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Título de Acceso Abierto
Dos nuevos genes de Beauveria bassiana: Una quitonasa y una proteína de transporte que podrían estar relacionados con la patogenicidad
Marcelo Facundo Berretta Oscar Grau
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Resumen/Descripción – provisto por el repositorio digital
La búsqueda de genes relacionados con la patogenicidad de Beauveria bassiana, se llevó a cabo siguiendo la estrategia de estudiar la expresión de una cepa virulenta del hongo, cultivada in vitro, en condiciones nutricionales similares a las que este patógeno se encuentra sometido durante la penetración del hospedante. Para ello se utilizó como única fuente orgánica de crecimiento, una preparación de la cutícula del insecto Diatraea saccharalis, el sustrato natural cuya degradación es requerida para el establecimiento de la infección. Se aplicó la técnica de Differential display para la detección de genes que se expresaran en forma diferencial bajo esta condición. Por comparación entre los productos de amplificación de ADNc, obtenidos por RT-PCR del ARN extraído del hongo cultivado con cutícula, o sin ella, se detectaron fragmentos únicamente presentes en el primer caso. Los patrones de bandas se obtuvieron utilizando un primer oligo-dT, en combinación con decámeros de secuencia arbitraria. Se desarrolló una metodologia que consistió en la marcación de los productos de PCR con grupos fluorescentes, y su análisis en un sistema de secuenciación automática. Los fragmentos amplificados diferencialmente fueron utilizados como sondas, para estudiar el nivel de expresión de los transcriptos correspondientes, por la técnica de northern. Paralelamente, se determinó el número de copias de los genes respectivos, en el genoma de B. bassiana, mediante la técnica de southern. Se construyó una genoteca de ADN genómico de B. bassiana en un vector de sustitución derivado del fago λ. El screening de la misma con una sonda de expresión diferencial, permitió identificar un gen que codifica para una proteína deducida de 495 aminoácidos. La secuencia de la misma, presentó homología con una familia de proteínas de transporte a través de membrana, de especificidades diversas. Adyacente a dicho gen, en posición aguas arriba de la secuencia genómica, se identificó otro gen de copia única y de expresión concertada con el anterior, que codifica para la enzima quitosanasa. Con la secuencia del ADNc se comprobó la existencia de dos intrones en la estructura primaria del gen. La proteína deducida, de 232 aminoácidos, presenta 74% de identidad de secuencia con la misma enzima de otro hongo entomopatógeno, Metarhizium anisopliae. Otras tres secuencias fúngicas completan el grupo de quitosanasas eucariotas conocidas, separado de las enzimas de origen bacteriano, por análisis de agrupamiento en base a similitud de secuencia. Se propone la participación de esta enzima en la degradación de la cutícula de los insectos, por parte de los hongos entomopatógenos.Palabras clave – provistas por el repositorio digital
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Disponibilidad
| Institución detectada | Año de publicación | Navegá | Descargá | Solicitá |
|---|---|---|---|---|
| No requiere | 2001 | Biblioteca Digital (FCEN-UBA) (SNRD) |
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Información
Tipo de recurso:
tesis
Idiomas de la publicación
- español castellano
País de edición
Argentina
Fecha de publicación
2001
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