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-Se estudió el efecto de citocininas, análogos estructurales de las mismas,inhibidores del metabolismo y factores del crecimiento sobre el balance hídrico de hojas aisladas de maiz. Los resultados obtenidos fueron los siguientes: a —Ia cinetina y la zeatina promovieron la apertura estomática, con un efecto máximo por parte de la cinetina a 5E10-6 M y la zeatina a 5ElO-7 M, Hubo un mayor efecto en la oscuridad, el cual aumentó con el curso del tiempo. La sensibilidad a las drogas disminuyó con el tiempo de incubación. b - Ambas citocininas promovieron la capacidad de absorción hídrica y el peso seco por unidad de área foliar. c - La cinetina aumentó la transpiración y absorción del agua en hojas aisladas de plantas sometidas a sequía. d —La cinetina y la luz revirtieron parcialmente la inhibición de la transpiración producida por Cl Na (lO-3_10-5 M). e —Un tratamiento de "temple" contra la sequía al estado de semilla aumentó la transpiración y absorción de agua en hojas aisladas de plantas sometidas a sequía. f —Los análogos estructurales de 1a cinetina:adenina, adenosina, 8-azaadenina, puromicina, guanina, 8-azaguanina, 6-bencilamino-9-tetrahidropirano-2-yl)—9 H-purina , y las pirimidinas: uracilo y tiouracilo, aumentaron en variado grado y en forma aditiva la capacidad de absorción hídrica. Guanina y azaguanina no promovieron a1 peso seco; adenina, puromicina y tiouracilo no promovieron 1a capacidad de absorción hídrica. g -La actinomicina D y la ribonucleasa pancrática promovieron la capacidad de absorción hídrica y estimularon inicialmente la capacidad transpiratoria, pero luego llegaron a inhibirla. Ambas sustancias en especial 1a actinomicina, deprimieron el peso seco en experimentos de larga duración. En ambos casos el agregado de cinetina tuvo un ligero efecto aditivo. h -D-threo cloramfenicol (10-5 -10-4 M) inhibió notablemente 1a transpiración la cual fué revertida parcialmente por cinetina. A1 cabo de varias horas de incubación con el inhibidor hubo una recuperación y posterior estimulación de 1a transpiración y de 1a capacidad foliar de absorción hídrica. El peso seco fué muy inhibido, pero 1a cinetina alivió el efecto. E1 isómero L no tuvo un efecto apreciable. i -El ácido indolacético (5,10-6 -10E-4 M)estimuló temporariamente 1a transpiración, inhibió ligeramente 1a capacidad de absorción hídrica y promóvió los pesos secps en experimentos de larga duración. No hubo interacción con cinetina. j -El ácido giberólico (5.10-6M) tuvo un notable efecto sobre 1a capacidad de absorción hídrica, pero interactuó con cinetina. Se concluye que 1a cinetina, la zeatina y posiblemente otros análogos estructurales intervienen en el mecanismo regulatorio del balance hídrico en las plántulas de maíz. Ia analogía entre las respuestas de las plantas tratadas con cinetina y "templadas" sugiere la intervención de mecanismos de acción similares. Las citocininas y productos de degradación de los ácidos nucléicos actuarían a través de un efecto revitalizante del metabolismo. Se propone además, que las plantas podrían regular el contenido de cininas de sus diversos órganos y tejidos para poder mantener el equilibrio en condiciones de "stress" hídricos

La citocromo P450 reductasa (CPR) es una flavoproteína que coordina la transferencia de electrones desde el NADPH hacia distintas hemoproteínas, como los citocromo P450 (CYPs), el citocromo b5, y la hemooxigenasa. Los CYPs se encuentran involucrados tanto en la síntesis de compuestos endógenos, tales como esteroles y ácidos grasos, como en la activación y detoxificación de compuestos exógenos. Pese a que existen numerosos genes CYP funcionales en mamíferos, existe sólo una CPR en cada especie. La producción de una clase especial de esteroles, entre los que se incluyen el ergosterol y otros metil-esteroles, es una importante vía metabólica involucrada en el crecimiento y la viabilidad celular de microorganismos eucarióticos, como protozoos u hongos, que se encuentra ausente en mamíferos. En T. cruzi se han identificado y caracterizado bioquímicamente una familia de genes integrada por tres putativas CPRs, llamadas TcCPR-A, TcCPR-B y TcCPR-C, cuyas secuencias poseen los dominios conservados para FMN, FAD y NADPH. TcCPR-A carece del domino hidrofóbico amino terminal. La sobreexpresión de TcCPR-B en epimastigotes incrementa su resistencia a drogas, sugiriendo su participación en el metabolismo de detoxificación del parásito. En la búsqueda de un rol fisiológico para las TcCPRs, en el presente trabajo se analizó el efecto de la sobreexpresión de las mismas, centrándose principalmente en su posible participación en la biosíntesis de esteroles. Una cepa de Saccharomyces cerevisiae deficiente para CPR fue utilizada en ensayos de complementación con las TcCPRs recombinantes de T. cruzi. La baja tasa de crecimiento y la disminución de la resistencia al ketoconazole de la levadura mutante, lograron revertirse parcialmente sólo con TcCPR-B y -C. La sobreexpresión de TcCPR-A en células de epimastigotes resulta letal, produciendo un aumento del contenido de ADN, una morfología aberrante y numerosas alteraciones ultraestructurales. La sobreexpresión de TcCPRB y -C incrementó la biosíntesis de ergosterol y la relación NADP+/NADPH. Los parásitos transgénicos con mayor contenido de ergosterol presentaron un aumento en el orden de membrana, con la respectiva disminución de la endocitosis. Notablemente, TcCPR-B se ha encontrado en reservosomas mientras que TcCPR-C se ha localizado en el retículo endoplasmático. Los resultados obtenidos en esta Tesis junto al correspondiente análisis bibliográfico permiten proponer un rol para las TcCPRs en mecanismos de estrés (TcCPR-A), en reacciones de detoxificación (TcCPR-B) y en la biosíntesis de esteroles (TcCPR-C).