El ajo (Allium sativum L.) posee la capacidad de acumular elevadas concentraciones de selenio (Se), un elemento esencial con propiedades antioxidantes. El objetivo fue evaluar la biofortificación de ajo con Se y determinar su metabolización mediante la caracterización cuali- y cuantitativa de las especies, de manera de posicionarlo como un alimento de alto valor nutricional. Se llevaron a cabo dos tipos de ensayos. A campo, donde se estudiaron 4 clones (Rubí, Gostoso, Nieve y Unión) y 3 dosis: 0, 600 y 1200 g (Se) ha-1, con un diseño de parcelas al azar, 3 repeticiones. En macetas, donde los clones Rubí y Nieve fueron estudiados evaluando cuatro dosis: 0, 5, 10 y 15 kg (Se) ha-1, con un diseño de parcelas al azar, 3 repeticiones y 3 muestreos. Además, se realizó un estudio diferencial de los 4 clones, en macetas, aplicando 0, 15, 30 y 45 kg (Se) ha-1 bajo las mismas condiciones indicadas anteriormente. Las muestras de cada ensayo fueron peladas, picadas, liofilizadas y almacenadas hasta el momento del análisis. El peso molecular de las Se-proteínas se evaluó mediante cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) con detección ICP-MS. Finalmente la cromatografía de intercambio aniónico (AEC) se acopló a ICP-MS para evaluar los Se-aminoácidos. No se hallaron diferencias significativas en el rendimiento de los bulbos entre los tratamientos aplicados cuando las dosis de Se fueron bajas, pero sí se observó una acumulación de Se significativa entre clones tratados con Se. La SEC mostró la incorporación de Se a fracciones de alto (37-5 kDa) y de bajo peso molecular (2-4 kDa). La AEC mostró mayoritariamente la presencia de Se-metilselenocisteína. El ajo posee la capacidad de acumular grandes cantidades de Se, transformándolo en metabolitos anticancerígenos como la Se-metilselenocisteina, por lo que puede considerarse como una importante fuente de Se para la dieta humana.