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Caracterización de la resistencia extrema a infecciones por PVX en plantas y protoplastos de papa
María Verónica Saladrigas de Isenring Horacio Esteban Hopp
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Resumen/Descripción – provisto por el repositorio digital
El gen Rx acl confiere resistencia extrema a infecciones por la mayoria de las razas del virus X (excepto las razas MS y HB), a los cultivares de papa que lo poseen. En este trabajo, se caracterizó la reacción de resistencia extrema a infecciones por la raza avirulenta cp, del virus X de la papa, en protoplastos y plantas del cultivar de papa Serrana INTA,portador de ese gen. El análisis de la expresión celular de la resistencia extrema, requirió, en una primera etapa, la puesta a punto de un método eficiente y sincrónico de infección con PVX CP, de protoplastos de cultivares de papa susceptibles a este virus, relacionados o no genéticamente con Serrana INTA. La multiplicación viral en protoplastos susceptibles se siguió indirectamente a través de la detección de proteína de capside y ARN virales. En los protoplastos susceptibles, la producción de proteina de cápside y el ARN viral, detectados por ELISA o dot-blot, comienza a ser evidente a partir de las 10 horas de realizada la infección (aunque la sintesis de novo de la proteina de cápside viral comienza antes, a las 5 horas de realizada la infección). La producción de la proteina de cápside viral sigue una cinética exponencial y alcanza un plateau a las 30-40 horas de producida la infección. La cápside viral se encuentra asociada al citoplasma celular y no se detecta en cloroplastos. La multiplicación de PVX cp en protoplastos susceptibles no está asociada a daño y muerte celular, aunque como resultado de esta multiplicación, se observa una redirección en la sintesis de proteinas celulares del hospedante susceptible. Las infecciones con distinta concentración de inóculo viral, determinaron en todos los casos que la disminución de la concentración de inóculo viral, de l ng de PVX/pv a 0,01 ng PVX/pv, favorece la tasa de multiplicación viral en protoplastos susceptibles. Distintas infecciones de poblaciones de protoplastos del cultivar resistente Serrana INTA, en presencia de distintas concentraciones de inóculo viral, mostró que el mecanismo de resistencia puede expresarse a nivel celular, pero que esta expresión es dependiente del inóculo de infección. A altos inóculos (mayores de lO pg de PVX cp/pv), el virus X puede multiplicar en esa población celular, en forma equivalente a lo que lo hace en protoplastos susceptibles, pero a inóculos menores (10 pg de PVX cp o menos/pv), existe una inhibición en la multiplicación viral en forma directamente proporcional a la disminución de inóculo. La menor multiplicación viral se refleja en una menor producción de proteina de cápside y ARN viral. A nivel celular, la expresión de la resistencia extrema afectaría la expresión de (al menos) del gen de la proteína de cápside viral y/o la transcripción o replicación del ARN viral. El mecanismo de resistencia extrema también se analizó en hojas localmente inoculadas con la raza avirulenta cp del virus X y en partes no inoculadas de las plantas infectadas pertenecientes a Serrana INTA. La resistencia extrema determina en última instancia la multiplicación sistémica del virus X. En la hoja localmente inoculada, la resistencia extrema inhibe la formación de ARN viral de tamaño subgenómico, la formación de proteina de capside viral, y, en menor grado, la formación de ARN viral de tamaño genómico. En partes no inoculadas de plantas de Serrana INTA infectadas con PVX cp, trazas de ARN genómico, aunque no de ARN viral de tamaño subgenómico, y de proteina de cápside viral, pueden ser detectadas durante los primeros 20 dias de infección, pero ésta detección se dificulta a dias tardios (un mes de realizada la infección). La expresión de la resistencia en plantas infectadas de Serrana INTA con la raza cp de PVX no implica mayores variaciones en la población de ARNm del hospedante, tanto en hojas localmente inoculadas como en partes no inoculadas de plantas infectadas. Sin embargo, asociado a la incompatibilidad de interacción Serrana INTA-PVX cp, fue posible detectar en experimentos de traducción in vitro de ARNm total proveniente de hojas localmente inoculadas con PVX cp de Serrana INTA, la presencia de un polipéptido de 26,8 kda. Este polipeptido se detecta al cuarto dia de realizada la infección y no a días tardios (7 o más), o tempranos (dia 2). Existen importantes diferencias en el modo de acción del gen Rx acl con otros mecanismos de resistencia mejor caracterizados como ser la reacción de resistencia hipersensible. Estas son: l) La expresión celular de la resistencia extrema y desde tiempos tempranos de la infección. 2) La presencia de cápside y ARNg viral en las partes no inoculadas de plantas infectadas, en cantidades detectables a tiempos tempranos de la infección (aunque no a tiempos tardios como ser al mes de infección). 3) El requerimiento no absoluto de las conexiones celula a célula en la expresión de la resistencia de fenotipo extremo. 4) La no detección en tejido local y sistémico, de numerosas inducciones génicas especificas de resistencia extrema, tal como se observan en la expresión de la hipersensibilidad. Por último, las características resultantes de la interacción de protoplastos o plantas de Serrana INTA, con las razas avirulenta, cp y virulenta, MS de PVX (con respecto a ese gen), favorecen un modelo positivo de modo de acción de Rx acl (presencia de una molécula inhibitoria y no ausencia de susceptibilidad) y de dominancia incompleta (dependiente de la dosis de las moléculas inhibitorias).Palabras clave – provistas por el repositorio digital
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Disponibilidad
| Institución detectada | Año de publicación | Navegá | Descargá | Solicitá |
|---|---|---|---|---|
| No requiere | 1993 | Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) |
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Información
Tipo de recurso:
tesis
Idiomas de la publicación
- español castellano
País de edición
Argentina
Fecha de publicación
1993
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