Catálogo de publicaciones

En el presente trabajo hemos demostrado concluyentemente que el efecto desensibilizante de la gonadotrofina corionica humana (hCG) es mediado in vivo e in vitro por la acción del estradiol (E2), después de una activación temprana (a los 45 min) de las RNA polimerasas nucleares, seguido de la aparición de una proteína de PM 27000 (entre 3-6 hs)

Fil:Conti, Claudio Jorge. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Fil:Tasat, Débora Ruth. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Fil:De Las Heras, Marcelo Antonio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Las MAP quinasas fosfatasas (MKPs) son componentes regulatorios importantes en aquellos procesos fisiológicos en los cuales participan las MAPKs debido a su capacidad de inactivar específicamente a estas enzimas. En este trabajo se analizó el rol funcional y la regulación transcripcional y post-traduccional de MKP-1 en células esteroidogénicas. Demostramos que hCG y AMPc incrementan los niveles de MKP-1 por mecanismos transcripcionales y post-traduccionales. Los resultados obtenidos indican que hCG/AMPc promueven la fosforilación de MKP-1 por acción de PKA y ERK1/2 y que esta modificación promueve su estabilización. También demostramos que esta fosfatasa se localiza tanto en núcleo como en mitocondrias. En lo que respecta al papel funcional de MKP-1, se comprobó que la expresión de MKP-1 inhibe la producción de esteroides por su capacidad de interferir con la inducción de StAR, una proteína clave para la esteroidogénesis. En conclusión, en este trabajo demostramos que LH/ACTH, además de promover la activación de enzimas necesarias para la síntesis de esteroides como ERK1/2, también dispara la activación de mecanismos que contribuyen a la inactivacion de esta enzima. Se concluye que el aumento en la expresión de MKP-1 y la estabilización de la proteína por acción de hCG/AMPc es un mecanismo clave para el cierre de la acción hormonal sobre la esteoidogénesis.

La propuesta originalmente planteada era comprender un poco más algunos de los complejos mecanismos que regulan el mantenimiento de la espermatogénesis. Tal objetivo fue alcanzado mediante el estudio de un parámetro funcional de la celula de Sertoli, comoes la τ-glutamil transpeptidasa. Los estudios se iniciaron utilizando modelos experimentales "in vivo", en los que se modificaba el estado hormonal del animal. En estos trabajos, se observó que la τ-GTP disminuía en condiciones en que el testículo era deprivado de los estímulos de FSH y andrógenos. Pudo luego observarse que la actividad de esta enzima podía reponerse por administración exógena de las hormonas mencionadas. Cuando se estudió la regulación hormonal de la τ-GTP "in vitro", se observó que sólo la FSH era capaz de estimular esta enzima, la que se ha postulado que interviene en el transporte activo de aminoácidos al interior de la célula. La testosterona sola o en combinación con un amplio rango de concentraciones de FSH, no es capaz de inducir cambios en la τ-GTP. Dado que en los modelos "in vivo" los cambios en la testosterona intratesticular estaban siempre asociados con cambios en el desarrollo del epitelio germinal, se evaluó la posibilidad que esta enzima estuviera sujeta a un fenómeno de regulación paracrina por células germinales. Tal hipótesis fue confirmada demostrándose que tanto los espermatocitos paquiténicos como las espermátidas, estimulan esta actividad enzimática. El mecanismo por el cual las células germinales regulan la actividad parecería involucrar la regulación de la secreción de IGF-l. Postulamos que esta estimulación puede estar relacionada con la biosíntesis de determinadas proteínas esenciales para el normal desarrollo espermatogénico. Utilizando modelos "in vivo" e "in vitro", puede así demostrarse que la regulación funcional de la célula de Sertoli y por lo tanto la preservación de la espermatogénesis, es un fenómeno complejo donde coexisten mecanismos de regulación hormonal y paracrina/autocrina. La dilucidación de estos fenómenos a los que se encuentran sometidos los parámetros funcionales, y la integración final de estos conocimientos, permitirá tal vez dentro de algunas décadas, comprender el complejo proceso de la espermatogénesis.

La Tuberculosis representa la principal causa de muerte producida por un agente infeccioso, transformándose en uno de los principales problemas en salud pública. Existe evidencia que demuestra que el tipo de RI que el huesped desarrolla, condicionar{ia el estadio clínico y curso de la TB. Asimismo, se conoce que productos del SI son capaces de desencadenar respuestas neuroendócrinas, las cuales podr¡an modular la RI en curso. Con el fin de explorar el rol de las interacciones entre ambos sistemas en el contexto de esta patología, en pacientes de diferente severidad se estudiaron: los efectos in vitro de cortisol y DHEA sobre la linfoproliferación y la producción de citoquinas; el perfil endócrino y de citoquinas plasmáticas y la capacidad de sobrenadantes de cultivos de células periféricas mononucleares basales y estimulados con Tso (sonicado de M.tuberculosis) para modificar la esteroidogénesis adrenal. In vitro se observó un efecto dosis dependiente supresor de cortisol tanto sobre la blastogénesis como sobre la producción de la mayoría de las citoquinas determinadas; particularmente cuanto mayor fue la capacidad de respuesta al antígeno Tso. La DHEA mostró efectos inmunoestimulantes en forma aislada o cuando se la combinó con GC, pero fue incapaz de revertir totalmente la inhibición mediada por cortisol. Existieron diferencias entre pacientes y controles. El perfil endócrino y de citoquinas arrojó diferencias significativas con los controles y así como entre subgrupos de severidad de la enfermedad. A medida que aumentaba la misma, el perfil hormonal tendió a favorecer respuestas humorales, ineficaces para enfrentar al MTB. Pudo demostrarse asimismo, que productos de la RI específica frente a MTB son capaces de afectar directamente la esteroidogénesis adrenal, generando una disminución en la producción de DHEA proporcional a la severidad de la TB. En base a lo observado puede concluirse que la interacción entre ambos sistemas influenciaría en buena medida el curso de la TB pulmonar en el huésped.

El presente estudio muestra adaptaciones morfológicas y bioquímicas de las branquias del cangrejo Chasmagnathus granulatus aclimatado a distintas salinidades (10, 30 y 45 %o). En las tres salinidades, el epitelio que tapiza la branquia 6 está formado por células en pilar, con función de soporte estructural y por ionocítos, con extenso desarrollo de membrana plasmática basolateral y apical, y gran densidad mitocondrial. Los pliegues de membrana apical delimitan espacios subcuticulares que aumentan en tamaño al incrementar la salinidad externa. Las uniones septadas extensas y ramificadas en las branquias de cangrejos aclimatados a 10 %o, se acortan y se simplifican en 30 y 45 %o, indicando un aumento en la permeabilidad paracelular en situaciones de excreción iónica. La fosfatasa alcalina sensible a levamisol (más concentrada en la fracción de membrana) se induce a 45 %o, lo que sugiere su participación en hipo-regulación y modularía de forma positiva a la Na+/K+-ATPasa (NKA). La actividad de anhidrasa carbónica (AC) y de NKA de branquias posteriores se induce a 10 %o, indicando su participación en la captación activa de iones. En medios oligohalinos (<5 %o), existe una inducción aún mayor de AC y la absorción iónica dirigida por NKA se complementa con un mecanismo de captación activa y electrogénica que involucra a la AC, V-H+-ATPasa y al intercambiador apical Cl-/ HCO3-. La branquia 5, además de células en pilar y células involucradas en el intercambio gaseoso, posee un tipo celular similar a las células que secretan H+, con gran densidad mitocondrial, desarrollo de membrana apical y numerosas vesículas. Aunque aún no determinado, se presume que este tipo celular participa de procesos de transporte transepitelial, como por ejemplo excreción de amonio o equilibrio ácido base. La actividad de NKA esta regulada por vías intracelulares antagónicas que involucran a las protein quinasas A y C (PKA, PKC) y proteín fosfatasas (PP). La activación de PKA determina una estimulación en NKA, obteniéndose lo contrario con PKC. La dopamina ejerce una función moduladora sobre la NKA, a través de la via de PKA y no de PKC. En condiciones basales, en las cuales no se hallaba activada la PKA, la unión dopamina-receptor provoca la activación de adenilato ciclasa vía proteina G, y se incrementan las concentraciones de AMPc. Éste, a su vez, activa la PKA, que fosforila (y activa) moléculas de NKA. Luego se produce la inactivación de la adenilato ciclasa. Probablemente, la PKA fosforile al receptor y lo inactive (o le cambie su acoplamiento a una proteína G inhibitoria de la adenilato ciclasa), para dar lugar a otro receptor de dopamina de menor afinidad y acoplado a una proteína Gi. La disminución en las concentraciones de AMPc, ocasiona una reducción en la actividad de PKA. Esto permitiría la liberación de la inhibición de PP, que mediante la remoción de fosfatos, devuelven a la NKA a las condiciones iniciales. Cuando la vía de PKA se halla previamente activada, la dopamina actúa como un modulador negativo, ya que dispara en forma directa la inhibición de la adenilato ciclasa, obteniéndose una reducción en la actividad de NKA.

Los factores neurotróficos son proteínas solubles principalmente conocidas por su participación en el mantenimiento, sobrevida, diferenciación y maduración sináptica de diferentes subpoblaciones neuronales. Distintas familias de factores neurotróficos han sido identificadas en el sistema nervioso de mamíferos, entre las que se destacan el grupo de las neurotrofinas (NGF, BDNF, NT3, NT4) y la familia del factor neurotrófico derivado de la glia (GDNF, NRTN, ARTN, PSPN). Las señales inducidas por estos ligandos involucran la activación de receptores conteniendo una actividad tirosina kinasa intrínseca, un evento de señalización clave para controlar la fisiología celular y orquestar el desarrollo del sistema nervioso. Un fuerte control y regulación de la actividad de los receptores tirosina kinasa (RTK) es crucial para garantizar la homeostasis celular y un apropiado desarrollo neuronal, ya que tanto alteraciones funcionales de estos receptores por mutaciones en los correspondientes genes como fallas en los mecanismos que restringen su activación, podrían contribuir a la patogénesis de ciertos tipos de cáncer y de enfermedades neurológicas. De esta manera, para evitar errores de señalización que finalmente lleven a comportamientos celulares aberrantes y patologías, los mecanismos celulares han evolucionado para permitir que apropiados niveles de activación de estos receptores sean alcanzados y mantenidos por un período de tiempo compatible con la inducción de una respuesta fisiológica. El objetivo de la presente tesis consistió en identificar y caracterizar nuevos mecanismos que restringen la activación de receptores para factores neurotróficos en neuronas en desarrollo, como una vía para entender la patogénesis de diferentes enfermedades neurológicas, y así contribuir al desarrollo de nuevas terapias regenerativas. Inicialmente, identificamos y caracterizamos a la proteína Sprouty4 como un inhibidor endógeno de la señalización y el crecimiento axonal inducidos por NGF y su receptor TrkA en neuronas sensoriales de los ganglios de la raíz dorsal (DRG). Por otro lado, nosotros también analizamos el rol de los miembros de la familia de proteínas Lrig – Lrig1, Lrig2 y Lrig3 – como moduladores endógenos del estado de activación de receptores para factores neurotróficos. Las proteínas Lrig pertenecen a una emergente superfamilia de proteínas transmembrana enriquecidas en sistema nervioso que contienen dominios inmunoglobulina (Ig) y repeticiones ricas en leucina (LRR - Leucine-rich repeats). En este sentido, identificamos a Lrig1 como un regulador negativo de la señalización y los efectos biológicos inducidos por BDNF y su receptor TrkB en neuronas hipocampales. Notablemente, hemos determinado que los ratones transgénicos deficientes para Lrig1 poseen una mayor arborización dendrítica en las neuronas piramidales del hipocampo que correlaciona con defectos en su comportamiento de interacción social, aportando nuevas evidencias de su relevancia fisiológica. Por último, realizamos experimentos que demuestran que los tres miembros de la familia Lrig, cooperarían para inhibir el crecimiento neurítico inducido por GDNF, controlando el estado de activación de su receptor tirosina kinasa Ret en células neuronales. De esta manera, en este trabajo de tesis doctoral hemos identificado nuevos determinantes moleculares relevantes para el control de la conectividad y el armado de los circuitos neuronales, a través de la regulación de procesos de crecimiento axonal y dendríticos inducidos por factores neurotróficos en el sistema nervioso central y periférico. Palabras clave: RTK, factores neurotróficos, Lrig, Sprouty4, NGF, BDNF, GDNF, Ret, TrkA, TrkB, hipocampo, ganglios de la raíz dorsal (DRG).

Tesis (Grado Doctor en Ciencias Biológicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales. Lugar de Trabajo: Cátedra de Fisiología Animal. Departamento de Fisiología. Escuela de Biología. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales. CONICET. Universidad Nacional de Córdoba. 2015 - 121 h. + CD. tabls.; figuras. Contiene Referencia Bibliográfica y Publicaciones Derivadas de la Tesis. Abstract en español e inglés.