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El presente trabajo incursiona la temática en cuanto a protecciones exteriores realizadas con tecnologías apropiadas, incorporando al bambú como material de diseño. Se reconoce una falta de generación de alternativas de protecciones exteriores y se considera que la inclusión de materiales regionales en el desarrollo de una tecnología local puede contribuir a la generación de nuevas variantes. Se detecta que existen especies de bambúes que no han encontrado un uso significativo en arquitectura y se reconoce en la Bambusa Tuldoide Munro una oportunidad para el desarrollo de esta encomienda. Este trabajo se inserta en el marco de la arquitectura del lugar y el bioclimatismo y es enfocado en el noroeste argentino. La hipótesis plantea que la exploración del Bambú, a partir de su flexibilidad, posibilita su inserción en proyectos arquitectónicos, otorgándole un nuevo uso, a través de la aplicación de tecnologías apropiadas para la obtención de alternativas de protecciones exteriores. El objetivo consiste en indagar sobre una tecnología apropiada que permita la incorporación del bambú, a partir de la exploración de su flexibilidad, en el desarrollo de protecciones exteriores y su verificación como elemento de protección. Los objetivos particulares: Proponer diseños tipológicos de protecciones exteriores realizados en bambú a través de una tecnología apropiada. Detectar las posibilidades de manipulación que brinda el bambú como elemento flexible de trabajo e identificar los inconvenientes que se presentan en el proceso constructivo del diseño propuesto. Estudiar la influencia del movimiento aparente del sol sobre el prototipo desarrollado y detectar las sombras arrojadas en el transcurso del tiempo. Se construye el conocimiento mediante el estudio y la experimentación con la materia y la materialidad, haciendo uso del diseño, la experimentación y la crítica como instrumentos en este proceso investigativo. El conocimiento se adquiere desde la propia experiencia, a través del método Fenomenológico, observando los sucesos y procesos de los fenómenos que resultan de la exploración. Se genera conocimiento mediante la acción proyectual, el proceso constructivo y la verificación del comportamiento. El desarrollo de este trabajo acercará una solución al acondicionamiento ambiental, a la sociedad le brindará un recurso de fácil acceso y en lo académico se constituirá en un aporte en cuanto a alternativas de diseño sustentable.

El objetivo del estudio fue determinar la utilidad de la proteína C reactiva (PCR) en el manejo de la neumonía adquirida de la comunidad (NAC). Se estudiaron de forma prospectiva 169 pacientes con diagnóstico de NAC. Se utilizó como criterio diagnóstico de la presencia de infiltrado en radiografía de tórax anteroposterior frente y perfil, más uno de los siguientes signos y/o síntomas: fiebre o hipotermia, rales crepitantes, tos productiva y hemocultivos o cultivo de esputo con gérmenes compatibles con el diagnóstico de NAC. La edad promedio fue de 70,96 años (rango 25-97 años). La distribución por sexo fue la siguiente femenino 52% y masculino 48%. La mortalidad observada fue 7,69 % (13/169). Se compararon dos scores de severidad de neumonía: PSI (Pneumonia Severity Index) y CURB-65 (Confusion, Urea, Respiratory Rate, Blood Preasure, Age > 65) con proteína C reactiva. Se establecieron cinco categorías de PCR: I menor a 29 mg/l, II entre 29 y 39 mg/l, III entre 40 y 59 mg/l, IV 60 y 75 mg/l y V mayores 76 mg/l. Se consideraron valores positivos mayores o iguales a 39 mg/l. Se encontró correlación entre CURB-65 y PSI y entre CURB-65 (en todas las clases de severidad) y PCR (P < 0,000), como así también entre PSI categoría IV y PCR (P < 0,007). Los valores de PCR poseen relación con respecto a la gravedad de la neumonía utilizando CURB65.

Fil:Brignoni, Mirtha. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

En resumen, nuestros resultados aportan evidencias que amplían el conocimiento sobre los potenciales mecanismos subcelulares que conducen a las arritmias de reperfusión. Pudimos comprobar que el estrés oxidativo contribuye a la alteración del ritmo cardíaco en un modelo de I/R en corazón aislado. Demostramos la presencia de modificaciones redox tanto en CaMKII como en el RyR2 durante la reperfusión postisquémica. Evidenciamos que las oxidaciones reversibles del RyR2 como la S-nitrosilación y la S-glutationilación restringen las arritmias (oxidaciones protectoras), mientras que otras oxidaciones amplifican el efecto arritmogénico de la fosforilación del canal debida a CaMKII. En miocitos aislados, pudimos demostrar que las alteraciones redox del RyR2, junto con su fosforilación por CaMKII, aumentan la actividad del canal, generando un escenario propicio para las arritmias de reperfusión. Los resultados de este trabajo de Tesis permitirían suponer que las estrategias farmacológicas y no farmacológicas que intentan reducir el estrés oxidativo causado por la I/R, podrían ser una terapéutica apropiada en las arritmias de reperfusión. Sin embargo, diversos estudios clínicos han revelado que la terapia antioxidante en este contexto no ha dado los resultados esperados (Lonborg 2015; Sinning y col. 2017; Farías y col. 2017). La limitación de estos tratamientos radicaría entre otras razones, en la falta de identificación de las fuentes de producción de ROS/RNS y/o en la incapacidad de dirigir los antioxidantes hacia los compartimentos subcelulares adecuados. Esperamos que este trabajo experimental contribuya a aclarar las bases moleculares del fenómeno arrítmico permitiendo una mejor implementación de la terapia antioxidante con el fin de resolver esta complicación frecuente de la reperfusión coronaria, la cual, por su severidad, pone en riesgo la vida de los pacientes con infarto de miocardio, enfermedad con una alta prevalencia en nuestro país y en el mundo.

Objetivo general: Estudiar las proteínas de arroz de la variedad Nutriar desde el punto de vista estructural y funcional provenientes de grano pulido e integral. Compararlas con las de una variedad de amplio uso local, de calidad tropical. Objetivos específicos: Determinar la composición proteica, cuali y cuantitativamente de la variedad Nutriar en comparación con la variedad de referencia. Explorar distintos métodos de preparación de aislados proteicos mediante la variación del pH de extracción de proteínas. Elección del método más adecuado. Caracterización estructural, nutricional y funcional de los aislados obtenidos con la metodología de elección.

En el presente trabajo de tesis se estudió la obtención de concentrados y aislados proteicos de girasol a partir del pellet residual de la industria aceitera local, y se caracterizó la funcionalidad de estos productos en relación a sus potenciales aplicaciones en la industria alimentaria y de packaging. En particular se desarrollaron métodos para la obtención de productos proteicos de girasol con distinto contenido de compuestos fenólicos con el fin de analizar la necesidad de extraer este tipo de compuestos de la formulación

1. Métodos para la evaluación de la integridad estructural del acrosoma El acrosoma almacena enzimas y proteínas cruciales para la interacción con el ovocito durante la fecundación, por lo que su evaluación resulta esencial. Las técnicas que evalúan el estado acrosomal (lectinas fluorescentes, contraste de fases, por ejemplo) no representan una alternativa accesible a los fines prácticos debido a que insumen mucho tiempo, su desarrollo es complejo o requieren de un equipo específico e insumos de alto costo que los hace inaplicables a un plan rutinario de control de calidad en los establecimientos que procesan semen porcino. Las técnicas que utilizan colorantes ofrecen una alternativa interesante tanto con fines de investigación, por su estabilidad, como con fines prácticos. Sin embargo, muy pocas de ellas han sido validadas con otras técnicas de evaluación estandarizadas. En este trabajo se evaluó la sensibilidad de la tinción Wells & Awa en detectar cambios paulatinos en la estructura acrosomal comparándola con técnicas estandarizadas como contraste de fases y Giemsa, mostrándose igualmente eficaz en dicha detección por acción de un inductor de reacción acrosómica como el ionóforo o por efecto de la conservación, lo que resulta de utilidad en los establecimientos que almacenan dosis seminales durante varios días. Las ventajas de esta técnica de tinción con respecto a otras, son la posibilidad de utilizar un simple microscopio de campo claro y la estabilidad de los preparados que hace que puedan ser guardados y observados más tarde. Por otro lado, su escaso tiempo de incubación y secado que favorece el mantenimiento de la integridad de las membranas, ofreciendo resultados más fieles y repetibles que otras tinciones de su misma clase. Estas características hacen que esta tinción posea la suficiente versatilidad para ser propuesta como de elección en los exámenes rutinarios de calidad seminal relacionados con la integridad estructural del acrosoma, tanto en la práctica diaria en los establecimientos productores de dosis de semen porcino destinadas a Inseminación Artificial, como en el laboratorio de Investigación. 2. Métodos de evaluación del estado fisiológico del espermatozoide En este trabajo se probaron las técnicas de CTC e Ionóforo de calcio A23187 con el fin de detectar, mediante técnicas microscópicas, las modificaciones estructurales de la membrana del espermatozoide como reflejo de cambios en su estado metabólico. Ambas técnicas mostraron ser eficientes en cuanto a su capacidad de diferenciar y mostrar la evolución del proceso de capacitación como consecuencia de la incubación de los espermatozoides de cerdo en medios capacitantes, obteniéndose valores de capacitación que coinciden con los habitualmente hallados en la especie porcina. 3. Rol de glucosaminoglicano heparina sobre la fisiología del espermatozoide porcino El efecto del glicosaminoglicano sulfatado heparina sobre la capacitación in vitro de espermatozoides porcinos fue evaluado mediante la observación de los patrones de fluorescencia con Clortetraciclina (CTC) y por la habilidad de los espermatozoides de experimentar una reacción acrosómica luego de la exposición a ionóforo de calcio. Los espermatozoides incubados durante 120 minutos en condiciones capacitantes (MC) suplementados con 10 μg/ml de heparina mostraron un incremento del número de espermatozoides capacitados (patrón B) y reaccionados sin afectarse su viabilidad, lo que determinó la elección de estas condiciones experimentales para los trabajos siguientes. Los espermatozoides fueron incubados en MC sin albúmina, calcio o bicarbonato o combinaciones en presencia de heparina. En los medios sin calcio o bicarbonato la capacitación fue basal no mostrando variaciones ante la presencia de heparina. En ausencia de albúmina, la presencia de calcio o bicarbonato estimularon la capacitación, que luego se incrementó con el agregado de heparina. Estos resultados sugieren que la heparina aumenta la capacitación in vitro de los espermatozoides de cerdo sólo en condiciones capacitantes. 4. Naturaleza de la interacción de la heparina con el espermatozoide Se evaluó la presencia, topología y dinámica de las proteínas de unión a heparina (HBP) en el espermatozoide de cerdo. La distribución de HBP se analizó mediante fraccionamiento subcelular utilizando heparina biotinilada seguida de una detección colorimétrica. Las HBP fueron detectadas como proteínas pertenecientes a la membrana periacrosomal del espermatozoide del tipo periféricas e integrales. Mediante microscopía de fluorescencia indirecta de espermatozoides incubados con heparina biotinilada se evidenció la unión de heparina al espermatozoide en diferentes estados fisiológicos. Se observaron dos patrones de fluorescencia diferentes (A y B), que probablemente se correspondan con los estados de espermatozoides no capacitados y capacitados, respectivamente; como se estableció mediante la inducción de la reacción acrosómica de espermatozides capacitados con ionóforo de calcio y la observación del aumento de la fosforilación de la proteína p32. En el patron A, predominante en muestras de espermatozoides no tratados, la fluorescencia se localizó en la región posacrosomal; en el patrón B, observado con mayor frecuencia en muestras de espermatozoides incubados en condiciones capacitantes, la fluorescencia ocupó la región acrosomal. Durante la incubación en medio capacitante (TALP), los espermatozoides mostrando el patrón B aumentaron paulatinamente comparados con espermatozoides no incubados o incubados en condiciones no capacitantes indicando que las modificaciones de los patrones de fluorescencia de HBP están probablemente relacionados con la capacitación. Cuando los espermatozoides fueron incubados con 100 μg/ml de heparina biotinilada en presencia o ausencia de heparina no marcada se observó que los sitios de unión a heparina se localizaron principalmente en la región acrosomal del espermatozoide de cerdo de manera específica y saturable. El efecto in vitro de la heparina observado en este trabajo indica que este glicosaminoglucano sulfatado, normalmente presente en el tracto reproductivo femenino podría cumplir un rol importante en el proceso de fecundación en porcinos. No se observaron diferencias cuando espermatozoides no tratados fueron permeabilizados con metanol o tritón antes de la tinción, lo que indica que las HBP se localizan en la superficie espermática. El efecto de la heparina sobre la fosforilación en tirosina de proteínas espermáticas por efecto de la capacitación fue también analizado encontrándose una disminución en la fosforilación de la proteína p32 en presencia de heparina. Esto sugiere que el incremento de la capacitación mediado por este glucosaminoglicano podría involucrar un proceso de señalización celular alternativo o ser el resultado de la pérdida de estas proteínas por efecto de la RA, hecho que se observa aumentado con el agregado de heparina en los medios de incubación. El hallazgo de que la heparina se une al espermatozoide en forma diferencial de acuerdo con su estado fisiológico es una nueva evidencia de la remodelación de la superficie de la membrana por efecto de la capacitación y podría proveer un método útil y relativamente simple para la evaluación in vitro de las modificaciones del estado fisiológico del espermatozoide porcino. 5. Caracterización del rol de la heparina en la unión del espermatozoide a la Zona Pelúcida. Con el fin de evidenciar el efecto de la heparina sobre la unión de los espermatozoides a ZP se utilizó el método del cubreobjetos cubierto de ZP. Al adicionar espermatozoides incubados bajo condiciones capacitantes y en presencia de heparina a los cubreobjetos, el número de espermatozoides unidos fue significativamente menor comparado con aquellos incubados en ausencia de heparina. En los cubreobjetos no tratados, el número de espermatozoides unidos fue mínimo y no varió significativamente a lo largo de todo el proceso de incubación, independientemente de la presencia de heparina. Este resultado se podría explicar considerando el hecho de que la ZP contiene cierto número de dominios polisulfatados que posiblemente competirían con la heparina. La mayoría de las HBP permanecen unidas al espermatozoide después de la capacitación, interviniendo algunas de ellas, como AWN-1 y DQH, en la unión primaria del espermatozoide a la ZP y es a estas proteínas a las que se uniría la heparina, hecho que sugiere que los glucosaminoglicanos de su tipo presentes en el tracto femenino podrían estar implicados en la preselección espermática y así contribuir a la prevención de la polispermia. 6. Las HBP como indicadoras de fecundidad en verracos En este trabajo se procedió a la detección de posibles diferencias en la unión a heparina de muestras de espermatozoides de animales con diferentes grados de fecundidad in vivo. Se procedió a clasificar inicialmente a un grupo de reproductores porcinos, cuyos parámetros de calidad seminal no mostraban diferencias en relación con los valores habituales de normalidad preestablecidos para la especie porcina, en dos grupos (I y II) en función de diferencias en cuanto a su Tasa de Parto (hembras paridas/hembras inseminadas), perteneciendo al grupo I los individuos con una tasa de fecundidad mayor o igual al 70 % y al grupo II, individuos con una tasa menor al 70 %. Muestras de semen de cada individuo fueron evaluadas mediante microscopía de fluorescencia indirecta utilizando la técnica de incubación de espermatozoides previamente incubados en condiciones capacitantes, con heparina biotinilada y revelado con streptavidina-FITC. Se encontraron diferencias significativas en cuanto al porcentaje de espermatozoides que muestran patrón B de fluorescencia en 2 animales pertenecientes al grupo II, los que muestran un porcentaje significativamente menor de fluorescencia en la región acrosomal en todos los tiempos de incubación testeados. Considerando que las HBP AWN-1, AQN-3 y DQH son retenidas en la membrana espermática luego de la capacitación interviniendo como receptores primarios en la unión ovocito-ZP, una disminución en la densidad de estas proteínas sobre la membrana del espermatozoide porcino podría estar reflejada en la disminución en el porcentaje de espermatozoides que unen heparina en la región acrosomal luego de capacitados (patrón B) observada en algunos individuos. En función de los valores de fecundidad inferiores observados para estos mismos animales este resultado estaría identificando, dentro de una población de reproductores aptos para la Inseminación Artificial, una subpoblación de individuos con menor capacidad fecundante (subfecundidad), característica que no se refleja en los análisis comúnmente utilizados para la evaluación de la calidad del semen porcino destinado a la Inseminación Artificial.

Fil:Muschietti, Jorge P.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

En neuronas, así como en otras células somáticas la progresión a través de la fase G1 del ciclo celular depende de la actividad de las enzimas CDK4 y CDK6, y luego, de CDK2. La familia INK4 incluye a cuatro polipéptidos, p16, p15, p18 y p19, los cuales se unen e inhiben específicamente CDK4/CDK6. A pesar de ser estructuralmente redundantes e igualmente potentes como inhibidores, cada uno se expresa diferencialmente durante el desarrollo en ratón. Además, distintos inhibidores han sido implicados en la inducción de la diferenciación terminal, la senescencia y la apoptosis. La gran diversidad en el patrón de expresión, sugirió que estos inhibidores podrían tener funciones específicas de tipo celular o de tejido. En el sistema nervioso central p19 es una de las INK4 mayoritaria. Es expresada tempranamente durante el desarrollo en el cerebro y allí su expresión es mantenida en la adultez. Aparte de sus roles fisiológicos, las proteínas INK4 se encuentran comúnmente perdidas o inactivadas por mutaciones en diversos tipos de cáncer. En este estudio, investigamos el rol de p19 en la respuesta celular frente al daño del DNA con distintos agentes genotóxicos en células de neuroblastoma humano SHSY5Y y otros tipos celulares. Al contrario de las otras INK4, solamente la expresión de p19 es periódica a lo largo del ciclo. En este trabajo demostramos que p19 es la única INK4 cuya expresión es inducida por UV en células de neuroblastoma, que esta inducción se da a nivel transcripcional y que requiere parcialmente la síntesis de proteínas. Además, observamos la translocación de p19 desde el citoplasma al núcleo luego de la irradiación con UV. La sobrexpresión de p19 claramente reduce la apoptosis inducida por el daño y mejora la eficiencia de la reparación del DNA. Experimentos llevados a cabo con mutantes de CDK4, con mimosina o en células Saos-2, sugieren que estos efectos de p19 serían independientes de su rol como controlador del ciclo. Además, con ensayos clonogénicos y de supervivencia celular, observamos que p19 influencia la sensibilidad celular a largo plazo y confiere resistencia al estrés genotóxico. Estos resultados descubren una nueva función de p19 como regulador del nivel de apoptosis inducida por daño en el DNA, sugiriendo que p19 protegería a las células de morir por apoptosis mediante el aumento en la eficiencia de reparación del DNA. Postulamos que p19 pertenecería a una red proteica integrando la reparación del DNA, la apoptosis y los checkpoints del ciclo celular para mantener la integridad genómica.

Las proteínas que unen ácidos grasos (FABPs) constituyen una amplia familia de proteínas pequeñas intracelulares (14-15kDa). Las mismas se expresan en distintos tejidos de manera específica, pudiendo expresarse más de una isoforma en un mismo tejido. Este es el caso de FABP1 (o LFABP, isoforma hepática) y FABP2 (o IFABP, isoforma intestinal). Ambas son expresadas en células epiteliales diferenciadas del intestino en elevadas concentraciones relativas. FABP1 se encuentra también presente en riñón e hígado (sitio donde fue descubierta). Estas FABPs han sido caracterizadas como importantes para el transporte y metabolismo de ácidos grasos (AG) provenientes de la dieta y la circulación. Unen ligandos hidrofóbicos, como los AG de cadena larga, con elevada afinidad y los transportan hacia diversos destinos subcelulares como la mitocondria, el retículo, el núcleo, para cumplir funciones en la β-oxidación, síntesis de quilomicrones, regulación de la transcripción génica, entre otros. El intestino es el lugar de contacto con la mayor cantidad de microorganismos y es también el principal sitio de ingreso de nutrientes al organismo, favorecido por la gran superficie de contacto con el lumen intestinal brindado por las vellosidades. Las FABPs presentan su máximo nivel de expresión en el yeyuno, sitio donde se absorben los ácidos grasos. En bibliografía ya ha sido descripta la distribución normal de FABPs a lo largo del eje longitudinal del intestino, así como también la expresión en el eje cripta-vellosidad. Existen patologías del intestino delgado, llamadas enteropatías, con diverso grado de malabsorción de nutrientes, como es el caso de Enfermedad Celíaca (EC). Una patología con características autoinmunes que se desencadena ante la exposición a proteínas del gluten en individuos genéticamente susceptibles y que involucra una atrofia vellositaria, infiltración linfocitaria e hiperplasia de las criptas. En el presente trabajo buscamos profundizar en el conocimiento de las funciones específicas que desempeñan las FABPs del enterocito desde dos aristas: 1) El análisis de la expresión de FABPs en un contexto de enteropatía del intestino delgado ampliamente caracterizada, como lo es EC. 2) El estudio de las interacciones proteína-proteína de las dos isoformas de FABPs con otras proteínas presentes en el enterocito. Dichos trabajos fueron llevados a cabo a través de ensayos in silico, in vitro, en cultivo e in vivo, con muestras de pacientes y modelos animales. Como resultado encontramos una localización alterada de las FABPs en EC. Allí observamos expresión de FABPs en las criptas, hallazgo que nos llevó a considerar que estas proteínas en un contexto patológico pueden presentarse aún en células indiferenciadas y proliferativas. Esto fue confirmado en un modelo murino con alteraciones funcionales similares a EC. FABP2 se expresa en células en proliferación activa, mientras que FABP1 no. En modelos murinos FABP1 y FABP2 knock out, se vió que la ausencia de una de las FABPs no altera la localización ni la expresión de la isoforma remanente. Tampoco se observó alteración en la tasa de proliferación celular. Los ensayos de interacción proteína-proteína llevados a cabo en una línea celular modelo, nos permitieron poner de manifiesto la interacción de FABP1 con Heat Shock Protein 60, Calreticulina, Creatina quinasa B, α- sinucleína, así como también tener evidencias funcionales de la interacción con los factores de transcripción de la familia de los PPARs (receptores activados por proliferador de peroxisoma). Para el caso de FABP2 observamos la interacción con PPARγ. Estos resultados fueron complementados con análisis de acoplamiento (docking) molecular dirigido por análisis electrostáticos de los pares de proteínas interactuantes. En conjunto, los resultados presentados nos permiten tener una mayor comprensión de las funciones que cumplen las FABPs a nivel intestinal y complejizan el espectro de interrelaciones moleculares que llevarían a las FABPs a formar parte de mecanismos diversos además de los estrictamente vinculados al metabolismo lipídico.