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Metabolismo de poliaminas en tripanosomátidos: Ornitina decarboxilasa de Leishmania mexicana
Cecilia Palmira Sanchez Israel D. Algranati
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Resumen/Descripción – provisto por el repositorio digital
Las poliaminas son compuestos esenciales para el crecimiento y la proliferación celular: por este motivo se realizan grandes esfuerzos para la búsqueda de inhibidores selectivos de la biosíntesis de estas sustancias con el objeto de detener el crecimiento de células tumorales, así como de los microorganismos causantes de infecciones. Estudios recientes han propuesto el empleo de inhibidores de la biosíntesis de putrescina como una herramienta terapéutica útil para controlar el crecimiento de parásitos intracelulares. Por esta razón se decidió estudiar el metabolismo de poliaminas en Trypanosoma cruzi y Leishmania mexicana con el fin de encontrar diferencias en la biosíntesis de estos policationes entre el protozoo y la célula del mamífero huesped con el objeto de encontrar blancos específicos que al ser inhibidos determinen el bloqueo de la proliferación permitiendo desarrollar nuevas estrategias quimioterápicas contra el Mal de Chagas y la Leishmaniasis. Se ha observado que los niveles intracelulares de poliaminas en T.cruzi en su forma epimastigote correlacionan con la fase de crecimiento. La putrescina, espermidina, espermina y cadaverina alcanzan los valores máximos en la etapa logarítmica y luego disminuyen hacia la fase estacionaria de crecimiento. En L. mexicana se observó un resultado similar pero en este parásito sólo se detectó putrescina y espermidina. La captación de poliaminas y sus probables precursores (ornitina, arginina y lisina) por T. cruzi y L. mexicana, como la conversión in vivo de dichos aminoácidos en poliaminas sugieren que en los tripanosomas la mayor parte de estas sustancias son transportadas al interior de las células desde el medio externo, mientras que en Laishmania parece prevalecer la biosíntesis de los policationes a partir de ornitina. Se determinó que los extractos de L. mexicana poseen una alta actividad de Ornitina decarboxilasa (ODC). Se caracterizaron los requerimientos para la máxima actividad catalítica, así como diferentes propiedades de la enzima en relación a su estructura y la regulación de su actividad. La adición de cicloheximida y de poliaminas a los cultivos mostraron que la ODC de L. mexicana es estable y que su degradación no es regulada por poliaminas. La ODC es inhibida tanto in vivo como in vitro por la adición de a DFMO. Se observó que la actividad enzimática es fuertemente dependiente de la presencia de su coenzima, el piridoxal 5'-fosfato. La enzima preparada en presencia de concentraciones saturantes de PLP es más resistente a la inactivación por efecto de la temperatura y es menos sensible a la acción de inhibidores. Por otra parte, se observó que la enzima obtenida en ausencia del cofactor contiene PLP endógeno, ya que la remoción total de la coenzima por tratamiento con hidroxilamina produce la apoenzima inactiva, la cual requiere PLP para recobrar su actividad enzimática mediante una unión que parece inducir cambios conformacionales de la proteína. Probablemente, la ODC no presenta homología estructural en sus regiones antigénicas con la enzima aislada de células animales, ya que no se observó reacción cruzada cuando se inmunoprecipitó la OCD del parásito con un anticuerpo policlonal contra ODC de riñón de ratón. La enzima se purificó parcialmente a partir de promastigotes de L. mexicana mediante la precipitación con acetona y cromatografías de intercambio iónico en DEAE Sepharosa, de hidroboficidad en Phenyl Superosa, de exclusión molecular en Superosa 6 y en fase reversa con una columna C4, lográndose una purificación de 2300 veces. Los análisis en geles desnaturalizantcs de poliacrilamida y de cromatografía en Sephacryl S-200 indican que la subunidad proteica o el principal producto de su proteólisis tendría un peso molecular aparente de 60 kDa, mientras que el de la proteína nativa sería de aproximadamente 200 kDa. listos resultados sugirirían que la ODC estaría formada por tres o cuatro subunidades.Palabras clave – provistas por el repositorio digital
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Disponibilidad
| Institución detectada | Año de publicación | Navegá | Descargá | Solicitá |
|---|---|---|---|---|
| No requiere | 1993 | Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) |
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Información
Tipo de recurso:
tesis
Idiomas de la publicación
- español castellano
País de edición
Argentina
Fecha de publicación
1993
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