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"El presente trabajo se ocupa del estudio de un concepto polisémico, la interoperabilidad. Dentro de las distintas dimensiones sobre las que se la puede estudiar, la interoperabilidad es observada en su dimensión organizacional, en virtud que se entiende que la misma resulta ser la más crítica de todas las dimensiones. En lineas generales la interoperabilidad organizacional se ocupa de la coordinación y alineación de los procesos que poseen las organizaciones para que éstas puedan concretar objetivos en común, como por ejemplo la prestación de servicios utilizando la tecnología. La Administración Pública entendida como un conjunto de organizaciones que deben brindar dichos servicios, deben trabajar para ello de modo colaborativo y coordinando, alineando los distintos procesos involucrados. El objetivo principal que poseen en común las organizaciones públicas resulta la mejora continua de la calidad de vida de los ciudadanos, en consecuencia, debe optimizar los servicios mediante los cuales se relaciona con ellos. Asimismo, los ciudadanos no son el único actor social con el cual se relacionan la Administración Pública, además de ellos se encuentran las empresas. El valor de mejorar las relaciones entre las Administración Pública y las empresas se fundamenta en el modelo actual de sociedad, es decir, la sociedad del conocimiento. En la sociedad industrial la producción se encuentra alimentada por materia prima representada por commodities tales como oro, acero, carbón, petróleo, granos, maderas, etc. Los Estados poseen un cierto rol en la regulación de las materias primas, pero la velocidad de las industrias que usan estos commodities no exige del Estado más que una regulación justa para la explotación de la materia prima y el desarrollo de la producción. En la sociedad informacional, o del conocimiento, si bien lo anterior resulta válido, la materia prima no es ni el acero, ni el oro, es la información. La velocidad de la industria de las tecnologías de información y comunicación en sensiblemente mayor a la de las industrias basadas en la producción de bienes, por lo cual, no sólo las empresas requieren una regulación justa, sino que además y sobretodo necesitan al Estado como socio estratégico. Esto es, acceder a la información que maneja la Administración Pública para que pueda ser explotada."

174 p.

El petróleo crudo es una mezcla compleja de hidrocarburos alifáticos y aromáticos con cantidades variables de azufre, nitrógeno, oxígeno y trazas de metales como níquel, vanadio y cromo. La demanda de hidrocarburos de petróleo crudo genera preocupación mundial debido a la contaminación, especialmente en ecosistemas acuáticos. Estudios sobre contaminación con petróleo crudo han revelado que su toxicidad es causada principalmente por la fracción acomodada en agua de petróleo (WAF). Al igual que con otros xenobióticos, los efectos tóxicos de la WAF en los organismos se manifiestan primero a nivel bioquímico-molecular y luego se transmiten a los siguientes niveles de organización biológica. Entre los organismos bentónicos de agua dulce, los anfípodos Hyalella curvispina son considerados importantes bioindicadores de la calidad del ecosistema acuático por su sensibilidad a diferentes xenobióticos. La explotación de los recursos energéticos es la principal actividad económica en la provincia de Neuquén. A pesar de las regulaciones y programas de monitoreo, se han detectado hidrocarburos de petróleo, como naftaleno y pireno, en muestras de agua y sedimentos de diferentes sitios de Neuquén. Por lo tanto, los objetivos de este trabajo fueron (i) caracterizar la composición de hidrocarburos de WAF y su disipación en el tiempo (ii) evaluar los efectos subletales producidos por la exposición a WAF en dos poblaciones de H. curvispina. La WAF se obtuvo a partir de petróleo crudo extraído del pozo Chachahuen, ubicado en la cuenca neuquina. Se trabajó con anfípodos de H. curvispina colectados en el lago Los Barreales (LB) y Arroyo Durán (AD), éste último con antecedentes de contaminación por hidrocarburos. Se evaluó el efecto de la exposición a 0,0014 mg/L y 0,35 mg/L de WAF durante 6, 24 y 48 h en el contenido de glutatión (GSH), y las actividades enzimáticas de glutatión S-transferasa (GST), catalasa (CAT) y citocromo P450 monooxigenasa (CYP450). La concentración total de hidrocarburos en la WAF fue de 2,50 mg/L y sus principales componentes fueron C9-C36 n-alcanos (TPHs). En menor proporción se determinaron hidrocarburos aromáticos de un solo anillo (BTEX) y bajas concentraciones de hidrocarburos poliaromáticos (PAHs), particularmente naftaleno. Se ajustaron modelos exponenciales simples a los datos de disipación de cada componente de WAF. El tiempo de vida media (t½) de los TPHs fue 71 ± 32 h. Los t½ estimados para tolueno (65 ± 11 h), benceno (76 ± 16 h) y etilbenceno (88 ± 19 h) fueron menores que el t½ de m- y p-xileno (128 ± 25 h) y el o-xileno (217 ± 45 h), éste último significativamente diferente de los otros componentes. El t½ de naftaleno no fue estimado dado que a las 6 h su concentración estaba por debajo de los límites de detección. Las muestras de LB y AD mostraron valores de temperatura y pH similares. La conductividad eléctrica en AD fue aproximadamente 7 veces mayor que en LB, mientras que el oxígeno disuelto fue menor. La concentración de hidrocarburos en sedimentos fue 27 veces mayor en AD respecto a la determinada en LB, indicando que el área estaba muy contaminada con n-alcanos. Sólo se determinaron hidrocarburos en las muestras de agua del sitio AD. Las concentraciones de BTEX y PAHs estuvieron bajo los niveles de detección en ambos sitios. Tanto en las muestras de agua como de sedimentos de AD, las concentraciones de plaguicidas analizados estuvieron bajo los niveles de detección. La toxicidad aguda y crónica a WAF en anfípodos de LB fue de 0,33 mg/L y 0,018 mg/L, respectivamente. Por otro lado, no se registró mortalidad de anfípodos recolectados en AD tanto en exposiciones agudas como en crónicas a WAF (2,50 mg/L). Los anfípodos provenientes de AD presentaron, respecto a los organismos de LB, una significativa disminución en el contenido de GSH y en la actividad basal GST y un significativo aumento en actividad CAT y CYP450. La respuesta a la exposición a WAF fue diferente en ambas poblaciones. En anfípodos provenientes de LB, tanto el contenido de GSH como la actividad de CAT y CYP450 aumentaron en forma significativa a su respectivo control en todos los tiempos de exposición a WAF evaluados. Por otro lado, la actividad GST en esta población disminuyó de forma significativa luego de 24 y 48 h de exposición a WAF. En la población AD se observó un aumento significativo en el contenido de GSH a las 6 h de exposición a WAF. Por el contrario, la actividad CAT disminuyó en forma significativa a las 24 h de exposición y las actividades GST y CYP450 no mostraron diferencias significativas respecto a su control en ninguno de los tiempos de exposición. El análisis de la distribución de frecuencias de la actividad CYP450 mostró que el 100% de los anfípodos de AD presentaron actividades superiores al intervalo de confianza superior de la media (IC95%) de LB. Diferentes isoformas de esterasas (EST) fueron identificadas en anfípodos de las poblaciones AD y LB. A través de estudios moleculares se amplificaron fragmentos de alrededor de 710 pb del gen CYP450 en anfípodos de LB controles y expuestos a WAF. A partir de la curva de distribución de sensibilidad de especies (SSD) a WAF en organismos acuáticos se determinó que 0,46 mg/L afectaría al 10% de las especies acuáticas, incluidos los anfípodos de LB. Los resultados de este trabajo de tesis señalan que los t½ de los componentes de WAF preparada con petróleo de la región variaron entre 65-200 h. El valor de 96 h-CL50 de H. curvispina de LB, comprendido dentro del percentil 10 estimado a partir de la SSD, indica su alta susceptibilidad a WAF. Sin embargo, la ocurrencia de tolerancia a WAF en los anfípodos de AD indicaría su capacidad de adaptación a ambientes contaminados a través del aumento de actividad del sistema de detoxificación. Los parámetros bioquímicos estudiados podrían ser utilizados como biomarcadores de contaminación por petróleo. La SSD permitió establecer niveles de referencia de toxicidad para WAF.

Maestría conjunta con el Instituto de Altos Estudios Espaciales "Mario Gulich"-CONAE.

El tomate Solanum lycopersicum es una de las hortalizas más cultivadas en el mundo bajo invernadero. En el cinturón hortícola platense la “mosca blanca de los invernaderos” (Trialeurodes vaporariorum) es una plaga de difícil manejo, siendo el control químico el más difundido. En la Argentina la producción hortícola tiene como desafío aumentar la productividad y mejorar aspectos para el manejo de las plagas siguiendo las pautas de Buenas Prácticas Agrícolas, el objetivo general del presente trabajo fue analizar el efecto de la aplicación exógena de fitohormonas sobre el control de mosca blanca y el rendimiento del cultivo de tomate. La evaluación de antixenosis o no preferencia de T. vaporariorum en tres variedades comerciales de tomate: Eterei, Yigido y Elpida, mediante la prueba de libre selección de hospedero, para ello se contabilizó el número de adultos de mosca blanca encontradas por planta luego de la infestación de 96 hs. El estudio de antixenosis inducida en tomate, se realizó mediante una aplicación exógena con las fitohormonas (ABA, AJ, AS y Gib), y 24 hs después fueron infestadas con mosca blanca. Transcurrido 96 hs se procedió a contabilizar los adultos de mosca blanca por plántula. La evaluación del efecto de las fitohormonas sobre el crecimiento y desarrollo de las plántulas de tomate, se observaron los parámetros de altura (cm), diámetro (cm), número de hojas e índice de verdor (unidades SPAD). El ensayo conducido bajo condiciones protegidas se utilizó la variedad comercial Elpida y la fitohormona ABA donde se evaluaron los siguientes parámetros: el crecimiento en altura, diámetro, número de hojas e inflorescencias, rendimiento (kg/planta) y el control de mosca blanca en estado adulto y ninfa, las plantas fueron tratadas con ABA al momento de aparición del insecto. Se monitoreó la plaga mediante observación directa sobre el cultivo. Utilizando un diseño experimental al azar (DCA) con 8 repeticiones para el estudio de antixenosis (constitutiva e inducida) los datos fueron analizados con ANOVA de una vía, los parámetros de crecimiento se analizaron con ANOVA factorial. En invernáculo se planteó un DCA con 16 repeticiones los datos de la variable número de adulto y ninfa de mosca blanca por hoja/foliolo se analizaron mediante la prueba de test de Kruskal Wallis. El rendimiento y crecimiento morfológico de la planta de tomate fueron analizados mediante ANOVA, todas las pruebas estadísticas se compararon con medias del test de Tukey utilizando el programa estadístico InfoStat 2014. En los resultados de antixenosis inducida se observó como las hormonas ácido abscísico (ABA) y el ácido salicílico (AS) mejoraron la resistencia en las plantas del cultivar Elpida; así mismo mostró diferencias significativas de crecimiento en altura (11,61 cm), diámetro (0,45 cm), número de hojas (4 hojas/plántula) e índice de verdor (38,33 SPAD) en comparación con las variedades comerciales Yigido y Eterei. Los análisis estadísticos mostraron que la aplicación exógena de ABA obtuvo resultados significativos en reducir la incidencia del insecto de mosca blanca en su estadio de adulto y ninfa. En el desarrollo del crecimiento las plantas no mostraron diferencias significativas en comparación con las plantas testigos en altura (190 cm), diámetro del tallo (1,45 cm), número de hojas (23 hojas/planta) e inflorescencias (5 inflorescencias/planta). El rendimiento total mostró valores con diferencias no significativas en las plantas con aplicación foliar de ABA (7,87 kg/planta) en comparación con las plantas testigo (7,05 kg/planta). De acuerdo con los resultados obtenidos bajo estas condiciones de invernáculo, se concluye como las aplicaciones exógenas de la fitohormona ABA podría ser una alternativa para el control de la mosca blanca por su control del número de insecto sin perjudicar el crecimiento y rendimiento de la planta de tomate variedad Elpida.

La alfalfa es una leguminosa forrajera de gran relevancia para la alimentación animal. Su asociación simbiótica con el rizobio eficiente, Ensifer meliloti, se ve afectada en suelos ácidos. Hace algunos años se aislaron de suelos del centro de Argentina, un grupo de rizobios recientemente denominados Rhizobium favelukesii, tolerantes a la acidez, muy competitivos para la nodulación de alfalfa, pero ineficientes en la fijación biológica de nitrógeno (FBN). Estas características lo posicionan como un rizobio más parasítico que simbiótico, y lo convierte en un potencial factor de riesgo al competir con el rizobio eficiente, E. meliloti. Con el objetivo de maximizar la producción agrícola, es importante optimizar los inoculantes biológicos. En este contexto, la adaptación de los rizobios a los suelos ácidos y los mecanismos por los cuales esta adaptación es posible, resultan relevantes tanto desde el punto de vista biotecnológico como agronómico.

El Trypanosoma cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas, es un parásito con un complejo ciclo de vida que transcurre entre un insecto vector y mamíferos entre ellos el hombre. Durante este ciclo, el parásito alterna entre formas infectivas y no infectivas, y entre formas replicativas y no replicativas. Las únicas formas replicativas en el huésped mamífero son formas intracelulares, por lo tanto, para poder establecer la infección el parásito debe obligatoriamente internalizarse en las células del huésped y diferenciarse a formas replicativas. En el presente trabajo se caracterizaron parcialmente dos moléculas parasitarias y se demostró su participación en el proceso de intemalización. Estas moléculas son una glicoproteina símil lectina de 67 kDa galactosa específica y una proteína flagelar ligante de calcio de la familia de las calflaginas. Se propone además un sistema que permite estudiar las interacciones entre receptores y antirreceptores que ocurren entre el parásito y las células humanas.

El crecimiento tumoral depende en gran medida en la interacción de las células tumorales con el microambiente que las circunda. Entre otras células que componen el estroma tumoral se encuentran precursores locales y precursores estromales o células madre mesenquimales (MSCs) que se alojan en el tumor tras ser reclutadas desde la médula ósea. En base a esto surge la pregunta: ¿cuáles de los factores del microambiente tumoral son los responsables de la migración de MSCs provenientes de médula ósea? Utilizando un modelo in vitro del microambiente tumoral representado por medios condicionados (MC) por muestras humanas de adenocarcinomas mamarios realizamos un estudio proteómico de citoquinas y quimioquinas sobre 8 muestras tumorales, destacándose IL-6, GRO, IL-8 y MCP-1 como los factores más representados de los medios condicionados por tumores, siendo el perfil muy similar entre todas las muestras tumorales. En busca de un modelo que remede el aporte de factores quimiotácticos por parte de los tumores humanos, se crecieron tumores ortotópicos en ratones nude combinando una línea tumoral mamaria humana con fibroblastos humanos adultos. Utilizando este modelo, se logró cuantificar las MSCs llegadas tras migración local luego de ser inyectadas de modo peritumoral. En una validación técnica y funcional in vitro, IL-6 resultó ser quimiotáctico para MSCs pero en concentraciones mucho mayores a las encontradas en los tumores; sin embargo no se descarta un rol de IL-6 directo o indirecto. Por otra parte los ejes quimiotácticos de GRO, IL-8 y MCP-1 no revelaron un aporte significativo sobre la migración de MSCs. Por otro lado, de un análisis estadístico y funcional comparando los MC provenientes de tumores y tejidos adyacentes libres de patología, resultó una lista de factores diferencialmente representados de los cuales MIP-3α o proteína inflamatoria de macrófagos 3 alfa surge como el factor más relevante como posible mediador del reclutamiento de las MSCs hacia el tumor. La validación funcional del eje quimiotáctico MIP-3α / CCR6 sugiere que este eje estaría involucrado, al menos en parte, en la migración de MSCs hacia tumores. En suma, hemos logrado identificar un factor relevante para la modulación de la migración de las MSCs hacia el tumor, factible de ser utilizado en estudios posteriores para el diseño de terapias celulares contra el cáncer.

La respuesta inmune celular, y en particular la mediada por linfocitos T, juega un rol fundamental en el control de la infección por Trypanosoma cruzi. En pacientes con infección crónica ha demostrado estar relacionada con la progresión desde el estadio asintomático a la cardiopatía chagásica. No obstante, la complejidad del parásito y de su interacción con el sistema inmune del hospedero dificultan la identificación y caracterización de epitopes activadores de linfocitos T. En este contexto, el estudio de la respuesta frente a la infección por T. cruzi es de interés estratégico, y en particular, el uso de métodos novedosos para el análisis de respuesta inmune celular desarrollada por el paciente en la fase crónica de la enfermedad de Chagas podría aportar elementos de valor para el desarrollo de vacunas profilácticas y/o terapéuticas, y el diseño de tratamientos de inmunointervención. El objetivo general de este trabajo de Tesis fue el estudio de la respuesta inmune de memoria mediada por linfocitos T generada frente a la infección por T. cruzi en humanos, y se abordó mediante dos estrategias complementarias. La primera implicó el desarrollo de un protocolo para la expansión ex vivo de linfocitos T de memoria específicos contra el parásito, a partir de la estimulación in vitro de células de sangre periférica de pacientes con enfermedad de Chagas crónica, con y sin sintomatología cardíaca. La respuesta específica de los cultivos se midió como proliferación celular y secreción de IFN-γ y GM-CSF. En primera instancia, se logró determinar que cuando la población de partida son células mononucleares totales, la duración de la estimulación inicial con lisado del parásito tiene una relación directa con la expansión (en nuestro caso, indeseada) de linfocitos T vírgenes activados in vitro, que no tienen relación con la respuesta inmune generada in vivo. Partiendo de linfocitos T CD4+ de memoria separados magnéticamente, se demostró que un estímulo inicial con lisado del parásito es ventajoso sobre uno con un mitógeno inespecífico, porque expande selectivamente las células patógeno-específicas, y genera así líneas policlonales con especificidad estable en el tiempo. Adicionalmente, se validó la utilización de linfocitos B autólogos inmortalizados como células presentadoras de antígenos de T. cruzi en ensayos de desafío in vitro. Los resultados destacaron la importancia de la utilización de múltiples métodos de detección para la selección de cultivos con respuesta específica. A partir de líneas policlonales generadas a partir de linfocitos T CD4+ de memoria de un paciente asintomático, se realizó un ensayo de dilución límite para generar líneas monoclonales T. cruzi-específicas, de utilidad inmediata en el estudio de la respuesta T en el contexto de la enfermedad de Chagas. La segunda empleó una estrategia bioinformática de predicción de epitopes, acoplada a validación in vitro por ELISPOT para IFN-γ en muestras de CMN de pacientes con enfermedad de Chagas. Se identificaron 7 secuencias de T. cruzi que son o contienen epitopes T que activan linfocitos T de memoria. Experimentos con eliminación magnética de poblaciones celulares mostraron que esta respuesta involucra a las poblaciones CD4+ y CD8+ . Mientras que tres de los péptidos contienen epitopes ya descritos, los otros 4 contienen epitopes novedosos. Para uno de los pacientes se demostró que las células secretoras de IFN-γ frente a uno de los péptidos tienen un fenotipo predominantemente TCM, que indica la renovación activa de esta población específica in vivo. No se encontró relación entre la respuesta frente a estos epitopes y la existencia de sintomatología cardíaca. Los resultados presentados contribuyen al conocimiento sobre la respuesta anti-T. cruzi mediada por linfocitos T, en especial en cuanto a los linfocitos T colaboradores, un campo de investigación que, al día de hoy, se encuentra sub-explorado.

Tesis para obtener el grado de Magíster Scientiae en Sanidad Animal, de la Universidad Nacional de Mar del Plata, en septiembre de 2009