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La detección del AL es cada vez más solicitada en la práctica médica. Varias determinaciones han sido propuestas para su detección, siendo el TTPA una de las más utilizada en el paso de screening. Estudios previos han demostrado que la sensibilidad del TTPA para detectar la presencia del AL varía considerablemente, según el tipo de reactivo utilizado. Es por este motivo que decidimos realizar el presente estudio comparativo, en el cual evaluamos la sensibilidad de 19 reactivos comerciales de TTPA de diferentes marcas y presentaciones frente a 56 plasmas de pacientes que reunían criterios de LA (+). Discutiremos a continuación las conclusiones del análisis efectuado. La sensibilidad al AL disminuye conforme aumenta el contenido de fosfolípidos del reactivo. Observamos una correlación negativa entre la concentración de fosfolípidos y la prolongación de las pruebas de TTPA. Stevenson y otros autores postularon que la presentación de los fosfolípidos procoagulantes sobre la superficie de liposomas uniformemente organizados, aumenta la interacción de los mismos con los factores de coagulación. Usando un analizador de partículas ultrafinas, no hemos podido demostrar que a menor dispersión de tamaño liposomal, hubiera mayor sensibilidad para detectar los plasmas AL (+). El origen de los fosfolípidos (vegetal, animal o sintético) y el tipo de activador de contacto en los reactivos de TTPA, no parecen poder explicar las diferencias encontradas en la sensibilidad al AL, dado que el mismo tipo de activador y de fosfolípidos fueron encontrados tanto entre los reactivos de mayor sensibilidad, como en los de menor sensibilidad. Los reactivos con fosfolípidos de origen animal no mostraron ser más sensibles que aquellos con fosfolípidos de origen vegetal. En conclusión, según los datos obtenidos en el presente estudio, la característica más importante a la hora de seleccionar un reactivo de TTPA para el estudio de AL, es su concentración de fosfolípidos totales. Mientras menor sea la concentración total de fosfolípidos, mayor será la sensibilidad del TTPA frente al AL.

El Síndrome de Sjögren (SS) es una enfermedad autoinmune crónica que se caracteriza por una progresiva disfunción secretoria con escasa correlación con el daño tisular en las glándulas. No hay evidencias claras sobre su patogenia y el tratamiento es sintomático con un alivio meramente marginal. Se ha propuesto que previo al ataque autoinmune hay una pérdida en el equilibrio homeostático de las glándulas con activación de células acinares que podrían aumentar la susceptibilidad del tejido a una respuesta autoinmune. Los ratones diabéticos no obesos (NOD) son un modelo muy interesante para estudiar el SS ya que desarrollan una disfunción secretoria con pérdida de temprana de la homeostasis glandular con una moderada infiltración linfocitaria. Los macrófagos, son células plásticas, que tienen un papel central en el mantenimiento de la homeostasis tisular por su función fagocítica para la remoción de productos de degradación y células apoptóticas, función que realizan en forma ‘silenciosa’ y rápida evitando una respuesta inflamatoria deletérea. El péptido intestinal vasoactivo (VIP) es un neurotransmisor autonómico pro‐secretorio y vasodilatador, que tiene efecto trófico sobre acinos y, junto a sus receptores VPAC, se localiza en células inmunes con un marcado efecto anti‐inflamatorio e inmunomodulador. Basados en los efectos pro‐secretorios y tróficos del VIP sobre los acinos como de sus propiedades anti‐inflamatorias hipotetizamos que la liberación local de VIP por diversos tipos celulares podría modular procesos apoptóticos e inflamatorios en la interacción de células inmunes con células epiteliales contribuyendo al mantenimiento de la homeostasis tisular glandular. Asimismo, hipotetizamos que estos mecanismos modulados por VIP se verían alterados en condiciones de ruptura de la homeostasis tisular. En este trabajo en primer lugar se estudio el papel del VIP en el mantenimiento de la homeostasis glandular en el modelo murino NOD. Se observo que hay una disminución en la expresión de VIP en las glándulas salivales de ratones NOD que no se observa en la cepa control. La pérdida en la expresión del VIP endógeno se ve asociada con la pérdida de células acinares. Por otro lado, el ‘clearance’ de acinos apoptóticos por macrófagos se encuentra desregulado en los macrófagos NOD. Sin embargo durante el proceso fagocítico dichos macrófagos adquieren un perfil alternativo de activación. Finalmente, se analizó la contribución del sistema VIP/VPAC en un modelo in vitro de co‐cultivo de células mononucleares totales o monocitos de pacientes con síndrome de Sjögren y células epiteliales de glándula submaxilar (HSG). En primer lugar caracterizamos el sistema VIP/VPAC en monocitos y su capacidad fagocítica de células HSG apoptóticas donde observamos que los monocitos de pacientes con SS presentan incrementada la expresión del receptor VPAC2 ausente en los monocitos controles y su capacidad fagocítica se ve alterada. No solo fagocitan en menor cantidad sino que adquieren un perfil fenotípico inflamatorio que no puede ser modulado por VIP. En los co‐cultivos se estudió el perfil funcional y fenotípico de ambos tipos celulares luego de la interacción. Nuestros resultados indican que la interacción puede modular tanto a las células epiteliales como a los monocitos contribuyendo a la generación de un microambiente proinflamatorio, donde el VIP fue capaz de modular parcialmente dicho microambiente.

El objetivo del presente trabajo de tesis es contribuir en el hallazgo de compuestos terapéuticos frente a la enfermedad de la diarrea viral bovina (DVB) y a las parasitosis debidas a Trypanosoma cruzi y Trypanosoma brucei. Para cumplir con dicho objetivo, se realizó un estudio exhaustivo y multidisciplinario que comprendió la síntesis, evaluación biológica y estudios computacionales de tiosemicarbazonas de 1-indanonas N 4 -aril sustituidas (N 4 -TSCs). Se sintetizaron y caracterizaron 30 N 4 -TSCs, de las cuales 24 son descriptas por primera vez en el marco de esta tesis. Los compuestos preparados poseen diferentes sustituyentes en el núcleo indánico y en la posición para del arilo unido al N 4 con el fin de evaluar la variación de la actividad según el patrón de sustitución. La síntesis fue llevada a cabo mediante dos metodologías, una convencional y otra utilizando tecnología de microondas, por lo cual se pudo determinar qué método resulta más ventajoso según tiempos y rendimientos de reacción. Se determinaron las actividades de las N 4 -TSCs frente al virus de la DVB (VDVB), a partir de las cuales se realizó un estudio de la relación estructura-actividad en el que se identificaron patrones estructurales claves para la actividad de las N 4 -TSCs como agentes anti-VDVB. El compuesto más activo fue identificado como probable inhibidor de la ARN polimerasa viral dependiente de ARN por lo cual se llevaron a cabo estudios computacionales de docking y de dinámica molecular con esta enzima. Los resultados computacionales obtenidos permitieron conocer en detalle las características de esta serie de compuestos que serían determinantes para su actividad. Por otro lado, se llevó a cabo la evaluación de las N 4 -TSCs frente a T. cruzi para las formas epimastigote, tripomastigote y amastigote. Los resultados obtenidos mostraron que cuatro compuestos fueron activos frente a los tres estadios del parásito. De acuerdo a los antecedentes en literatura para este tipo de compuestos como inhibidores de la enzima cruzipaína, varias N 4 -TSCs fueron evaluadas frente a esta enzima. Los compuestos no mostraron ser inhibidores de la cruzipaína. Se llevaron a cabo estudios in vitro frente a T. brucei, los cuales mostraron que varios compuestos fueron activos frente al parásito. Uno de los derivados (N 4 -TSC 8) se destacó por su potencia y se estudió su capacidad de inhibir las proteasas del parásito. Los resultados indicaron que estas enzimas no serían el blanco de acción del compuesto. Teniendo en cuenta los valores de actividad se realizó un estudio de relación estructuraactividad cuantitativa (QSAR), el cual permitió establecer una posible conformación activa y determinar las propiedades de las cuales dependería la actividad biológica estudiada. Asimismo, mediante distintos ensayos se estudió por citometría de flujo el tipo de muerte celular que induce el compuesto 8 en T. brucei. Los resultados indicaron que el compuesto desencadena en los parásitos un proceso similar a la apoptosis. Por otro lado, se evaluó la citotoxicidad de todos los compuestos sobre células de mamífero, no evidenciándose efectos tóxicos a las máximas concentraciones que pudieron ser investigadas las N 4 -TSCs. A partir de los resultados de la presente tesis se identificaron compuestos activos como antivirales y antiparasitarios, se estudió la relación estructura-actividad, se realizaron estudios del mecanismo de acción y del tipo de muerte celular. Asimismo, se generaron modelos teóricos de QSAR, y se llevaron a cabo estudios de docking y dinámica molecular que permitieron conocer las características moleculares que estarían implicadas en la acción de estos compuestos. Finalmente, los resultados alcanzados permiten sentar bases para continuar con el diseño de nuevas moléculas antivirales y antiparasitarias. La información obtenida podrá ser aplicada en otras estrategias de la Química Medicinal como el cribado virtual de librerías de compuestos y la posterior farmacomodulación de los candidatos más prometedores para el tratamiento de la enfermedad de la DVB y las tripanosomiasis.