Catálogo de publicaciones

Tesis (Grado Doctor en Ciencias Biológicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales. Lugar de Trabajo: Instituto de Patología Vegetal-IPAVE-Centro de Investigaciones Agropecuarias-CIAP- Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria-INTA. Universidad Nacional de Córdoba. 2015 - 211 h. con Anexos + CD. tabls.; figuras.; grafs. Contiene Referencia Bibliográfica y Publicaciones Derivadas de la Tesis. Abstract en español e inglés.

La plasticidad estructural de los carbohidratos es mayor a la de los aminoácidos, pero nuestro entendimiento de cómo esa plasticidad se relaciona con la funcionalidad biológica es aún muy limitada. Los pelos radicales y los tubos polínicos son células individuales que requieren una gran síntesis de pared celular para poder sostener la expansión apical también denominada crecimiento apical. Las paredes celulares en las células vegetales son estructuras complejas compuestas en su mayoría por polisacáridos, incluyendo una red de microfibrillas de celulosa-xiloglucanos, pectinas y O-glicoproteínas ricas en hidroxiprolina (HRGPs) tales como extensinas (EXTs) y arabinogalactanos asociados a proteínas (AGPs). En esta tesis se propone individualizar la respuesta de señalización que permite el crecimiento polarizado en tubos polínicos en Arabidopsis thaliana. Mediante la utilización de redes transcripcionales modulares ya hemos identificado componentes necesarios para el crecimiento polarizado en tubos polínicos. Estas redes establecen un punto de partida para explorar la funcionalidad biológica de los HRGPs, extensinas y receptores quinasa con dominio extracelular de tipo extensina (PERK; proline-rich extensin-like receptor kinase) asociados al crecimiento polarizado. En esta tesis estudiamos en tubos polínicos cómo las proteínas PERK afectan al crecimiento polarizado mediante la inhibición bioquímica y por métodos de genética reversa. Los genes candidatos fueron analizados en un contexto más amplio mediante métodos moleculares específicos y microscopía confocal.

Cuando las plantas crecen a altas densidades perciben la presencia temprana de plantas vecinas sensando los cambios en la calidad de luz que las rodea. Esta percepción es mediada principalmente por los fitocromos, una familia de fotorreceptores que detectan una reducción en la relación rojo:rojo lejano (R:RL) causada por la proximidad de plantas vecinas induciendo un conjunto de respuestas morfo-fisiológicos tales como la elongación de hipocotilo y tallo, dominancia apical, aceleración de la floración, entre otros. Este conjunto de respuestas plásticas constituye “el síndrome de escape al sombreado”, SAS (del inglés, Shade Avoidance Syndrome). Si bien en los últimos años se ha comenzado a comprender los mecanismos moleculares involucrados en la SAS, aún nuestro conocimiento es escaso. En esta tesis estudiamos la función de las proteínas B-Box (BBX) en la señalización de la SAS en plántulas de Arabidopsis thaliana, enfocando nuestra atención en un subgrupo de esta familia que se caracteriza por presentar un doble dominio B-box en su región amino terminal. La caracterización fisiológica de algunos mutantes simples nos permitió demostrar que BBX18 y BBX24 promueven, mientras que BBX19, BBX21, BBX22 inhiben la respuesta de elongación por sombra. En particular, estudiamos el mecanismo de acción de BBX21 y BBX24 en la señalización de las SAS mediante aproximaciones genéticas-moleculares y fisiológicas. La escasa similitud que detectamos entre los transcriptomas asociados a BBX21 y BBX24 en respuesta a las señales de sombra sugiere que ambas proteínas participarían por vías distintas de señalización. En sombra prolongada, la función de BBX21 es inhibir la expresión de genes que codifican para proteínas involucradas en el crecimiento y proliferación celular, mientras que BBX24 promueve la expresión de genes del metabolismo y señalización de hormonas vinculadas a la SAS. Por medio de aproximaciones genéticas demostramos que BBX21 modula esta respuesta interaccionando genéticamente con COP1 (CONSTITUTIVE PHOTOMORPHOGENIC1), un represor maestro de la fotomorfogénesis que promueve la SAS. También demostramos que BBX24 participa en la misma vía de señalización que PIF4 (PHYTOCHROME-INTERACTING FACTOR 4), un factor de transcripción que promueve la elongación, y que interviene en la síntesis de giberelinas para promover la SAS. En base a los resultados obtenidos, se propone un posible mecanismo de acción de estas proteínas BBX en la modulación de la respuesta de escape al sombreado.

La cardiomiopatía crónica chagásica (CCCh) se caracteriza por su compleja sintomatología arritmogénica presentando diversos disturbios que incluyen arritmias ventriculares y disfunción de nódulo sinusal, cuya progresión puede llevar a la muerte súbita. Pese a que la CCCh es la resultante de un complejo número de factores, nuestro grupo ha demostrado que los anticuerpos que se generan contra las proteínas ribosomales P de T.cruzi en los pacientes podrían ejercer efectos patogénicos “no deseados” por reacción cruzada sobre el tejido cardíaco (estimulando los receptores β1-A y M2-Ch). En este trabajo demostramos la prevalencia de anticuerpos que reconocen receptores cardiovasculares en la CCCh y su correlación con la sintomatología arritmogénica de los pacientes. Investigamos el rol que desempeña la región C-terminal de la proteína ribosomal TcP2β,el péptido R13, en la generación de los anticuerpos que reaccionan en forma cruzada por un tanto con los receptores β1-A como con los receptores M2-Ch por un mecanismo de mimetismo molecular. Se demostró que los anticuerpos anti-R13 ejercen un efecto sobre la contractilidad de cardiomiocitos y sobre la cascada de señalización asociada a los receptores acoplados a proteína G. El estudio fino de los anticuerpos anti-R13 de diversos pacientes con CCCh y la caracterización de un anticuerpo monoclonal anti-R13 demostraron la heterogeneidad entre estos anticuerpos que fueron generados por un mismo antígeno pero con especificidad diferencial hacia los receptores cardíacos. El estudio de la especificidad de estos anticuerpos explicaría elementos de la compleja sintomatología en la CCCh. Finalmente, se construyó una biblioteca combinatorial de anticuerpos a partir de médula ósea de un paciente con CCCh y se identificaron anticuerpos recombinantes humanos anti-R13 que reproducen algunas de las características de los anticuerpos policlonales y el anticuerpo monoclonal. Esta biblioteca constituye una herramienta importante para comprender más profundamente los mecanismos moleculares implicados en la generación de anticuerpos con efectos cardíacos patogénicos y podrían permitir el diseño de estrategias terapéuticas para mejorar la calidad de vida del paciente con CCCh.

Tesis (Doctor en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2021

El browning del tejido adiposo es la aparición de adipocitos termogénicos (beige) en los depósitos de tejido adiposo blanco ante la estimulación de las vías adrenérgicas. Los adipocitos beige pueden generarse durante el browning por adipogénesis a partir de precursores o por transdiferenciación de los adipocitos blancos maduros. Se ha observado que la estimulación del browning aumenta el gasto energético ocasionando resistencia al desarrollo de obesidad y también mejora parámetros metabólicos desregulados en esta enfermedad tales como, la tolerancia a la glucosa, la dislipidemia y la insulinosensibilidad. Por otro lado, en los últimos años se han descripto roles de las proteínas reguladoras del ciclo celular (ciclinas, quinasas dependientes de ciclinas [CDKs] y sus inhibidores) en el metabolismo y el tejido adiposo. En particular para CDK4 y CDK6 en el tejido adiposo se describieron acciones en la adipogénesis y en la funcionalidad adipocitaria, pero su participación en el browning no se había evaluado. En el primer capítulo de esta tesis mostramos que CDK4/6 están implicadas en la generación de adipocitos beige por adipogénesis de novo. De acuerdo con esto, cuando inhibimos su actividad in vitro en células precursoras adipocitarias (CPAs) encontramos una disminución en la expresión de marcadores selectivos del linaje beige tanto en las CPAs (Cd137, Tbx1, Ebf2), como en los adipocitos generados al diferenciarse (Ucp1, Pgc1a, Prdm16, Cox8b) indicando una menor capacidad termogénica basal de los mismos. Además, encontramos que parte de su rol en la adipogénesis beige podría estar mediado en parte por una acción sobre el factor de transcripción PPARγ en estadios tempranos de la diferenciación, ya que las CPAs tratadas con el inhibidor mostraron una menor expresión de este factor a d0 y d4 post-diferenciación. En el segundo capítulo observamos que CDK4/6 son importantes para el mantenimiento de la funcionalidad termogénica de los adipocitos y por lo tanto estarían implicadas en transdiferenciación de adipocitos blanco a beige. En este sentido, su inhibición en adipocitos beige diferenciados in vitro disminuyó la expresión de marcadores termogénicos y mitocondriales. Además, el cultivo ex vivo de adipocitos de tejido con el inhibidor redujo la expresión de Ucp1. Finalmente, en el tercer capítulo demostramos que CDK4/6 son importantes en la termogénesis de los depósitos de tejido adiposo blanco in vivo, donde resultaron necesarias para el mantenimiento de la termogénesis basal y para la inducción del browning por frío. De acuerdo con esto, nuestros resultados mostraron que la inhibición de CDK4/6 en ratones induce una disminución en la expresión de marcadores termogénicos en el tejido a temperatura ambiente (basal) e inhibe su estimulación por frío (browning) a nivel génico y proteico. Además, encontramos que el tratamiento con el inhibidor disminuye el pool de CPAs beige en la FEV de los depósitos blancos, indicando que estas quinasas son importantes en la determinación de los precursores hacia el linaje beige. En línea con esto hallamos que las FEVs provenientes de animales tratados in vivo con el inhibidor se diferencian a adipocitos con menor capacidad termogénica basal y estimulada in vitro. En conjunto, nuestro trabajo demuestra la participación de CDK4/6 en la regulación de la termogénesis mediada por Ucp1 en los depósitos de tejido adiposo blanco, y sugiere un rol de estas quinasas en la biogénesis de adipocitos beige por adipogénesis y transdiferenciación.

Tesis para obtener el grado de Doctor en Farmacia y Bioquímica en Fisiopatología, de la Universidad de Buenos Aires, en 2015

La información es un recurso para la administración y un insumo para el conocimiento y la memoria. El ciudadano necesita acceder a ella para ejercer sus derechos en casi todas las facetas de su vida cotidiana. El derecho de acceso a la información y a los documentos que la contienen sitúa al usuario en el centro de las preocupaciones y de las actividades del archivero y hace que los archivos sean entendidos y utilizados como fuentes de información para cualquier tipo de investigación. Se trata de un derecho de vital importancia porque procura la transparencia en el accionar del aparato estatal y contribuye a que disminuya la corrupción, lo que redunda en la consolidación de la democracia. En este estudio interdisciplinario, desde la archivología, el derecho y la comunicación, con una dimensión política de lo sociocultural, se sustenta la hipótesis de que la existencia de archivos organizados y políticas de acceso a la información pública en consonancia, proporcionan transparencia al gobierno y perfeccionan la democracia de un país. Para ello, se estudia el estado de situación en tres países de América del Sur con tradiciones administrativas semejantes pero trayectorias político-institucionales diferentes: Argentina, Colombia y Perú, para verificar el rol que ejercen los archivos en la legislación sobre el derecho de acceso a la información y si la existencia de normativas respecto de este tema tiene relación - y en caso de tenerla, de qué tipo - con las políticas archivísticas y la organización de los Archivos, entendiendo que la existencia de una ley no es suficiente para garantizar la disponibilidad de los documentos y el ejercicio ciudadano de este derecho. Se analizan y comparan las leyes de acceso a la información pública de los tres países y se examina la evolución político-institucional de cada uno de ellos, para conocer el contexto en el cual se sancionaron estas leyes. Finalmente se consulta a profesionales de Argentina, Colombia y Perú, para verificar si las disposiciones cumplen sus objetivos, si se aplican los principios establecidos, si la población hace uso del derecho democrático que ellas les otorgan y, en suma, si se comprueba la relación entre los archivos y acceso a la información. Si bien es un derecho que aún no es ejercido por la mayoría de la sociedad y se requieren políticas archivísticas y archivos organizados en base a una gestión documental sistemática y completa para garantizar la disponibilidad y la accesibilidad de los documentos, queda claro que mejorar el acceso a la información facilita la defensa de los derechos fundamentales individuales y colectivos de la sociedad, lo cual se traduce en el fortalecimiento de la democracia.

ARNs no codificantes largos transcriptos a partir de los telómeros,conocidos como TERRA (telomeric repeat-containing RNA), se asocian a laestabilidad telomérica y genómica. Están aumentados en tejidos tumoraleshumanos y murinos, aunque poco se sabe sobre los mecanismos que subyacendicho aumento y las funciones que cumplen. El estrés oxidativo daña biomoléculasy activa vías de señalización asociadas a la proliferación celular, angiogénesis,apoptosis y metástasis. Los telómeros son regiones del genoma especialmentesusceptibles a sufrir daño oxidativo y se ha reportado que la inflamación crónica invivo induce disfunción telomérica por sobreproducción de ROS vía COX-2, lo cuales revertido por tratamiento antiinflamatorio ó antioxidante. Consecuentemente,los objetivos de este trabajo de Tesis fueron caracterizar la expresión de losTERRA frente al estrés oxidativo, determinar los mecanismos involucrados yevaluar su relevancia en la progresión tumoral.Se observa que los TERRA se inducen a las 4 h de tratamiento con losagentes oxidantes H2O2, NaAsO2 ó butionina sulfoximina en células renalesembrionarias humanas HEK-293T. El uso del antioxidante N-acetil-L-cisteínapreviene dicho aumento. Se ha demostrado que hay aumento de ROS en el tejidoadiposo pardo de ratones expuestos al frío, pero no en el blanco. En el presentetrabajo se reporta que los TERRA se inducen sólo en el tejido adiposo pardo deratones C57BL/6J luego de 4h de ser expuestos al frío, siendo esta la primerevidencia experimental que los TERRA se inducen in vivo en una condiciónfisiológica que cursa con aumento de ROS. Por ChIP se evidenció que el H2O2induce aumento de las marcas de histonas y proteínas asociadas a activatranscripción en la región subtelomérica de las HEK-293T, donde se hallan lospromotores de los TERRA. Ensayos de RIP muestran que los TERRA interactúancon las proteínas HP1α/γ, ambas reclutadas al subtelómero. Ensayos deFinmunoprecipitación para estas proteínas sugieren que sólo HP1γ interactúa con lamaquinaria transcripcional. Se encuentra descripto que las proteínas del poronuclear (Nups) se asocian a genes transcripcionalmente activos, desconociéndoselos factores que median su interacción con la cromatina. En este trabajo seevidenciaron a las Nups presentes en complejo con HP1γ y reclutadas alsubtelómero tanto antes como después de la exposición al H2O2, sugiriendo queintervienen en la expresión de los TERRA por medio de HP1γ.La inducción de los TERRA se revierte 1-2 h luego de haber quitado el H2O2del medio de cultivo. Esta expresión dinámica de los TERRA sugiere que ejercenun rol protector. En línea con esta idea, se observa una rápida inducción deTERRAs frente a un segundo desafío con H2O2. Ensayos de ChIP sugieren queesto es posible gracias a que se conservan en la región subtelomérica las marcasepigenéticas que favorecen la transcripción luego de la primera exposicióntransitoria al H2O2, dejándolos ?preparados? para que sean transcriptos.H89, un inhibidor de la PKA, bloquea la inducción de los TERRA porexposición al H2O2, sugiriendo que PKA controla su expresión. El uso de drogasque alteran la estabilidad de los microtúbulos modula los niveles de los TERRA, aligual que ocurre cuando se cultivan células sobre superficies de diferente rigidezpara modificar la disposición del citoesqueleto. También se observa modulación deTERRAs durante la miogénesis, proceso en el que hay una reorganizacióndramática del citoesqueleto. De hecho, los rearreglos del citoesqueleto en célulasNMuMG que atraviesan la transición epitelio-mesenquimal (TEM) por tratamientocon TGFβ1, se asocian a inducción de TERRAs y a ausencia de respuesta alH2O2, tal como ocurre en las células de adenocarcinoma mamario T47D quepresentan disfunción telomérica, evidenciado por microscopía confocal. En suconjunto, los resultados aportan evidencias que los TERRA se inducen por estrésoxidativo y durante la TEM, señalando su potencial utilidad como marcadorestempranos de progresión tumoral.

En este trabajo se estudiaron los astrocitos proliferativos en dos modelos distintos de lesión del sistema nervioso central: la lesión traumática de la corteza cerebral y la isquemia como resultado de la oclusión de la arteria cerebral media. Los astrocitos proliferativos se encuentran ubicados principalmente en posiciones adyacentes a los vasos sanguíneos cerebrales. Con el objetivo de elucidar el rol de esta subpoblación astrocitaria mediante la manipulación genética de ratones, se crearon modelos para alterar la respuesta astrocitaria proliferativa y se estudió el comportamiento de células gliales e infiltrados inflamatorios en la corteza cerebral lesionada. Los resultados muestran que una disminución en la proliferación de los astrocitos resulta en un aumento del número de monocitos infiltrados mientras que un aumento de la proliferación astrocitaria reduce su número. Se estudió también la evolución de la lesión en ratones deficientes en CCR2, un receptor de quimioquinas involucrado en la extravasación de los monocitos. En este modelo se investigó la respuesta glial en ausencia de las señales generadas por monocitos infiltrados y se encontró un aumento de la proliferación de la macroglia en estas condiciones. Estos resultados muestran una regulación inversa cruzada entre astrocitos y monocitos. Se encontró, además, que la disminución del número de monocitos infiltrados tiene consecuencias positivas durante la cicatrización glial resultando en menor deposición de matriz extracelular, un incremento en el área ocupada por neuronas y una disminución del área ocupada por GFAP. Estos resultados sientan bases para un nuevo enfoque terapéutico en medicina regenerativa en el que se module la proliferación glial y la infiltración de monocitos para lograr una mejor cicatrización del tejido nervioso lesionado.