricamente puros de alto valor agregado.

Fil:Galmarini, Oscar L.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.