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Modulación del infiltrado inflamatorio en el desarrollo tumoral: efecto de citoquinas y estudio de la angiogénesis
Silvina N. Gazzaniga Rosa Wainstok José Mordoh
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Resumen/Descripción – provisto por el repositorio digital
Existen evidencias que tanto las células endoteliales presentes en la vasculatura de un tumor como las propias células tumorales liberan factores que promueven la mutua proliferación. Asimismo, los leucocitos que llegan al sitio tumoral atraídos por estímulos quimiotácticos pueden contribuir de manera importante a la progresión o regresión del tumor, lo que pone de manifiesto un alto grado de dependencia entre estos tres grupos celulares. El objetivo de este trabajo de Tesis fue investigar la interrelación entre las células endoteliales (CE) y las células inflamatorias responsables de la inmunidad innata en el desarrollo tumoral. Para ello, se estudió el desarrollo de la neovascularización en tumores mamarios murinos de distinto comportamiento biológico, observándose que el tipo histológico (lobulillar o ductal) no guarda relación con ningún perfil angiogéníco particular. Sin embargo, se encontró que la tasa de crecimiento y la capacidad de producir metástasis están acompañadas por un desarrollo microvascular más activo. Esto evidencia un comportamiento de valor pronóstico como lo observado para tumores humanos y destaca la utilidad del anticuerpo monoclonal MEC 13.3 anti-CD31. Este mismo anticuerpo se utilizó acoplado a esferas inmunomagnéticas para el aislamiento de CE de tejidos normales y neoplásicos con el objeto de establecer líneas que permitan estudiar la heterogeneidad fenotípica y funcional de las CE. Si bien no se logró reproducir el microambiente tumoral en cultivo para perpetuar el crecimiento in vitro de las CE derivada de tumores, se logró establecer una línea de CE derivadas de tejido normal renal. Características como la expresión de CD31, moléculas de adhesión como VCAM-1, ICAM-1 y ELAM-1, expresión del factor de von Willebrand, la captación con avidez de LDL acetílado y la sensibilidad a Shigatoxina-1 (13-20%) definen el perfil de la que es hasta el presente la primera línea descripta de endotelio microvascular renal murino. La vasculatura no sólo provee perfusión de oxígeno y nutrientes al tumor, sino que permite la llegada y extravasación de células inflamatorias que según sus características pueden tener efectos positivos o negativos en el desarrollo tumoral. Con el objeto de estudiar y modular el aflujo de células inflamatorias al tumor, se analizó si la generación de necrosis por crioterapia en melanomas, a partir del daño producido en las células tumorales, podría inducir la llegada de células inflamatorias al sitio y particularmente de células presentadoras de antígenos. Se encontró que la inducción de necrosis por crioterapia (77-100% de la masa tumoral) en melanomas humanos (IIB-MEL-J) crecidos en ratones nude produjo activación temprana del endotelio y una rápida llegada de células polimorfonucleares (PMN) al sitio tumoral, seguidos del reclutamiento más tardío de macrófagos que persistieron hasta 15 días después del tratamiento. Estas manifestaciones condujeron a la formación de un infiltrado peritumoral muy importante pero sin infiltración intratumoral. La administración intralesional de una dosis de 500U de la citoquina GM-CSF aumentó el infiltrado intratumoral de macrófagos y PMN post tratamiento. El aumento en el número de células dendríticas (DEC205+) y su movilización a capas más profundas de la dermis cercanas a las zonas peritumorales, además de la formación de anticuerpos sugieren que la necrosis inducida con la crioterapia y la adyuvancia con GMCSF pueden resultar una estrategia útil para aumentar el infiltrado intratumoral. Lograr la llegada de células presentadoras de antígenos DEC 205+ y macrófagos F4/80+ al tumor podría contribuir a captar los antígenos liberados durante la necrosis para ser llevados a los ganglios cercanos para la presentación antigénica. A las 4 hs de la administración de GM-CSF, la citoquina es retenida en el tumor cuatro veces más que la inyectada subcutáneamente, lo que podría contribuir al reclutamiento intratumoral observado. El melanoma utilizado en estos estudios secreta cantidades no detectables (inferiores a 12 pg/ml) de la quemoquina MCP-1 (monocyte chemotactic protein), una de las principales responsables de conducir a la formación de infiltrados monocito/macrofágicos en tumores. En biopsias de melanomas metastásicos humanos encontramos que 100% de ellos producen MCP-1 con variada intensidad de expresión y número de células positivas. La intensidad de expresión se correlacionó con la vascularización, sugiriendo un efecto directo de la quemoquina sobre la angiogénesis. La presencia de importantes focos de macrófagos infiltrantes dentro del tumor se encontró particularmente asociada a áreas de activa angiogénesis pero no asociado a estructuras vasculares de gran calibre. Esto podría ser un indicio de la ruta de extravasación de los macrófagos frente al estimulo quimiotáctico o a un efecto proangiogénico de los macrófagos reclutados. Para disponer de un modelo que nos permita estudiar mejor el rol de los macrófagos infiltrantes al tumor, se transfectó la línea IIB-MEL-J con el cDNA correspondiente al MCP-1 humano, obteniéndose así una línea que produce 940 pg/ml/10^6 células/48 hs. Las células transfectadas son de menor tamaño, mayor capacidad migratoria frente a medios condicionados ricos en componente de matriz, menor adhesión al endotelio y no presentan diferencias en la tasa de crecimiento in vitro. Los tumores producidos por inyección subcutánea de las células productoras presentan un infiltrado de macrófagos tanto intra como peritumoral significativamente mayor que los tumores parentales, hasta 30 días de la inoculación de las células. Sin embargo, son similares en tamaño a los originados por la línea parental, lo que sugeriría que, a diferencia de otros modelos experimentales, la presencia de macrófagos es necesaria pero no suficiente para inducir regresión, para la cual se requeriría de la respuesta efectora, ausente en ratones nude. Por lo tanto, hemos generado un modelo muy interesante que nos permitirá continuar con el estudio del rol de los macrófagos y extrapolar los ensayos de modulación del infiltrado con GM-CSF en tumores productores de MCP-1.Palabras clave – provistas por el repositorio digital
INFILTRADO INFLAMATORIO; GM-CSF; NECROSIS; MCP-1; MACROFAGOS; ANGIOGENESIS; CELULAS ENDOTELIALES; INMMATORY INFILTRATE; MACROPHAGES; ANGIOGENSIS; ENDOTHELIAL CELLS
Disponibilidad
| Institución detectada | Año de publicación | Navegá | Descargá | Solicitá |
|---|---|---|---|---|
| No requiere | 2003 | Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) |
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Información
Tipo de recurso:
tesis
Idiomas de la publicación
- español castellano
País de edición
Argentina
Fecha de publicación
2003
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