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Título de Acceso Abierto
Replicación de plásmidos en Escherichia coli recBC sbcBC
Marina Bellani Carmen Sánchez Rivas
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Resumen/Descripción – provisto por el repositorio digital
Este trabajo estudia la replicación de plásmidos en Escherichia coli recBC sbcB sbcCD, un contexto Rec+, en el cual se amplifican procesos de recombinación que involucran intermediarios conteniendo extremos doble cadena (en función de la deficiencia en RecBCD). En este contexto genético, plásmidos con diversos origenes de replicación acumulan multimeros lineales de muy alto peso molecular denominados HMW Se re-evaluó el proceso de generación de multimeros HMW en el contexto recBC sbcBC, a la luz de los nuevos conceptos vigentes acerca de la interrelación replicación / recombinación. Durante la primer etapa del trabajo, se utilizó el sistema de recombinación especifico-de-sitio del transposón γδ para poner a punto un sistema de complementación regulable, que permitiera generar células conteniendo un mínimo porcentaje de multimeros, para analizar luego la síntesis de HMW a lo largo de la curva de crecimiento. Utilizando este sistema, se demostró que las células recBC sbcBCD pueden sintetizar multimeros del plásmido descontroladamente, durante las primeras horas de la fase estacionaria. La capacidad de replicar descontroladamente el plásmido durante la fase estacionaria está determinada por las condiciones de cultivo y depende en parte de la respuesta de fase estacionaria, gobernada por el regulador de la respuesta general al estrés σˢ. Una vez establecida la cinética de acumulación de HMW, se realizó un análisis genético para individualizar las funciones celulares involucradas en la síntesis de estos multímeros. Se analizó la incidencia de anular funciones de recombinación (RecA, RecF, RecR, LexA) y funciones involucradas en el re-inicio de la replicación sobre una horquilla restaurada (PriA, PriC, Rep), sobre la capacidad de las células de sintetizar HMW. La comprobación de que PriA resulta indispensable para la generación de HMW en un contexto RecBC- SbcBC-, constituye una evidencia de que la generación de HMW involucra el colapso de intermediarios normales de replicación del plásmido y el reinicio de la replicación por un mecanismo alternativo. En base a los resultados reportados, se proponen dos modelos para explicar el mecanismo de generación de HMW, que involucran el colapso de un intermediario de replicación y el restablecimiento de la replicación por un mecanismo de invasión/replicación entre multimeros lineales (similar al que utiliza T4 en su etapa tardía de replicación) o por un mecanismo de tipo círculo rodante (equivalente al utilizado por el fago ʎ para generar concatémeros).Palabras clave – provistas por el repositorio digital
ESCHERICHIA COLI; REPLICACION; RECOMBINACION; PLASMIDO; MULTIMEROS; PriA; GAMMA DELTA; REPLICATION; RECOMBINATION; PLASMID; MULTIMERS
Disponibilidad
| Institución detectada | Año de publicación | Navegá | Descargá | Solicitá |
|---|---|---|---|---|
| No requiere | 2002 | Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) |
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Información
Tipo de recurso:
tesis
Idiomas de la publicación
- español castellano
País de edición
Argentina
Fecha de publicación
2002
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