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Tesis de Doctorado para obtener el título de Doctor en Comunicación Social, Universidad Nacional de Córdoba.

El presente trabajo tiene como objetivo analizar las cicatrices que ha dejado el último golpe de Estado en los proyectos creadores de numerosos escritores. Luego de un recorrido por los diferentes lenguajes artísticos que fueron víctimas del control y la censura nos abocamos al campo literario. Remitimos a tres momentos que identificamos en las producciones referidas a la dictadura: uno simultáneo, otro que inicia con el retorno de la democracia y uno posterior en el que focalizamos nuestro análisis. El corpus de trabajo está compuesto por La casa de los conejos de Laura Alcoba (Edhasa, 2008); Los topos de Félix Bruzzoni (Mondadori, 2008) y Perder de Raquel Robles (Alfaguara, 2008). El análisis de estas obras nos permite reflexionar sobre la búsqueda identitaria de los hijos de víctimas de la última dictadura en sus proyectos creadores.

En mamíferos las proteínas argonauta están bien caracterizadas como las efectoras del silenciamiento post-transcripcional mediado por RNAs pequeños. Durante este proceso fundamentalmente citoplasmático, dichas proteínas unen RNAs pequeños de 21 nucleótidos los cuales por complementariedad de bases, se unen a los mRNA blanco inhibiendo su traducción o promoviendo su degradación. Si bien sabemos que las proteínas argonauta se encuentran tanto en el núcleo como en el citoplasma, es poco lo que conocemos acerca de su relevancia en procesos nucleares. En trabajos previos de nuestro laboratorio, hemos analizado la unión a la cromatina de argonauta 1 (AGO1) a nivel del genoma completo de la línea celular mamaria MCF7 y demostramos que AGO1 se une a elementos regulatorios de la transcripción (enhancers), preferentemente cuando éstos se encuentran activos. En este trabajo, continuamos con el análisis de la distribución genómica de AGO1 en las células mamarias MCF7 y hallamos que esta proteína se encuentra mayormente asociada a enhancers cuya activación depende de la unión del receptor de estrógenos alfa (ERα), es decir, que se activan ante la presencia de la hormona estradiol (E2). Observamos que, al igual que lo que ocurre con ERα, la asociación de AGO1 a estos enhancers depende del tratamiento con E2. En base a esto, estudiamos la relevancia de AGO1 en la activación transcripcional disparada por E2 en células MCF7. Encontramos que dicha activación depende de AGO1: ante el silenciamiento de la expresión de esta proteína observamos que el efecto del E2 en la activación transcripcional de los enhancers y de los genes blanco se reduce. Este efecto es acompañado, además, por una disminución del reclutamiento de ERα así como también por una reducción en la frecuencia de interacción entre un enhancer y el promotor de uno de sus genes blanco. Estos hallazgos proponen un rol fundamental para AGO1 en la activación transcripcional dependiente de estradiol. AGO1 interacciona con ERα de forma E2 dependiente, reforzando la idea de que AGO1 actúa directamente en la activación transcripcional disparada por estrógenos. Por otro lado, estudiamos la relevancia de un enhancer intragénico dependiente de E2 en la modulación del patrón de splicing alternativo de un evento que se encuentra río arriba de dicho elemento regulatorio. Utilizamos como modelo de estudio el exón cassette alternativo 107 del gen SYNE2. Vimos que la inclusión de dicho exón en el mRNA disminuye con el tratamiento de células con E2 de manera dependiente de AGO1. Más allá del estudio de un caso puntual en el que AGO1 regula el splicing alternativo, estos resultados permiten postular un modelo en el que el proceso de splicing alternativo es modulado por eventos asociados a la activación de un enhancer intragénico cercano.

El cáncer de próstata (PCa) es el segundo tipo de cáncer más frecuente en el mundo. En la Argentina, es el de mayor incidencia y el segundo en mortalidad. La edad, el origen étnico, la historia familiar, el estilo de vida y la obesidad son importantes factores de riesgo asociados al desarrollo de esta patología. En este trabajo de tesis nos centralizamos en el rol de BRCA1 en diferentes vías que contribuyen al desarrollo del PCa. Estudiamos la regulación transcripcional mediada por BRCA1 del gen ATM, clave en el mantenimiento de la estabilidad genómica celular. Determinamos que el complejo formado por las proteínas BRCA1, E2F1 y CtIP, se asocian al promotor de ATM y activan su transcripción. Asimismo, cuando se induce estrés genotóxico, BRCA1 y CtIP se liberan reprimiendo su transcripción. Además, estudiamos la regulación transcripcional de BRCA1. Encontramos que los andrógenos, la principal hormona masculina, regula la expresión de BRCA1 en líneas celulares de PCa. Esta hormona reprime la transcripción de BRCA1 en las células LNCaP, sensibles a andrógenos. Mientras que en las células PC3, insensibles a andrógenos, la testosterona aumenta los niveles de expresión de BRCA1. Esta diferencia en la respuesta a la testosterona en las células tumorales de próstata parece responder a un efecto en la síntesis de estrógenos a partir de andrógenos. En este trabajo de tesis también determinamos que las proteínas CtBP1 y BRCA1 se encuentran asociadas a la región proximal del promotor de BRCA1 reprimiendo su transcripción. En la línea tumoral PC3, la testosterona provoca que estos factores se liberen del promotor de BRCA1 activando su transcripción. Utilizando líneas celulares que sobre-expresan o tienen disminuida en forma estable la expresión de CtBP1, encontramos que la sobreexpresión de CtBP1 aumenta la transformación y la viabilidad celular. En un modelo de xenotransplantes generado por inoculación de estas células estables en ratones nude, determinamos que la disminución de la expresión de CtBP1disminuyó drásticamente el crecimiento tumoral solo cuando los animales habían sido alimentados con una dieta hipercalórica. Asimismo, la incubación de las líneas estables de PC3 con el suero proveniente de animales alimentados con una dieta hipercalórica aumento la proliferación celular de las células que sobre-expresan CtBP1 al igual que se ven favorecidos la activación de procesos de EMT que podrían conducir al establecimiento de metástasis. En resumen, en este trabajo de tesis describimos por primera vez un mecanismo de regulación transcripcional de ATM por BRCA1 en respuesta al estrés genotóxico. Además determinamos que los andrógenos y la dieta hipercalórica pueden influenciar el desarrollo tumoral prostático alterando la vía de CtBP1/BRCA1. Por lo tanto, estos resultados aportan nuevas evidencias en cuanto a la regulación transcripcional de BRCA1 y su función co-reguladora de otros blancos moleculares fortaleciendo así su rol supresor tumoral en el PCa.