Catálogo de publicaciones

La vitamina B12 o cobalamina es un metabolito esencial en los seres humanos debido a que interviene en dos reacciones celulares fundamentales, una de ellas es la síntesis del aminoácido metionina a partir de la homocisteína (síntesis de ADN) y la otra es la conversión del metilmalonil-CoA en succinil-CoA (utilización de propionil-CoA para formar ATP). La cobalamina es sintetizada exclusivamente por algunas cepas bacterianas y arqueas. Si bien, algunas cepas de bacterias productoras de vitamina se encuentran en el rumen del ganado vacuno, ovino y caprino, no forman parte de la microbiota intestinal del hombre y otros animales. Por este motivo, estos últimos están obligados a incorporar cobalamina a través de alimentos de origen animal o productos farmacéuticos. En este contexto, la carencia en vitamina B12 puede desarrollarse como consecuencia de dietas vegetarianas estrictas y/o malnutrición, y se encuentra acentuada en el embarazo, la lactancia, la ancianidad y la niñez. El género Lactobacillus se presenta, dentro del grupo de Bacterias Lácticas, como productor de nutracéuticos debido a la capacidad de sintetizar metabolitos esenciales tales como vitamina B12. En esta Tesis Doctoral, se estudiaron a niveles genómico y bioquímico dos cepas del género Lactobacillus productoras de vitamina B12, con el fin de caracterizar las vías de producción de cada cepa y determinar así las condiciones óptimas de producción de dicha macromolécula. Paralelamente, se realizaron estudios in silico a partir de genomas depositados en la base de datos que permitieron la búsqueda de genes que codifican para proteínas necesarias para la síntesis de vitamina B12 en otras cepas del género aisladas de diferentes nichos ecológicos. Por último, se comprobó la biodisponibilidad del metabolito producido en un sustrato alimenticio de origen vegetal como el extracto acuoso de soja mediante un modelo experimental de avitaminosis nutricional en ratones hembras y su progenie. En este trabajo de tesis se demostró por primera vez que Lactobacillus reuteri CRL 1098 y Lactobacillus coryniformis CRL 1001 poseen diferencias genéticas puntuales que llevan a rutas biosintéticas diferentes para los últimos pasos de ensamblaje de la vitamina, siendo la vía más comúnmente hallada la de la cepa CRL 1001. Los estudios bioquímicos mostraron una mayor producción de vitamina con el agregado de cobalto y 5,6-dimetilbencimidazol al medio de cultivo para ambas cepas, siendo mayor la producción con el agregado de L-treonina sólo para la cepa CRL 1001. Los estudios in vivo demostraron que la cepa CRL 1001 crecida en extracto acuoso de soja fue capaz de revertir el déficit de vitamina B12 en la dieta de ratones hembras y sus crías. Los estudios realizados en este trabajo de tesis sientan las bases bioquímicas, fisiológicas y funcionales de la producción de vitamina B12 por cepas lácticas con el fin de desarrollar en un futuro una etapa de investigación aplicada tendiente a obtener un paquete tecnológico exitoso.

La tesis analiza, desde una perspectiva multiescalar, las vinculaciones entre las prácticas de territorialización y producción del habitar y los procesos de ciudadanización desplegados por los habitantes de un asentamiento popular de la Ciudad de Buenos Aires a lo largo de su conformación.

Resumen temporalmente no disponible. La presente obra no cuenta con resumen provisto por el autor.

Esta investigación se inscribe en la problemática de la reestructuración agroalimentaria en las últimas dos décadas, considerada como parte de procesos más amplios de consolidación de un nuevo régimen mundial de acumulación. Bajo un nuevo modo de regulación, las formas concretas que asume el desarrollo del capitalismo agrario se caracterizan por la construcción de espacios donde los territorios locales son conectados con otros espacios de transformación y distribución que conforman cadenas agroindustriales, atravesadas por la presencia protagónica del capital transnacional. En especial para regiones cuya producción se orienta a mercados de calidad, las exigencias ambientales y de trabajo definen procesos de desarrollo regional diferencial en términos productivos, de participación de los sujetos agrarios y de articulación entre los eslabones de la cadena. El impacto de las transformaciones se expresa en cambios en el mercado, necesidad de integración y de mayor competitividad, profundización de requerimientos de capitalización y nuevas condiciones de producción. Para regiones de capitalismo dependiente estos fenómenos conllevan reorientaciones en la organización de los procesos productivos, así como en la función misma de la agricultura. El conjunto de estas transformaciones conduce a consideraciones sobre las nuevas condiciones de reproducción social de los sujetos agrarios, en este caso las unidades familiares capitalizadas. La existencia de situaciones no lineales ni estáticas refuta las visiones de homogeneidad, generando terrenos analíticos y empíricos que comportan una ruptura con análisis de tipo polarizados viabilidad/inviabilidad, para la construcción de tipologías que permitan contemplar otras realidades.

Tesis para optar al título de Doctor en el Área Ciencias Agropecuarias, de la Universidad de Buenos Aires, en marzo de 2021

Esta investigación es una contribución al conocimiento de la transición de cazadoresrecolectores a sociedades agro-pastoriles en Antofagasta de la Sierra (Puna Meridional Argentina), desde los artefactos líticos tallados. En cuanto al lapso abordado, si bien los límites impuestos fueron arbitrarios, se eligieron teniendo presente que el tratamiento de la transición requiere de conjuntos de datos que involucren periodos de tiempo lo suficientemente largos como para incluir los cambios postulados. De esta forma, se inicia ca.5500 años AP, ya que a partir de este momento se registran cambios importantes, por ejemplo, en la organización de los asentamientos, en el arte rupestre y en las evidencias de prácticas productivas. Finaliza ca.1500 AP, con ocupaciones agro-pastoriles plenas. En este trabajo se pretendió, a partir de un aspecto concreto y particular como es la tecnología lítica, tratar con la variabilidad en el comportamiento humano. Específicamente, se encaró este problema a través del análisis de la variabilidad y el cambio en artefactos líticos tallados y en las técnicas que los produjeron. Se plantearon los siguientes objetivos generales: 1) aportar conocimientos sobre el proceso que llevó al surgimiento de economías agro-pastoriles en Antofagasta de la Sierra, a partir del estudio de conjuntos líticos de nuevos sitios y de componentes ya procesados o aún sin procesar de sitios ya conocidos; 2) generar información sobre la variabilidad tecnológica y tipológica de los conjuntos líticos de los sitios, desde una perspectiva sincrónica y diacrónica; 3) evaluar la incidencia de las condiciones paleoambientales, del sedentarismo y de las prácticas agrícolas/pastoriles sobre las estrategias de aprovisionamiento, manufactura, uso y descarte de los conjuntos de artefactos líticos y 4) utilizar la información producida conjuntamente con otras líneas de evidencia en estudio por el equipo de investigación (recursos faunísticos, restos vegetales, etc.) para establecer las características generales del proceso de cambio, en base al estudio comparado de asociaciones contextuales intra-sitio y de contextos inter-sitio.

Esta tesis busca contribuir al conocimiento sobre los procesos de cambio social ocurridos en el valle de Yocavil (provincia de Catamarca) y en otros ámbitos del NOA durante los siglos XIII al XVII, a través del análisis de la evidencia material vinculada a las actividades metalúrgicas desplegadas por las sociedades locales. En particular abordaremos esta temática desde la producción y uso de los mismos y sus modificaciones en el tiempo. Este período temporal abarca dos episodios de conquistas sucesivas, la inca y posteriormente la española, procesos que buscamos indagar en los cambios asociados a la metalurgia, tecnofactura sensible a los mismos debido a tratarse de una tecnología orientada al poder político y religioso.

El poli-3-hidroxibutirato (PHB) es un poliéster de origen bacteriano obtenido bajo condiciones de estrés nutricional en el medio de cultivo. Se acumula en el citoplasma dentro de gránulos y representa para el microorganismo una reserva de carbono y poder reductor. El PHB es un polímero biodegradable, biocompatible, de regular cristalinidad y moderada resistencia mecánica, utilizable en varias aplicaciones una vez procesado, como por ejemplo en la fabricación de envases plásticos completamente biodegradables. Al obtenerse además a partir de fuentes de carbono naturales renovables, representa un material promisorio para reemplazar a los plásticos sintéticos en algunas áreas. En este Trabajo se optimizó en primer lugar un medio de cultivo para la obtención de PHB a partir de una cepa de Azotobacter chroococcum aislada de una muestra de suelo, para luego estudiar el efecto de distintas condiciones y sistemas de cultivo sobre el contenido de biomasa celular y PHB. Se estableció el efecto de la tasa de aireación y de la relación carbono/nitrógeno bajo cultivo en fermentador sobre el contenido de biomasa, PHB, rendimientos de biomasa y PHB a partir de la glucosa consumida, velocidad especifica de crecimiento y de formación de PHB. Un modelo para la obtención del rendimiento real de PHB que utiliza los datos experimentales del contenido de PHB, rendimiento de biomasa y el valor del rendimiento teórico fue aplicado a los resultados obtenidos. Por último, para contribuir al conocimiento de un área poco investigada en Azotobacter sp., se estudió el efecto de las condiciones fermentativas sobre las propiedades fisicoquimicas del PHB obtenido (cristalinidad, resistencia mecánica, estabilidad térmica y especialmente sobre el peso molecular relativo, factor que afecta en mayor medida al PHB en cuanto a su utilización). Tres potenciales aplicaciones del PHB fueron desarrolladas: i) como película de soporte para el cultivo de epidermis, ii) como película para el peleteado de semillas de alfalfa utilizadas como inoculante y iii) como matriz para el microencapsulamiento de enzima celulasa para su uso como aditivo en ensilado de pasturas.

La adición de NADH a partículas submitocondriales de corazón bovino incubadas con rotenona, antimicina o cianuro estimula la producción de anión superóxido. La generación de anión superóxido en el area ubiquinona-citocromo b de la cadena respiratoria es fuértemente inhibida por el agregado de cianuro (Boveris, l977). Por lo tanto, la actividad en presencia de cianuro demuestra que en la cadena respiratoria existe otro sitio capaz de producir anión superóxido, permitiendo además medir la producción en este sitio sin interferencias. La presencia de adrenalina y NADH origina una reacción autocatalítica, catalizada por las partículas submitocondriales. El peróxido de hidrógeno es un intermediario en este proceso. Se estudió la producción de anión superóxido en el area NADH deshidrogenasa midiendo la formación de adrenocromo inhibible por Mn-superóxido dismutasa al incubar partículas submitocondriales con succinato, cianuro y ATP. En estas condiciones los electrones provenientes de la oxidación del succinato a fumarato circulan por la cadena respiratoria en sentido inverso, es decir, desde la ubiquinona a la NADH deshidrogenasa. Se encontró una actividad constante de 0.8 a 1 nmol / min . mg de proteína a pH 7.4. La actividad es sensible al agregado de rotenona, lo que demuestra que la producción de anión superóxido se realiza del lado sustrato del sitio de acción del inhibidor. La dependencia de esta actividad con la energía hace que sea inhibible por oligomicina (inhibidor de la ATPasa) y por el desacoplante FCCP. Los títulos de inhibición para rotenona, oligomicina y FCCP (0.25 nmol/mg de prot., D.0 nmol/mg de prot y 0.3 μM) son similares a los encontrados para la inhibición de la actividad de succinato-NAD reductasa (0.3 nmol/mg de prot, 0.8 nmol/mg de prot y 0.2 μM). Se concluye que ambas actividades requieren la intervención del flujo invertido de electrones en igual magnitud. Las mediciones realizadas determinando la reducción de citocromo c acetilado para la detección del anión superóxido, en presencia de NADH y rotenona, permitieron obtener valores similares para la actividad productora de anión superóxido en el area NADH deshidrogenasa. El agregado de cantidades crecientes de rotenona a partículas submitocondriales incubadas con NADH y antimicina presenta una respuesta bifásica. Bajas concentraciones de rotenona estimulan la producción de anión superóxido al producir probablemente un aumento en el grado de reducción de la flavoproteína sin inhibir totalmente el flujo de electrones hacia el segmento ubiquinona-citocromo b. El aumento de la concentración de rotenona impide la reducción de la quinona inhibiendo la actividad inicial en un 60%. La actividad observada en el area NADH deshidrogenasa tiene un valor cercano al 50% de la actividad determinada en el area ubiquinona-citocromo b. La producción de anión superóxido determinada independientemente en ambos sitios es aditiva entre pH 7 y 8.2. El efecto de la producción de este radical se estudió en la forma epimastigote del Trypanosoma cruzi, ya que estas células carecen de catalasa. Los experimentos realizados demuestran que no hay actividad de glutation peroxidasa dependiente de Se ni peroxidasas que utilicen dadores artificiales de hidrógeno tales como guayacol pirogalel, diaminobencidina y citocromo c. Se observó una débil actividad peroxidática dependiente de ascorbato resistente al calor, por lo que se sospecha que no es enzimática. La concentración de superóxido dismutasa (68 mU/10^8 células) es alrededor de 1/20 de la actividad observada en hepatocitos. Las deficiencias observadas en el sistema encargado del metabolismo de los intermediarios de la reducción parcial del oxígeno permite estudiar el efecto de drogas que estimulen la producción de estos compuestos. Se estudió la producción de anión superóxido y peróxido de hidrógeno desencadenada por el agregado de la quinona β-lapachona, ensayándose el efecto producido por el isómero biológicamente inactivo, α-lapachona. Esta última no tuvo actividad sobre epimastigotes enteros ni sobre fracciones subcelulares. El agregado de β-lapachona sobre células enteras estimula la liberación de peróxido de hidrógeno y anión superóxido. La adición de esta quinona sobre homogenados mostró mayor actividad cuando se utilizó NADH como reductor que al utilizar NADPH. La fracción mitocondrial (40% de proteína inicial) incrementó la producción de anión superóxido y peróxido de hidrógeno 4.5 y 2.5 veces respectivamente por el agregado de β-lapachona al sistema incubado con NADH. El efecto sobre la fracción microsomal fue notable pero menos importante que sobre la fracción mitocondrial. En este caso la actividad depende del agregado de NADPH como reductor, aumentando la producción de intermediarios de la reducción parcial del oxígeno alrededor de dos veces. Dada la hidrofobicidad de las quinonas, y la especificidad de sustrato para la reducción parcial del oxígeno se puede concluir que las membranas mitocondriales son responsables del 92% del peróxido de hidrógeno formado por los epimastigotes de Tripanosoma cruzi. Las deficiencias en el metabolismo de intermediarios de la reducción parcial del oxígeno y, por otra parte, la presencia de esteroles 5,7-diénicos cuya síntesis es activa en el Trypanosoma cruzi, proveen dos blancos excelentes para el tratamiento de la enfermedad de Chagas, causada por este hemoparásito.

Fil:Bonetto, Carlos A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.