Catálogo de publicaciones

Objetivos específicos de la tesis. • Contribuir al conocimiento de la situación epidemiológica de la queratoconjuntivitis infecciosa bovina en nuestro País, a partir de una apropiada caracterización de organismos de M. bovis aislados de lesiones oculares de animales enfermos provenientes de distintas regiones geográficas locales. • Establecer para la población en estudio su grado de diversidad en base a estudios de fingerprints de ADN y análisis de la expresión de componentes de cubierta celular como proteínas de membrana externa y lipopolisacáridos. Establecer el grado de variabilidad de cada componente en estudio (ADN, PME y LPS) en la población disponible y establecer relaciones con cepas de referencia. • Establecer el grado de estabilidad de la expresión de PME y LPS frente a los subcultivos. • Desarrollar una técnica de ELISA que permita la cuantificación del grado de piliación de suspensiones celulares de M. bovis. Esta prueba se consideraría de referencia para determinar piliación. • Aplicar el método desarrollado en el monitoreo de procesos de cultivos batch. • Analizar la influencia de las condiciones de cultivo en la expresión y estabilidad del fenotipo piliado de M. bovis. • Analizar la diversidad fenotípica dentro de la población disponible de M. bovis mediante técnicas espectroscópicas vibracionales y análisis de clusters. • Establecer correlaciones entre los resultados de la clasificación bacteriana derivada de la aplicación de métodos fisicoquímicos (FTIR), con los agrupamientos resultantes del empleo de fingerprinting de ADN (PCR) y perfiles de PME y LPS. • Intentar definir qué aislamientos locales serían adecuados para integrar una vacuna efectiva en la profilaxis contra QIB.

La agregación y la interacción entre individuos son componentes cruciales en la sociabilidad de las distintas especies de ungulados, que guardan relación con el éxito reproductivo a través de diversas variables tales como la presión de depredación, exposición a patógenos, la agresión, el éxito de forrajeo y la selección sexual, entre otros. Dentro de este diverso grupo, los camélidos sudamericanos son los herbívoros nativos de mayor distribución en Sudamérica y entre ellos, el guanaco (Lama guanicoe) presenta características interesantes para evaluar la sociabilidad. Esta especie posee una amplia flexibilidad adaptativa y éxito de colonización, debido a sus características anatómicas, etológicas y ecofisiológicas, que le permite adecuarse a distintos escenarios ecológicos y sociales. Esta tesis fue realizada en la Reserva Provincial de la Payunia (Mendoza) y presenta tres ejes principales: 1) analizar la densidad de la población y de los machos de guanaco en función de atributos ambientales y antrópicos, mediante la aplicación de Modelos de Densidad de Superficie; 2) estudiar los factores sociales y ecológicos que modulan el comportamiento agonístico en machos de guanacos a lo largo de la época reproductiva. Dentro de este eje, también se discute la dinámica de los sistemas de apareamiento y se generan nuevas hipótesis acerca de las estrategias reproductivas alternativas en guanacos; y 3) describir los mecanismos fisiológicos (mediados por cortisol y testosterona) que modulan el comportamiento agonístico en machos de guanacos, a partir de la aplicación de métodos no invasivos. Dentro de los principales resultados de esta tesis, se pueden destacar: 1) la productividad vegetal primaria y el riesgo de depredación influyen en la distribución de la población de guanacos y de los machos en particular; 2) La presencia, frecuencia y nivel de agresión de las interacciones agonísticas parecen estar más relacionadas con el tamaño del grupo que con las características ambientales. La duración del comportamiento agonístico fue mayor en ambientes mixtos (pastizal/arbustal), que estaría relacionado con una estrategia reproductiva en defensa de los recursos; 3) Las concentraciones de metabolitos fecales de cortisol y testosterona fueron mayores en el pico de la época reproductiva. La relación entre el comportamiento agonístico y la concentración de estas hormonas fue diferente dependiendo del tipo de variable respuesta analizada.Los aportes de esta tesis amplían el conocimiento biológico de base de las poblaciones naturales de guanacos y refuerzan los datos que demuestran el valor adaptativo de la especie a los ambientes donde habitan. En particular, se aportan nuevos datos biológicos intrínsecos a la especie y en relación con aspectos ambientales y antrópicos que permiten conocer con mayor profundidad e integración la dinámica social del guanaco y generan nueva información que sirve de herramienta para el manejo de esta especie.

Tesis (Doctor en Ciencias Agropecuarias)--UNC- Facultad de Ciencias Agropecuarias, 2015.

El objetivo de este trabajo de tesis doctoral fue generar conocimientos sobre aspectos ecológicos de las dos especies de garrapatas del complejo Amblyomma cajennense presentes en Argentina, Amblyomma tonelliae y Amblyomma sculptum, y también evaluar el rol potencial como vectores de microorganismos rickettsiales. La distribución geográfica de A. tonelliae en Argentina está restringida a la eco-región del Chaco Seco, y A. sculptum a la Selva Pedemontana de las Yungas, a la eco-región del Chaco húmedo y a zonas aledañas a los humedales del Chaco Seco. Estas dos especies presentan áreas de parapatria caracterizadas por temperaturas intermedias y mayor desarrollo de vegetación que en las áreas de alopatria. Ambas especies mostraron tener especificidad por hábitat y no por hospedador. El análisis de las secuencias del gen mitocondrial 16S, mostró diferencias intraespecífica inferiores a 0,5% y una baja diversidad genética tanto en A. sculptum como en A. tonelliae. Las dos especies presentaron estructuración genética entre poblaciones, atribuyéndose el limitado flujo de genes entre poblaciones a características ecológicas microambientales. Tanto A. tonelliae como A. sculptum tienen un ciclo de vida con una generación anual, con larvas presentes de otoño a invierno, ninfas de invierno a primavera y adultos todo el año, pero con el pico de abundancia en primavera y verano. Finalmente, se amplificó ADN rickettsial de tres garrapatas, Rickettsia amblyommatis sp. nov y Rickettsia sp. cepa “El tunal” de A. tonelliae y Rickettsia bellii de A. sculptum.

Entre el grupo de más de 200 especies de mamíferos silvestres americanos reconocidos como hospedadores de Trypanosoma cruzí, las tres especies que pertenecen al género Didelphis son las de distribución más extensa. Si bien son muy abundantes, no todas las especies han sido igualmente estudiadas y la mayoría de las menciones que de ellas se hacen son extrapolaciones de los conocimientos adquiridos para la especie que habita en América del Norte, Didelphis virgíníana. En 1984 se iniciaron estudios de infección en los bosques del departamento Moreno de la provincia de Santiago del Estero y se hallaron tres hospedadores silvestres del Trypanosoma cruzi: el hurón (Galictis cuja) infectado pero de abundancia escasa, el zorrino (Conepatus chinga) muy abundante pero infectado en bajas proporciones, y la comadreja overa (Didelphis albiventris) abundante e infectada en altas proporciones. A raíz de estos hallazgos, desde 1988 se están llevando acabo estudios poblacionales sobre de D.albiventrís asociados a la infección por T.cruzi y gran parte de los resultados se exponen y discuten en la presente tesis doctoral. Para entender la dinámica de T.cruzi en estos marsupiales hubo primero que estudiar algunos aspectos de la dinámica poblacional, por ejemplo: cuándo y cuántas veces se reproducen a lo largo de su vida, las variaciones en el crecimiento de los individuos asi como algún patrón confiable que permitiera asignar edades a cada individuo en cualquier época del año, las variaciones de abundancia estacionales y la asociación de toda esta información con las prevalencias de infección, complementando los estudios con seguimientos tanto en individuos natural como experimentalmente infectados. Se determinó que los didélfidos del área de estudio inician su temporada reproductiva hacia fines del invierno y que las hembras producen dos cohortes de aproximadamente 4,4 juveniles promedio cada una. El periodo de lactancia dura alrededor de 90-100 días, ocurriendo el primer destete a mediados de diciembre y el segundo a fines de marzo-principios de abril. La variable corporal que permitió asignar edades fue el patrón de erupción y desgaste dentario ya que las demás medidas tales como el peso y distintas longitudes eran muy variables. Se observó dimorfismo sexual solamente en el primer grupo de cohorte (G1), no así en el segundo grupo (G2) donde las diferencias entre machos y hembras no fueron significativas. Losjuveniles del G1 crecieron durante los meses de mayor productividad primaria mientras que los miembros del G2 lo hicieron durante los meses de condiciones más adversas: otoño e invierno. A fines del invierno, a pesar que los individuos de G2 no presentaban dentición completa, iniciaron el periodo de reproducción al igual que los individuos del G1. Este hecho sugiere que el inicio de la reproducción en D.albíventris estaría ligada a estímulos externos (condiciones ambientales como el fotoperiodo, la latitud, etc.). Los tiempos generacionales estimados resultaron ser de 57y 37 semanas para G1 y G2 respectivamente; las curvas de supervivencia sugieren una mortalidad constante para toda la población, y la longevidad máxima de los animales de vida libre no superó el año y medio. En cuanto a la proporción de sexos, se observó que a medida que avanzaba la temporada reproductiva disminuía la proporción de machos, alejándose de la relación l/l. Se siguieron también los desplazamientos de algunos individuos mediante dos técnicas: a) de hilo devanado, y b) captura, marcado y recaptura. Se observó que los desplazamientos promedio eran de 0-500 m, salvo un caso excepcional de una hembra que recorrió aproximadamente 8 Km. En base a las capturas manuales en las madrigueras, se observó que Didelphis albiventris no utiliza una misma madriguera de manera permanente y además se hallaron asociaciones entre juveniles o preadultos y de adultos con crías recién destetadas en un mismo refugio. Respecto a la infección por Trypanosoma cruzi, las prevalencias globales anuales observadas entre los años 1988 y 1991 se encontraron en el rango de 22,5 y 42,5%. Cuando se discriminó las mismas por estaciones climáticas para cada año de muestreo se observó un incremento significativo (p < 0,05) de los animales infectados desde el otoño (12,5 - 16,6%) hasta la primavera (33 - 67%). Una tendencia similar fue observada al analizar las prevalencias en función de las clases dentales de cada generación (0-8% en la clase dental I hasta 72 % en la VII). Cuando los datos se separaron por sexos también se observaron incrementos por estaciones y por edades, pero las hembras se encontraron siempre más infectadas que los machos. El conjunto global de todas las hembras mostraron prevalencias que se diferenciaron de modo altamente significativo (107/247: 43%) respecto de los machos (40/162 = 25%) (p < 0,01). Al comparar los grupos de cohortes, G1 mostró infecciones globales significativamente mayores (100/256: 39%) que G2 (28/1 l9= 23,5%) (p< 0,05). Los seguimientos de la infección a lo largo de la vida del animal demostraron que D. albiventris es capaz de mantener parasitemias persistentes durante toda su vida sin necesidad de reinfecciones. Se observaron dos tipos de infección: los animales que tenían una capacidad de infectar vectores (CI) "alta" (superior al 50%), y los de "baja" CI (menor del 40%); ambos grupos no cambiaron su CI durante el transcurso del seguimiento parasitológico efectuado. Sólo en dos casos de CI muy bajos (8 -22%%) los xenodiagnósticos resultaron negativos en dos ocasiones seguidas para un animal y en una ocasión para el otro, volviendo a positivizarse en los análisis subsiguientes. Los valores de CI globales fueron altos en todas las categorías dentales (54 - 77%) y en todas las estaciones climáticas (55 - 77%). Por otra parte, Didelphis albíventris fue capaz de infectarse en condiciones experimentales por ingestión (40%) de un número reducido de triatomíneos o por vía vectorial clásica (21%) a partir de muy pocos contactos infectivos demostrando una suceptibilidad mayor que la del hombre. Enestos experimentos las hembras se infectaron en proporciones significativamente superiores respecto de los machos (6/l2= 50% vs. l/12: 8%). Estos resultados concuerdan con las mayores prevalencias de campo encontradas para el mismo sexo. Finalmente se discuten las posibles vías de infección del T. cruzí en Didelphis albiventris en la zona y los puntos que faltarían aclarar en base a estas investigaciones y a estudios simultáneos de nuestro grupo. Cabe destacar que los triatominos silvestres del complejo Triatoma sordida T. guasayana presentes en la zona han demostrado prevalencias muy bajas (en el orden del 1%) y los perfiles alimentarios sobre marsupial también se mostraron bajos (aproximadamente el 5% de los triatominos contenian sangre de Didelphidae). Por otra parte los intentos de encontrar una posible vía directa de transmisión hasta el presente no permitieron corroborarla. La transmisión vertical de las madres muy infectadas a sus lactantes no pudo demostrarse. La búsqueda de flagelados en las glándulas perianales de individuos de lamisma población ha dado hasta el presente resultados negativos. Las observaciones realizadas en contadas ocasiones de contacto entre comadrejas positivas y negativas que compartieron la misma jaula por períodos de 2 a 5 días no han demostrado transmisión del parásito. Si bien el modo de transmisión hacia las comadrejas es todavía una gran incógnita, estos marsupiales han demostrado ser excelentes hospedadores de mantenimiento del T.cruzi y merecen la atención de futuras investigaciones.

Los bosques de Austrocedrus chilensis de la región Andinopatagónica constituyen un importante recurso forestal debido a la extensión que abarcan, la accesibilidad a los rodales, su alta productividad potencial y la muy buena calidad y diversidad de usos de su madera. Por esto, las intervenciones forestales de tipo extractivo constituyen una práctica común en los bosques puros y densos de esta especie. El objetivo general de esta tesis es contribuir al manejo sustentable de los bosques puros y densos de A. chilensis a través de la generación de información ecológica acerca de los efectos del manejo forestal sobre el suelo, la regeneración y la composición y estructura del sotobosque. El estudio se realizó en parcelas control y en parcelas con intervenciones forestales moderadas, ubicadas en cuatro sitios: Los Cipreses, Rodal 72 de Loma del Medio, Rodal 11 de Loma del Medio y El Guadal. Los suelos de los sitios estudiados son de origen volcánico (Andisoles), con variaciones en el nivel de fertilidad y régimen hídrico, dependiendo del tipo de material originario (cenizas o arenas volcánicas). Las intervenciones sólo alteraron i) algunos parámetros químicos y físico-químicos de fertilidad del suelo, en el sitio con suelo derivado de arenas volcánicas, de menor disponibilidad de nutrientes y agua, y ii) el régimen hídrico, en el sitio con fertilidad del suelo y densidad arbórea intermedia. Las modificaciones provocadas a nivel de micrositios dependieron del tipo y de la intensidad de las intervenciones. La combinación de raleos con remoción del sotobosque redujeron la cobertura de los musgos sobre el suelo, aumentaron la cobertura del sotobosque bajo y, cuando los raleos fueron más intensos, también la del sotobosque alto. El modo regenerativo de A. chilensis correspondió al de fase de claros a escala fina y el nicho regenerativo se asoció al dosel arbóreo intermedio o a pequeños claros, con baja abundancia de hojarasca de esta especie y alta cobertura de herbáceas y de musgos, durante el verano, y a alta cobertura de arbustos, durante el invierno. Las intervenciones afectaron las primeras etapas de la regeneración temprana pero no las últimas (plántulas con hojas diferenciadas). Los renovales de A. chilensis se asociaron, principalmente, a la cobertura de arbustos. El efecto sobre la abundancia de renovales (regeneración tardía) se circunscribió a las intervenciones con remoción del sotobosque. No se registraron efectos de las intervenciones sobre el crecimiento de renovales. Independientemente del tipo de intervención, no se registraron pérdidas de especies nativas en el sotobosque. Las parcelas en que sólo se implementaron raleos reflejaron la fisonomía y la composición específica del sotobosque precedente. En las parcelas con remoción del sotobosque y eventualmente poda, aumentó la cobertura, riqueza y diversidad de especies, principalmente por el ingreso de especies propias de ambientes próximos mas abiertos, se redujo la dominancia y aumentó la importancia de las codominantes. La información contenida en este estudio permitirá la toma de decisiones sobre el manejo forestal sustentable de bosques puros y densos de A. chilensis considerando el mantenimiento de su capacidad reproductiva y conservando la biodiversidad y la circulación de nutrientes.

Las Yungas del noroeste argentino han sido fuertemente afectadas por el desmonte de tierras prístinas, en particular de pedemonte, para el cultivo extensivo. El objetivo de esta tesis fue estudiar, a través de una cronosecuencia, el efecto del desmonte y el tiempo bajo uso agrícola sobre las comunidades microbianas del suelo (CMS) en una zona productiva de la región. El muestreo se realizó sobre tres fincas como réplicas independientes de cada categoría de uso: 0, 3-5, 11-14 y 28-30 años de cultivo. Se evaluaron aspectos estructurales y funcionales de las CMS, así como su resistencia y resiliencia al estrés hídrico. Luego de 3-5 años de cultivo se destacó una reducción en biomasa microbiana y funciones hidrolíticas (fosfatasa ácida y amonificación), y un incremento en respiración basal y cociente metabólico qCO2 (i.e., menor eficiencia metabólica). Asimismo, con PCR cuantitativo se detectó una reducción en la abundancia de metanótrofos totales y de tipo II. La mayoría de las variables se estabilizaron (biomasa, actividad hidrolítica) o restablecieron parcialmente (respiración, qCO2) a lo largo de la cronosecuencia. En respuesta al estrés hídrico impuesto, las CMS de larga historia agrícola presentaron la mayor resistencia y resiliencia en biomasa, estructura de ácidos grasos de los fosfolípidos y eficiencia metabólica. Por su parte, las CMS de monte de destacaron por su resiliencia en estos aspectos y mayor resistencia en la utilización de un sustrato recalcitrante, mientras que las de corta historia agrícola se mostraron en general más frágiles y variables. Los resultados sugieren que las CMS se alteran marcadamente con posterioridad al desmonte, en respuesta a cambios en la cobertura vegetal y a las labores ligadas a esta transición, en tanto que sucesivos años bajo el mismo manejo agrícola parecen inducir una homogeneización de las CMS junto con una adaptación a las condiciones impuestas por la agricultura.

El estudio de las alteraciones bioquímicas y hematimétricas que sufre la sangre entera (SE) durante su almacenamiento es un objetivo importante en Hematología. Conocer los cambios que experimentan células como los glóbulos rojos (GR) permite determinar los períodos máximos de estabilidad de la misma. Una de las maneras de prolongar el tiempo de conservación de la SE es mediante la estabilización de las membranas de las células. En 1991, fue propuesta por Reardon et al., una muestra de sangre entera estabilizada con una mezcla de glutaraldehído y formaldehído (SEE). En este Trabajo de Tesis se estudiaron parámetros hematimétrícos, morfológicos y bioquímicos en 12 lotes de SEE almacenada a 4°C midiendo diferentes variables, cada 10 días, por un período de 4 meses, con la finalidad de profundizar en el conocimiento de las alteraciones de dichos parámetros y definir los límites de estabilidad de los mismos.

El manitol, un azúcar-alcohol con múltiples aplicaciones industriales y en medicina, es producido por ciertas bacterias, hongos, levaduras y plantas. Algunas bacterias lácticas (BL) heterofermentativas son eficientes productoras de manitol, ya que pueden utilizar la fructosa como un aceptor de electrones alternativo y sintetizar manitol por una simple conversión enzimática mediante la enzima manitol deshidrogenasa (MDH), regenerando el NAD(P)+. En esta Tesis Doctoral se identificó y caracterizó el contexto genómico de los genes mdh en Lactobacillus reuteri CRL 1101, L. mucosae CRL 573 y Fructobacillus tropaeoli CRL 2034, tres BL heterofermentativas seleccionadas en nuestro laboratorio por su elevada producción de manitol. En la cepa CRL 2034, se localizaron y caracterizaron además tres genes que codifican para enzimas lactato deshidrogenasa (LDH), dos D-ldh (ldh1 y ldh2) y una L-ldh (ldh3), y se confirmó que esta especie carece de la actividad alcohol deshidrogenasa. Para evaluar la influencia de distintos genes en la biosíntesis de manitol, se generaron mutantes en mdh y en genes relacionados a mdh (gen per; putativa permeasa que forma un operón con mdh) o al balance redox celular (genes ldh). Los genes mdh, per, ldh1, ldh2 y ldh3 de la cepa CRL 2034 fueron mutados por recombinación con plásmidos integrativos construidos con el vector pRV300 (EmR) y un fragmento interno de cada gen, de aproximadamente 400 pb. Las diversas mutantes fueron confirmadas mediante secuenciación de 16S rADN y ensayos Rep-PCR, y la inserción correcta de los plásmidos recombinantes mediante amplificación y secuenciación por PCR. Finalmente, se comparó el crecimiento de CRL 2034 y de las mutantes en el medio FYP (20 % de glucosa y 40 % de fructosa) a pH libre, 30 °C y en condición estática o de agitación (200 r.p.m), y se determinaron los parámetros cinéticos (velocidad máxima de crecimiento y de acidificación), actividad MDH y LDH y producción de manitol. La mutante mdh no presentó actividad MDH, no produjo manitol y requirió de O2 para crecer, confirmando su incapacidad de utilizar fructosa como aceptor de electrones. La cepa ::ldh1 mostró aproximadamente el doble de actividad MDH (7,88 U/mg proteína) que la cepa original (CRL 2034 = 4,72U/mg proteína). El comportamiento de las mutantes ::ldh2, ::ldh3 y ::per fue similar a la de la cepa CRL 2034, no observándose diferencias significativas en sus respuestas a las condiciones evaluadas y en los parámetros determinados. A pesar de los mayores niveles de actividad MDH en la mutante ldh1, su producción de manitol fue similar a la observada en la cepa CRL 2034 a las 48 h, siendo los rendimientos de manitol (YM) de 84 y 88 %, respectivamente. Sin embargo, la producción específica de manitol por unidad formadora de colonia fue mayor en ::ldh1 (1,99 x10-8 mg/UFC) que en CRL 2034 (1,64 x10-8 mg/UFC) demostrando que la mutante es más eficiente para producir manitol, a pesar de su menor crecimiento.

Las amebas testáceas son organismos unicelulares ameboidales que se caracterizan por construir una teca rígida, constituida por elementos de diversa naturaleza; por la posesión de un seudostoma definido, a través del que se establece el contacto entre la célula y el medio ambiente; y por la presencia de seudópodos. La taxonomía de los géneros y especies se basa principalmente en la morfología y morfometría de las tecas. Sin embargo, presentan una enorme plasticidad de formas, con importantes variaciones morfológicas, aún dentro de una misma especie. En cuanto a su biología, se reproducen asexualmente por medio de fisión binaria; si bien algunos autores han observado estados meióticos en una especie en particular, al presente los aportes sobre el tema se estiman escasos y poco claros. En formas asociadas a hábitats con déficit de agua o sometidos a variaciones higrométricas, es frecuente la formación de quistes, en tanto en formas de agua dulce este proceso ha sido documentado en pocas especies. En la presente investigación se estudiaron aspectos ecológicos de tecamebianos asociados a la vegetación flotante en ambientes lénticos de las provincias de Chaco y Buenos Aires. Al mismo tiempo, se aislaron organismos para la realización de cultivos en laboratorio. En la provincia de Chaco, se realizaron relevamientos en dos oportunidades, octubre de 1997 y abril de 1998. Las zonas muestreadas fueron cuerpos de agua lénticos, con extensos manchones de vegetación flotante, ubicados en la planicie inundable de la margen derecha del río Paraná, localizados entre 27° 25’ y 27° 27’ S – 58° 45’ y 58° 52’ O. Se encontraron 25 especies de tecamebas en 1997 y un total de 19 especies en 1998.