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Título de Acceso Abierto

Participación de los sistemas Notch y Wnt/ß-Catenina en la función y angiogénesis ovárica

Paula Lucía Accialini Marta Tesone

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Resumen/Descripción – provisto por el repositorio digital
El cuerpo lúteo (CL) es una glándula endócrina transitoria esencial para la supervivencia e implantación del embrión. Es por esto que su formación, función y regresión están estrictamente reguladas a través de diversas vías de señalización. En esta tesis se estudió el rol de los sistemas Notch y Wnt/β-catenina sobre el desarrollo y función del CL de ratas. También se analizó la interacción de ambas vías con la acción de la progesterona. El primer capítulo de esta tesis se diseñó con el objetivo de estudiar la acción in vitro del sistema Notch y su interacción con progesterona en cultivo de cuerpo lúteo de rata. Se utilizaron ratas prepúberes inyectadas de forma subcutánea con eCG y 48 horas después con hCG. Cuatro días después, los animales sufrieron eutanasia. Se aislaron los CLs y se cultivaron en presencia de Aminoglutetimida (AG, inhibidor de la síntesis de progesterona), DAPT (inhibidor del sistema Notch), progesterona, de DAPT en presencia de progesterona, o vehículo de las drogas (DMSO). Luego de una o 4 horas de cultivo, se recolectaron los CLs y los medios condicionados. Se estudió la funcionalidad luteal midiendo la concentración de progesterona en el medio. Se evaluó la participación del sistema Notch y de progesterona en cuanto al contenido de proteínas pro- y anti-apoptóticas, regulación de las enzimas esteroidogénicas, contenido de PCNA (marcador de proliferación) y nivel de fosforilación de AKT y ERK. DAPT produjo una disminución de la producción de progesterona. A su vez se observó una disminución en el contenido luteal de la enzima P450scc. La presencia de progesterona en el medio de cultivo aumentó los niveles de StAR, efecto que fue impedido al inhibir la vía de Notch. El cultivo con DAPT produjo un aumento de la relación entre proteínas pro:anti-apoptóticas y un aumento del fragmento activo de caspasa 3. Este aumento en la apoptosis fue revertido con la presencia de progesterona en el medio de cultivo. Para determinar la proliferación de células del CL, se cuantificó el contenido de PCNA. Progesterona incrementó significativamente los niveles de PCNA, y este aumento fue impedido por DAPT. Además, DAPT disminuyó la fosforilación de AKT, la cual se restituyó con la incubación junto a progesterona. Los resultados de este capítulo muestran por primera vez la existencia de una interacción entre Notch y progesterona que promueve la función y supervivencia del CL. El segundo capítulo de esta tesis se diseñó con el objetivo de estudiar la implicancia de la vía Wnt/β-catenina en la función del ovario de ratas superovuladas. Se utilizaron ratas prepúberes inyectadas de forma subcutánea con eCG y 48 horas después con hCG, día en que los animales fueron operados. A un grupo se le administró bajo la bursa de ambos ovarios un inhibidor específico de la vía Wnt/β-catenina (XAV939), mientras que el grupo control recibió la dosis equivalente del vehículo del inhibidor (DMSO). Lo animales sufrieron eutanasia 24 o 48 horas luego de la cirugía. Se estudió el desarrollo folicular y la formación de CL en ovarios de cada grupo experimental y se evaluó también la concentración de progesterona sérica. En extracto proteico de CLs se midió el contenido de proteínas pro- y anti-apoptóticas, de enzimas esteroidogénicas y de PCNA. Además, se determinó el grado de fosforilación de las proteínas AKT y ERK. Por último, se cuantificaron los niveles de VEGF luteal y se estudió el desarrollo vascular del CL mediante marcación con lectina BS-1. La inhibición in vivo de la vía Wnt/β-catenina produjo una disminución en el porcentaje de CLs, efecto que estuvo acompañado por la aparición de estructuras quísticas. La concentración de progesterona sérica disminuyó en los animales tratados con XAV939, como así también el contenido luteal de la proteína StAR. La administración de XAV939 aumentó el balance entre proteínas pro:anti-apoptóticas, incrementando la apoptosis en células del CL. A su vez, XAV939 disminuyó los niveles de ERK fosforilado y el contenido de PCNA en CL. Además, la inhibición de la vía Wnt/β- catenina disminuyó el porcentaje de área endotelial en CL y redujo el contenido luteal de VEGF. La doble marcación para PCNA y lectina reveló que la mayoría de las células proliferativas son las endoteliales. Estos resultados demuestran por primera vez que la vía Wnt/β-catenina está involucrada en el proceso de ovulación y funcionalidad luteal de ratas prepúberes tratadas con gonadotrofinas. El tercer capítulo de esta tesis se diseñó con el objetivo de estudiar la acción in vitro del sistema Wnt/ß-catenina sobre la expresión de miembros del sistema Notch. Se utilizaron ratas prepúberes inyectadas de forma subcutánea con eCG y 48 horas después con hCG. Dos días luego de la administración de hCG, los animales sufrieron eutanasia. Se aislaron los CLs y se cultivaron en presencia de ICG-001 o solución vehículo (DMSO). El ICG-001 es un inhibidor de la vía de Wnt/β-catenina con un mecanismo de acción distinto al de XAV939. Luego de 12 horas de cultivo, se recolectaron los CLs y los medios condicionados. Se estudió la funcionalidad luteal midiendo la concentración de progesterona en el medio. En extractos de ARN de CLs se estudió la expresión de miembros del sistema Notch, y en extractos proteicos se midió el contenido de la proteína StAR. ICG-001 disminuyó la producción de progesterona y el contenido de la proteína StAR, reproduciendo el resultado observado con XAV939 en el capítulo II. Además, la inhibición de la vía Wnt/β-catenina produjo un aumento de la expresión génica del receptor notch1, del ligando jagged1, del efector hes1 y del regulador rbpjκ. Los resultados de este capítulo muestran que, ante la inhibición de Wnt/β-catenina, las células del CL promueven la activación de la vía de Notch, posiblemente como mecanismo compensatorio para recuperar la homeostasis celular. Los resultados de esta tesis demuestran que los sistemas Notch y Wnt/β-catenina están implicados en la regulación del desarrollo y función del CL de rata. A su vez, revelan la existencia de una interacción entre estas vías y la progesterona que promueve la funcionalidad luteal.
Palabras clave – provistas por el repositorio digital

CUERPO LUTEO; NOTCH; PROGESTERONA; WNT/ß-CATENINA; ESTEROIDOGENESIS; ANGIOGENESIS; CORPUS LUTEUM; PROGESTERONE; WNT/ß-CATENIN; TEROIDOGENESIS

Disponibilidad
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No requiere 2018 Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) acceso abierto

Información

Tipo de recurso:

tesis

Idiomas de la publicación

  • español castellano

País de edición

Argentina

Fecha de publicación

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https://creativecommons.org/licenses/by/2.5/ar/