Catálogo de publicaciones

El virus Herpes simplex (HSV) es responsable de una variedad de manifestaciones clínicas desde ulceras oro-faciales y genitales hasta encefalitis y alteraciones respiratorias. Los síntomas son usualmente autolimitantes pero pueden ser extensivos y prolongados en individuos inmunocomprometidos. En estos casos, puede requerirse una larga terapia antiviral, lo que resulta en la generación de virus resistentes a las drogas como el aciclovir (ACV). El HSV ingresa a las células mediante una interacción primaria entre las glicoproteínas virales y el heparán sulfato (HS), molécula presente en la superficie celular y en la matriz celular. Los carragenanos (CGNs) son polisacáridos sulfatados derivados de algas rojas cuya estructura es similar a la del HS. Ellos actúan como inhibidores potentes y selectivos de HSV, al bloquear la interacción de virus con su receptor primario en la etapa de adsorción viral. En estudios previos realizados en nuestro laboratorio se seleccionaron y caracterizaron variantes virales de HSV-1 cepa F. Éstas fueron obtenidas bajo presión de selección con un CGN natural μ/n denominado 1C3 de estructura relacionada con los CGNs kappa (k) e iota (ɩ)-(1C3syn14-1 y 1C3syn17-2). A fin de evaluar la reproducibilidad del método utilizado para generar las variantes virales se realizaron pasajes seriados de HSV-1 cepa KOS en células Vero en presencia de concentraciones crecientes de CGN ɩ o heparina (H). Se seleccionaron 4 clones, ɩ16-6, ɩ16-11, H17-5 y H17-16, los cuales exhibieron características similares en: resistencia relativa al compuesto usado durante el tratamiento selectivo y al ACV, al igual que su curva de replicación viral. Además, fueron menos virulentos que la cepa patrón en ratones BALB/c por inoculación intravaginal pero no por vía intranasal, a excepción de la variante ɩ16-11 que fue atenuada por ambas vías. Por otro lado, se profundizó el estudio de la caracterización citopática y patogénica de las variantes virales, derivadas de HSV-1 F, en mucosa respiratoria. Se demostró la activa participación de los macrófagos como protagonistas en la patología viral y se la correlacionó con la menor activación de citoquinas inflamatorias (TNF-α, IL-6) en relación con la cepa control. Alteraciones puntuales detectadas en el gen de la glicoproteína D de las variantes virales podrían ser parte responsable de la liberación disminuida de citoquinas proinflamatorias. Mientras que las moléculas de adhesión VCAM e ICAM no se vieron afectadas. Por otro lado se mostró, que el procedimiento empleado usando CGNs permitió la selección y/o modificación de los genes de la Timidina Quinasa y la ADN polimerasa sin alterar la resistencia viral al ACV. El conjunto de estos resultados indican que la regulación de los niveles de las citoquinas TNF-α e IL-6 juega un rol importante en la patología respiratoria de HSV y además que el método utilizado de obtención de las variantes permite la selección de virus con características estables. Estos resultados contribuyen a la caracterización de las variantes virales con el objetivo de profundizar los conocimientos de la respuesta inflamatoria en el tracto respiratorio luego de una infección por HSV. Palabras Claves: virus Herpes simplex, Carragenanos, variantes virales, atenuación, inmunopatología.

PPARg es miembro de la superfamilia de receptores nucleares que son factores de transcripción activados por su ligando. BCG es el tratamiento de elección para el cáncer devejiga (CaV) que no invade músculo. Nos propusimos estudiar el rol de éste receptor bajo el tratamiento de BCG en ésta patología. Encontramos que BCG es capaz de inducir la expresión de PPARg en células de CaV murinas, MB49 y los ligandos de PPARg potencian este efecto. La actividad transcripcional de PPARg también es aumentada por BCG y potenciada por 15-d-PGJ2, ligando de PPARg. Al mismo tiempo BCG induce en las líneas de CaV la expresión de iNOS y la consecuente producción de óxido nítrico (NO). Los ligandos de PPARg inhibirían la producción de NO inducida por BCG, por un mecanismo PPARg independiente pero dependiente de la vía de NF-kB. In vivo, BCG inhibe el crecimiento de tumores, efecto bloqueado por BADGE, antagonista de PPARg indicando que parte del mecanismo de acción de BCG es a través de PPARg. BCG induce la expresión de colágeno, SMA-alfa y FGF-2, al mismo tiempo induce la proliferación de los fibroblastos in vitro. RO revierte el efecto inhibitorio ejercido por BCG, inhibiendo diferentes funciones de macrófagos y fibroblastos. BCG media su mecanismo de acción antitumoral, en parte, a través de PPARg pero su activación in vivo con agonistas exógenos puede ser contraproducente dado su funcionalidad en el sistema inmune. Obtuvimos una nueva línea celular, MB49-I y desarrollamos un modelo murino ortotópico con distinto grado de invasión. Al evaluar la expresión de PPARg en éste modelo, observamos que PPARg está aumentado en tumores superficiales comparado con la vejiga normal, mientras que se pierde en vejigas portadoras de tumor invasor. En tumores vesicales de pacientes observamos que un mayor número de pacientes con tumores invasores expresa bajos niveles de PPARg comparado con aquellos pacientes con tumores no invasores, sugiriendo que PPARg podría estar involucrado en la progresión de tumores de vejiga.

Tesis (Grado Doctor en Ciencias Biológicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales. Lugar de Trabajo: Laboratorio de Neurofarmacología. Facultad de Ciencias Químicas-UCC-IIByT-CONICET-Universidad Nacional de Córdoba. 2015 - 115 h. + CD. tabls.; grafs.; figuras. Contiene Referencia Bibliográfica y Publicaciones Derivadas de la Tesis. Abstract en español e inglés.

Tesis (Doctor en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2021

La reproducción es uno de los procesos fisiológicos con mayor costo energético, tal es así que los mecanismos fisiológicos que controlan el balance energético se hallan ligados a la fertilidad. Existen múltiples endocrinopatías asociadas a desbalances metabólicos, entre ellas el Síndrome de Ovario Poliquístico (SOP). Esta es una de las patologías más frecuentes en mujeres en edad reproductiva y cuya alteración principal es el hiperandrogenismo. Estas pacientes presentan alteraciones en la foliculogénesis temprana dado que, por mecanismos aun no conocidos, no ocurre la selección de folículos dominantes. Con el propósito de dilucidar estos mecanismos, en el laboratorio se ha generado un modelo murino de hiperandrogenización con dehidroepiandrosterona (DHEA) para el estudio del desarrollo folicular temprano. El objetivo principal de este trabajo es evaluar si “es el exceso de andrógenos durante la vida peripuberal el que genera alteraciones en la funcionalidad ovárica” y “cuál es el rol de los receptores nucleares activados por proliferadores peroxisomales de tipo γ (PPARγ) en esta alteración”. En el presente trabajo encontramos que el estímulo con eCG indujo un aumento en el número de folículos, disminuyendo la atresia folicular de manera controlada, sin alterar los procesos apoptóticos. Por otro lado, el aumento en los niveles de progesterona sérica (P4), indica la capacidad esteroidogénica de estos ovarios, permitiéndonos estudiar los efectos del hiperandrogenismo sobre las primeras etapas de la foliculogénesis y la regulación de la esteroidogénesis. En ovarios provenientes de animales hiperandrogenizados, encontramos un aumento en la expresión de proteínas fundamentales, como StAR, mientras que otras enzimas reguladoras, como P450scc, se encuentran disminuídas. Esta alteración provocó una disminución en la producción de P4, generando un efecto deletéreo en estos folículos. Los PPARγ actuarían como factores de transcripción, regulando la expresión de estas enzimas y estimulando la producción de P4 en las primeras etapas de la foliculogénesis, pero no siendo capaz de hacerlo en un ambiente hiperandrogénico. En estas condiciones, se produce un desbalance oxidativo en donde el GSHt es consumido rápidamente generándose daño a lípidos, lo cual alteraría la estructura de las membranas, provocando que las células no respondan correctamente al ambiente que las rodea, y entrando en un estado proapoptótico. De esta manera, el folículo entra en atresia.

La reproducción es uno de los procesos fisiológicos con mayor costo energético, tal es así que los mecanismos fisiológicos que controlan el balance energético se hallan ligados a la fertilidad. Existen múltiples endocrinopatías asociadas a desbalances metabólicos, entre ellas el Síndrome de Ovario Poliquístico (SOP). Esta es una de las patologías más frecuentes en mujeres en edad reproductiva y cuya alteración principal es el hiperandrogenismo. Estas pacientes presentan alteraciones en la foliculogénesis temprana dado que, por mecanismos aun no conocidos, no ocurre la selección de folículos dominantes. Con el propósito de dilucidar estos mecanismos, en el laboratorio se ha generado un modelo murino de hiperandrogenización con dehidroepiandrosterona (DHEA) para el estudio del desarrollo folicular temprano. El objetivo principal de este trabajo es evaluar si “es el exceso de andrógenos durante la vida peripuberal el que genera alteraciones en la funcionalidad ovárica” y “cuál es el rol de los receptores nucleares activados por proliferadores peroxisomales de tipo γ (PPARγ) en esta alteración”. En el presente trabajo encontramos que el estímulo con eCG indujo un aumento en el número de folículos, disminuyendo la atresia folicular de manera controlada, sin alterar los procesos apoptóticos. Por otro lado, el aumento en los niveles de progesterona sérica (P4), indica la capacidad esteroidogénica de estos ovarios, permitiéndonos estudiar los efectos del hiperandrogenismo sobre las primeras etapas de la foliculogénesis y la regulación de la esteroidogénesis. En ovarios provenientes de animales hiperandrogenizados, encontramos un aumento en la expresión de proteínas fundamentales, como StAR, mientras que otras enzimas reguladoras, como P450scc, se encuentran disminuídas. Esta alteración provocó una disminución en la producción de P4, generando un efecto deletéreo en estos folículos. Los PPARγ actuarían como factores de transcripción, regulando la expresión de estas enzimas y estimulando la producción de P4 en las primeras etapas de la foliculogénesis, pero no siendo capaz de hacerlo en un ambiente hiperandrogénico. En estas condiciones, se produce un desbalance oxidativo en donde el GSHt es consumido rápidamente generándose daño a lípidos, lo cual alteraría la estructura de las membranas, provocando que las células no respondan correctamente al ambiente que las rodea, y entrando en un estado proapoptótico. De esta manera, el folículo entra en atresia.

Tesis (Doctora En Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2020

Tesis para obtener el grado de Magister en Gestión Ambiental, de la Universidad Nacional de Misiones, en marzo de 2017

El desarrollo de la glándula mamaria es un proceso complejo de múltiples etapas. Del embarazo a la lactancia, el crecimiento lóbulo-alveolar es seguido por la diferenciación completa del epitelio mamario, responsable de la producción y secreción de leche. Al destete se produce un cambio rápido en la señalización de supervivencia a muerte celular que involucra la expresión y actividad de factores pro-inflamatorios. El control de la vida media del ARNm juega un papel central en el desarrollo normal y la enfermedad: varias condiciones patológicas, como la inflamación y el cáncer, se encuentran fuertemente correlacionadas con la desregulación en la estabilidad del mRNA de genes proinflamatorios. Durante la inflamación, TTP (codificada por el gen Zfp36) actúa como regulador negativo de la inflamación, desestabilizando ARNm que codifica para citoquinas inflmatorias como TNFα e Interleuquina 6 (Il6). Además, a pesar de que el contexto en el cual la actividad de TTP ha sido más estudiada es en la respuesta inflamatoria, actualmente existen claras evidencias de que esta proteína previene la progresión tumoral inhibiendo la expresión de factores proangiogénicos y proteasas de matriz. Los resultados mostrados en esta Tesis indican que TTP se expresa en la mama normal humana y murina, particularmente en el epitelio diferenciado. También observamos que, al menos en la glándula mamaria de ratón, durante la lactancia se induce la expresión de Zfp36 a través de la activación de STAT5a. Para demostrar que TTP es relevante en el mantenimiento del amamantamiento utilizamos ratones doble-transgénicos en los cuales la expresión de la recombinasa Cre en la mama luego del parto resulta en la deleción de Zfp36. Se analizaron muestras de tejidos tomados a diferentes tiempos de lactancia y luego del destete de las crías. El análisis de los mismos muestra en los animales experimentales alteraciones morfológicas de los alvéolos partir de los 10 días de amamantamiento, así como una mayor deposición de colágeno luego del retiro de la crías. Por inmuno-histoquímica, hallamos evidencias del adelantamiento de la involución por la presencia caspasa-3 clivada, así como un aumento en los niveles de STAT3 fosforilado. Finalmente, por qRT-PCR cuantitativa detectamos un aumento de expresión de las citoquinas inflamatorias LIF, Il6 y TNFα durante la lactancia. En conjunto, estas observaciones indican que la ausencia de TTP promueve el inicio de la involución mamaria. Por lo tanto la presencia de esta proteína contribuye significativamente al mantenimiento de la lactancia, previniendo el desarrollo de eventos pro-inflamatorios que desencadenan la involución mamaria. Teniendo en cuenta que el escenario pro-inflamatorio que se genera luego del destete estaría asociada a una ventana de mayor riesgo de desarrollo de cáncer en los años posteriores al parto, la presencia de TTP en la en la glándula normal diferenciada estaría también asociada a su actividad supresora tumoral en este tejido.

La enfermedad trofoblástica gestacional (ETG) comprende un grupo heterogéneo deentidades interrelacionadas y asociadas al trofoblasto con características clínicas,morfológicas y patogenia específicas. Algunas de ellas representan lesiones benignas, comomola hidatiforme completa (MHC); mientras que otras son neoplasias como coriocarcinoma(CC) y tumor trofoblástico de sitio placentario (TTSP). Es interesante destacar que todas lasvariantes de ETG difieren genéticamente de la madre y por lo tanto constituyen un aloinjerto.El ácido hialurónico (AH) es el principal glicosaminoglicano lineal presente en la matrizextracelular. Está compuesto por unidades disacarídicas de ácido-D-glucurónico y Nacetilglucosamina.Los principales receptores con los cuáles interactúa y modula procesosbiológicos en neoplasias son CD44 y RHAMM. Dichos procesos son proliferación,diferenciación, adhesión, migración, invasión, resistencia a multidrogas, senescencia.Ha sido ampliamente estudiada la participación del AH en la progresión de varios tumoressólidos y en nuestro en laboratorio en particular, en enfermedades oncohematológicas. Sinembargo, su participación en neoplasias asociadas a trastornos gestacionales esprácticamente desconocida. El objetivo general de este trabajo de Tesis fue dilucidar laimplicancia del AH en el proceso fisiopatológico de ETG.En este trabajo de Tesis se demostró que existe una expresión diferencial de AH y susreceptores, CD44 y RHAMM, en las poblaciones trofoblásticas de MHC, CC y TTSP asicomo también en placenta de primer trimestre empleando muestras de tejidos. Losresultados demostrados en el Primer Capítulo sugieren que el AH, CD44 y RHAMMparticipan tanto del proceso fisiológico de implantación y placentación asi como del procesofisiopatológico asociado a cada una de las entidades de ETG estudiadas.Para dilucidar esto último en el Segundo Capítulo se caracterizaron tres líneas celulares deCC humano ya que hasta el momento no existen modelos disponibles para el estudio deMHC y TTSP. En concordancia con los resultados hallados en muestras de pacientes conCC, donde demostramos expresión de AH en el estroma tumoral y expresión de RHAMM enla superficie de las células tumorales, encontramos que la línea celular JEG-3 constituiría elmejor modelo para estudiar la implicancia de AH en esta entidad. Esta línea expresaRHAMM en su superficie celular, no expresa CD44 y no secreta AH al medio extracelular.Posteriormente, en el Tercer Capítulo de este trabajo evaluamos el efecto del AH de diversopeso molecular en los procesos de migración, proliferación y diferenciación de células JEG-3y los mecanismos subyacentes.Demostramos que el AH-BPM , pero no el AH-APM, es capaz de inducir migración celularsin afectar la proliferación. También, que tanto AH-BPM como AH-APM inducen unamodulación de algunos marcadores trofoblásticos del linaje extravelloso (con capacidad de invasión celular): aumento en la expresión de HLA-G, disminución de hCG y de sincitina-2.Estos resultados sugieren que en un entorno donde co-existen fragmentos de AH de diversopeso molecular ambos tipos de AH podrían actuar de modo concertado favoreciendo ladiferenciación hacia un fenotipo extravelloso y la migración de las células JEG-3 hacia AHBPM.Del estudio de los mecanismos moleculares que subyacen al efecto del AH-BPM sobre lamigración celular demostramos que este efecto depende del nivel endógeno de hCG en elmedio extracelular ya que la capacidad de migración disminuye cuando se bloquea hCG.También demostramos que el AH-BPM induce la fosforilación de ERK. Esta activación esmodulada de modo temporal por las quinasas MEK y PI3K indicando que existe un crosstalkentre ambas vías. Sin embago, la migración frente a AH-BPM depende de la quinasa PI3Kpero no de MEK. Finalmente, también demostramos que la migración en estas condicionesdepende de la interacción con el receptor RHAMM.En resumen, demostramos que la línea celular de coriocarcinoma humano JEG-3 es unmodelo adecuado para estudiar el efecto del AH sobre la biología de estas células. En estemodelo, demostramos que el AH-APM y ?BPM inducen la diferenciación bioquímica de lascélulas JEG-3 hacia un fenotipo extravelloso. Sin embargo, el AH-BPM, pero no el AH-APM,es capaz de inducir migración celular sin afectar la proliferación y que dicho efecto dependedel nivel de hCG endógena. Asimismo, este efecto del AH sobre la migración de las célulasJEG-3 involucra un aumento en la fosforilación de ERK el cual depende de la participaciónde la quinasa PI3K y es mediado por el receptor RHAMM.Esta Tesis representa un importante aporte al campo de las ciencias del AH ya que suparticipación en procesos neoplásicos asociados a la gestación ha sido poco estudiada. Laimportancia del conocimiento del diálogo entre el estroma y este tumor radica en laposibilidad de generar nuevas estrategias terapeúticas para esta enfermedad en aquelloscasos donde fracase la quimioterapia convencional y se presente recidiva yquimioresistencia.